我國黃酒釀造微生物的研究進展

我國黃酒釀造微生物的研究進展

劉 程1，謝廣發2，3，孫劍秋1，*，鄒慧君2，3，王睿麒1，3，錢 斌2，3，臧 威1，周建弟2，3，壽凰蓉1，白逢彥4（1.紹興文理學院生命科學學院，浙江紹興312000；2.國家黃酒工程技術研究中心，浙江紹興312000；3.浙江古越龍山紹興酒股份有限公司，浙江紹興312000；4.中國科學院微生物研究所真菌學國家重點實驗室，北京100101）

對黃酒的浸米漿水、酒藥、酒母、酒曲、酒醪中微生物資源和其他米酒微生物資源的研究進展進行綜述，并總結了黃酒微生物育種技術的發展成果。基于我國黃酒微生物的研究現狀，利用現代生物技術提升黃酒微生物的研究水平，全面、深入和系統地研究黃酒微生物資源、多樣性、系統發育、生態分布、釀造功能、菌種選育及其環境微生物對黃酒生產的影響等諸多課題，對于我國黃酒產業健康發展具有重要理論意義和應用價值。

黃酒，微生物，育種

黃酒（Chinese rice wine）是源于中國的世界三大著名古酒之一［1］，具有酒精度低、酒性醇厚、營養豐富、風味獨特、品種多樣等特點［2］。我國的黃酒生產主要集中在江浙滬地區，尤其以糯米為主要原料、用鑒湖水釀造的優質紹興酒，最能夠代表現代黃酒工業的發展水平。

黃酒采用邊糖化邊發酵的“雙邊發酵”技術生產，在釀造過程中淀粉酶的糖化功能與酵母菌的發酵特性平衡作用，保證了糖化與發酵兩個過程相互協調、同時進行［3-4］。“雙邊發酵”過程，就是由各種微生物完成的生物化學反應過程。在微生物酶的催化下，釀酒原料被降解并轉化形成酒精及其他各種風味成分，微生物酶的生物催化功能在黃酒生產中具有極其重要的作用，直接關系到釀酒的產量和質量［5］。黃酒釀造過程中復雜的物質變化，幾乎都是在不同微生物產生的各種酶系作用下完成。黃酒釀造與許多其他傳統釀造食品一樣都屬于開放式發酵［6］，即使接種純種微生物，在發酵過程中也不可避免的會有

外來微生物侵入，因此多種微生物混菌發酵是黃酒釀造微生物作用的基本特點。可是就整個生產過程來說，其中一些主要微生物類群發揮主導作用。

追根溯源，我國黃酒釀造技術擁有5000年以上悠久發展史［7］，但是關于黃酒的科學認知僅有近50年的時間［1］。黃酒釀造技術基礎理論研究的不足，困擾著我國黃酒工業生產水平的提升。本文對我國黃酒微生物方面的現有研究成果進行綜述，對進一步深入開展黃酒微生物的基礎研究具有積極意義。

1 與黃酒有關的微生物

1.1 浸米漿水中的微生物

黃酒釀造包括篩米、浸米、蒸飯、落缸、前酵、后酵、壓榨、煎酒和貯存等諸多環節［8］，其中浸米是黃酒正式發酵前的重要步驟。通過浸米，可以使大米吸水膨脹以利于蒸煮，并獲得酸性米漿水［9］。在傳統紹興酒工藝中，米漿水作為投料用水被回收用于黃酒釀造［10］。一般認為，米漿水中氨基酸、維生素等可以被酵母菌細胞利用，而其中多種有機酸使發酵在最初階段即具有一定的原始酸度，可以抑制雜菌生長，保證酵母菌的正常發酵。毛青鐘等［11］發現，米漿水內微生物種類極其豐富，包括細菌、酵母菌和霉菌等類群；漿水中的有機酸（絕大部分是乳酸）主要是由乳酸桿菌發酵產生［12］。如果漿水中優勢細菌的種類發生變化，可能對黃酒發酵過程產生影響［13］。

1.2 黃酒酒藥中的微生物

傳統黃酒酒藥又稱小曲、白藥、酒餅，是以秈米等作為主要原料，在適宜的條件下培養后自然發酵而成的黃酒釀造用糖化發酵劑，具有糖化發酵力強、用藥量少、方法簡單、易于保存、使用方便等優點。比較有代表性的酒藥，包括紹興酒藥、寧波酒藥、蘇州甜酒藥、上海崇明“八二曲”、常州曲藥等［14］。在我國南方的一些小型黃酒企業或農村，通常使用傳統酒藥釀制黃酒［5］。酒藥內蘊含的豐富菌種資源（表1）主要源于陳藥粉接種，保證優良菌株代代相傳［15］。本課題組曾對浙江紹興的古越龍山、會稽山、塔牌、沈永和、女兒紅及鑒湖等六個品牌酒藥樣本內酵母菌資源進行系統研究，結果發現扣囊復膜孢酵母（Saccharomycopsis fibuligera）在六個品牌黃酒酒藥內的分布占有絕對優勢［16］。

1.3 黃酒酒母中的微生物

黃酒是一種含有酒精的發酵酒，需要大量酵母菌的參與來完成釀造過程，酵母菌的數量和質量對于黃酒釀造特別重要［18］。酒母，即“黃酒之母”，是由少量酵母菌逐漸擴大培養后制成的酵母醪液，可以為黃酒釀造提供所需要的大量酵母菌細胞的發酵劑。酒母在黃酒發酵醪液內繁殖的過程中，產生酒精并可以形成一些影響黃酒質量的風味物質，所以說沒有酒母就沒有黃酒。淋飯酒母是紹興黃酒生產中非常重要的酒母類型，淋飯酒母制作過程中微生物變化復雜［19］，主要涉及酵母菌、乳酸菌和一些霉菌（表2）。

1.4 黃酒酒曲中的微生物

酒曲是以小麥、大米等糧食或麩皮等糧食副產物作為主要原料，在適當的水份和溫度條件下培養后，制成的含有大量具有糖化和發酵功能的各種微生物及其有關活性酶的糖化發酵劑。在黃酒釀造過程中，酒曲內的微生物或活性酶主要發揮糖化功能，將釀酒原料中的淀粉分解為葡萄糖，供酵母菌發酵利用而產生酒精；在制曲過程中形成的曲香及其積累的代謝產物，對于黃酒風格的形成起著十分重要的作用［5］。自然培養的酒曲內種類豐富，其中的真菌類群對于酒曲的糖化功能至關重要，所以近年來人們比較重視酒曲內真菌多樣性的研究（表3）。江南大學陸健研究組采用傳統分離培養方法和RISA、DNA序列分析等技術，對紹興黃酒麥曲中的真菌組成進行了比較深入的分析［20-24］；于麗娟等［25］研究了南通白蒲黃酒麥曲中真菌群落結構，結果發現與紹興黃酒麥曲中真菌種群差異較大。據此，也可推測，不同地域生產的麥曲生產特性可能存在差異，進而影響黃酒的釀造質量與產品風格。

表1 黃酒酒藥中的微生物Table1 The microorganisms in the xiaoqu of ricewine

表2 黃酒酒母中的微生物Table2 The microorganisms in the yeast starter of ricewine

表3 黃酒酒曲中的微生物Table3 The microorganisms in the jiuqu of ricewine

續表

1.5 黃酒醪液中的微生物

我國黃酒釀造技術具有悠久的發展歷史，不同地區的黃酒生產形成了各自的釀造方法和獨特風格［3］。黃酒釀造屬于開放式發酵，主要源于酒曲、酒母及其他生產環境或工具設備的各種微生物類群存在于醪液內（表4），主導完成糖化和發酵過程中發生的極其復雜的物質變化。一般認為，酒曲提供的霉菌主要發揮糖化作用，源于酒母的酵母菌具有重要的發酵活性，但是近年來關于黃酒微生物的研究結果表明，黃酒醪液內細菌尤其是乳酸菌類群可能對黃酒生產的順利進行具有重要影響，而且對黃酒風味的形成也起到一定作用［28-30］。

表4 黃酒醪液中的微生物Table4 The microorganisms in the mash of ricewine

續表

1.6 米酒中的微生物

米酒又稱甜酒，一般以優質米為主要原料，經過微生物的酸化、糖化、酒化和酯化等一系列生化過程及其代謝的協調作用釀制而成，營養豐富、風味獨特、甘飴可口［36］。米酒作為我國古老的酒種之一，在我國南北方均有釀造，尤其以湖北孝感等地的米酒最為有名。基于米酒的釀制工藝與產品特性等，各地的米酒均應該屬于傳統發酵型黃酒范疇［37］。向文良等［36］利用AFLP指紋圖譜技術對四川傳統米酒發酵過程中原核微生物演替規律進行研究，結果發現隨著酒曲的接入米酒醅中原核微生物伴隨米酒理化因子的動態變化而發生群落演替。各種有益微生物是米酒釀造的決定因素，酒香主要來源于各種微生物的混合發酵，菌種（表5）間的相互作用、組成比例及其代謝關系、代謝產物等，對米酒的質量和風味都有著直接影響［38］。

2 黃酒微生物選育

微生物育種技術是提高產品質量和產量、增加產品類型的重要手段［41］，我國的黃酒企業及相關技術人員一直重視黃酒微生物的選育工作。黃酒生產用微生物菌株與其他工業微生物一樣，主要有兩個來源，從釀酒樣本中分離篩選得到即選種或者對保藏菌株進行遺傳改良獲得即育種。

由于黃酒企業的研發基礎比較薄弱，通過對研發條件要求較低的傳統分離篩選方法獲得優良生產菌株的菌種選育技術，是企業人員優先考慮的技術方向。謝廣發等［42］采用TTC法、CO2失重法并結合釀酒實驗，從淋飯酒母中分離篩選到快速發酵的釀酒酵母GY-9，用于機械化黃酒生產能夠提高成品酒的酒精度、縮短發酵周期。高永強等［43］將分離自會稽山的香雪酒中酵母菌，經過酵母水實驗、錐型瓶發酵、耐酒精、耐高溫、速釀酒母制作和錐型瓶模擬大缸發酵實驗等，篩選到了耐高酒精度、耐高濃度糖的酵母菌株。糖化菌對于黃酒釀造原料的生物轉化非常重要，為豐富純種麥曲糖化菌種資源，從紹興多個黃酒企業的生麥曲中分離篩選到幾株米曲霉SJM-1、SJM-2、SJM-3、SJM-4，與普遍應用的蘇-16相比較，糖化力和液化力更高、釀酒性能更好［44］。由于傳統分離篩選方法操作簡單、易于應用，企業外的研究人員對這項技術也比較關注。張建煒等［45］通過不同單倍體菌株耐受能力比較和黃酒發酵酒樣中殘糖、酒精度及乙酸乙酯和異戊醇含量分析，篩選出了優良的黃酒酵母遺傳育種單倍體。楊魯君等［46］從古越龍山麥曲、酒藥、發酵醪中分離到52株真菌，通過比較菌株的耐乙醇和滲透壓能力，篩選出抗逆性強的釀酒酵母F-18，該菌株起酵速度快，對糖的轉化利用能力高，而總酸、高級醇等含量適中。從古越龍山漿水、酒藥和酒曲內分離篩選出一株植物乳桿菌，能快速提高米漿水酸度，縮短浸米時間并抑制雜菌生長，而且可以有效地降低浸米水中生物胺含量［47］。

基于自發突變原理，從釀酒樣本中可以分離篩選得到優良菌株。但是，誘變育種卻可以使黃酒微生物的突變頻率以幾何級數增加。誘變育種技術若與高效的篩選技術結合，可以大大提高育種工作效率。以不產生毒素的黃曲霉為原始菌株，經過紫外線與LiC1復合誘變、碳酸鋇誘發及自然分離方法選育到一株突變株，糖化酶和液化酶活力分別比親株提高103.46%和65.08%，釀酒性能更好，而且生產性狀能夠穩定遺傳［48］。潘麗軍等［49］對黑曲霉出發菌株進行紫外誘變、紫外線與LiC1復合誘變處理，篩選到一株高產糖化酶的正向突變株，產酶活力提高73.63%，而且該菌株的耐酸、耐酒精性能良好；連續傳代8次后，產酶活力沒有顯著差異，具有良好的酶活穩定性。可以應用于黃酒微生物誘變的理化因素很多，但是因為紫外線（UV）等可以引起染色體畸變的誘變劑不易回復突變［50］，安全簡便，是工業微生物誘變育種的最常用方法。

表5 米酒中的微生物Table5 The microorganisms in ricewine

近年來，黃酒研究人員已經認識到，傳統分離篩選方法的選種效率低，而誘變的育種勞動強度大，現代生物技術的迅速發展可能明顯提升我國黃酒微生物育種的研究水平。趙然然等［51］采用長側翼同源PCR法（LFH-PCR）構建基因敲除組件，然后把敲除組件轉入黃酒酵母細胞中，利用同源重組機制精確敲除精氨酸酶基因（CAR1）構建黃酒酵母工程菌株，敲除CAR1基因工程菌酒液中尿素含量降低72%，氨基甲酸乙酯含量降低了38%，并且該菌株的遺傳穩定性好，發酵性能與出發菌株基本一致。根據申超等［52］報道，采用融合PCR技術，將DUR3基因置于強啟動子PGKlp后構建過表達組件“URA3-PGKlp-DUR3-PGK1t-URA3”，轉化工業黃酒酵母單倍體Na（MATa），獲得單倍體工程菌所釀黃酒發酵液中尿素含量降低了55%，氨基甲酸乙酯含量降低10.9%。基因工程技術在減低黃酒中氨基甲酸乙酯產生，構建尿素吸收型工業黃酒酵母工程菌方面已經取得一定成績。但是，考慮到食品安全問題，以基因工程為代表的現代生物育種手段可能會在黃酒微生物選育工作中受到限制和制約［1］，適應進化（Adaptive evolution）策略是黃酒生產菌株育種的重要發展方向［53］。

3 總結與展望

關于我國黃酒微生物的研究已經取得一定成績，可是與白酒等其他飲料酒微生物研究相比較，還存在明顯差距［54］。許多關于黃酒微生物的研究結果還不夠深入，或者由于技術方法比較落后而直接導致研究結果可能存在偏差甚至錯誤，目前的研究成果遠不能滿足黃酒行業跨越發展對科技進步的需求。盡管RISA、DNA序列分析及其基因敲除等分子生物學技術已經開始運用于黃酒微生物的研究中［23-24，51］，但是利用現代生物技術，提升黃酒微生物的研究水平，全面、深入和系統地研究黃酒微生物資源、多樣性、系統發育、生態分布、釀造功能、菌種選育及其環境微生物對黃酒生產的影響等諸多課題，對于我國黃酒產業健康發展仍然具有重要理論意義和應用價值。

［1］徐巖，陳雙，王棟，等.中國黃酒技術研究新進展［J］.釀酒科技，2013（12）：1-8.

［2］黃亞東主編.實用釀酒技術［M］.北京：科學出版社，2011.

［3］顧國賢主編.釀造酒工藝學（第二版）［M］.北京：中國輕工業出版社，1996.

［4］楊國軍編著.紹興黃酒釀制技藝［M］.杭州：浙江攝影出版社，2009.

［5］謝廣發編著.黃酒釀造技術［M］.北京：中國輕工業出版社，2010.

［6］胡志明，謝廣發主編.黃酒［M］.杭州：浙江科學技術出版社，2008.

［7］朱寶鏞，章克昌主編.中國酒經［M］.上海：上海文化出版社，2000.

［8］傅祖康，楊國軍編著.黃酒生產200問［M］.北京：化學工業出版社，2010.

［9］李海霞，何國慶，樓鳳鳴，等.黃酒釀造中浸米漿水有機物組成及其微生物富集的研究［J］.中國食品學報，2011，11（8）：168-174.

［10］康明官編著.黃酒和清酒生產問答［M］.北京：中國輕工業出版社，2003.

［11］毛青鐘，陳細丹.黃酒浸米漿水表面微生物的研究［J］.江蘇調味副食品，2009，26（3）：19-21.

［12］毛青鐘.黃酒浸米漿水及其微生物變化和作用［J］.釀酒科技，2004b（3）：73-76.

［13］毛青鐘，俞關松.黃酒浸米漿水中優勢細菌的不同對發酵的影響［J］.釀酒，2010，37（5）：69-73.

［14］杜士良.漫談黃酒專用小曲［J］.釀酒科技，2003（4）：40-42.

［15］毛青鐘，俞關松，陳郛.傳統黃酒小曲制作過程微生物及產香的變化［J］.中國釀造，2006（6）：55-57.

［16］臧威，謝廣發，孫劍秋，等.紹興黃酒酒藥中酵母菌的物種資源［J］.菌物學報，2015，34（6）：1078-1084.

［17］劉振民，駱承庠.江米酒微生物研究［J］.農牧產品開發，2000（3）：14-16.

［18］胡普信主編.黃酒釀造技術［M］.北京：中國輕工業出版社，2014.

［19］毛青鐘.傳統黃酒淋飯酒母制作過程微生物的變化和作用［J］.釀酒科技，2004a（6）：79-82.

［20］方華，曹鈺，陸健，等.黃酒麥曲中主要霉菌的分子鑒定及分類［J］.釀酒科技，2006（3）：45-47.

［21］曹鈺，陳建堯，謝廣發，等.黃酒麥曲天然發酵中真菌群落的成因初探［J］.食品與生物技術學報，2008a，27（5）：95-101.

［22］曹鈺，陸健，方華，等.紹興黃酒麥曲中真菌多樣性的研究［J］.食品科學，2008b，29（3）：277-282.

［23］陳建堯，曹鈺，謝廣發，等.黃酒機械成型麥曲制曲過程中真菌動態變化的研究［J］.食品與發酵工業，2008，34（8）：42-47.

［24］陸健，曹鈺，方華，等.紹興黃酒麥曲中真菌的初步研究［J］.食品與生物技術學報，2008，27（2）：78-83.

［25］于麗娟，丁斐，葉輝.南通白蒲黃酒麥曲真菌群落結構研究［J］.中國釀造，2012，31（7）：100-103.

［26］梁香，吳天祥，敖銳，等.黃酒優良糖化菌株的篩選及其酶活性能的研究［J］.釀酒科技，2015（3）：12-15.

［27］譚婷婷，王家林，桑戈，等.北方黃酒麥曲中真菌的篩選、鑒定及系統發育分析［J］.安徽農業科學，2015，43（17）：15-16，71.

［28］胡志明，謝廣發，吳春，等.黃酒大罐發酵醪液中原核微生物的初步研究［J］.釀酒科技，2009（8）：58-61.

［29］馮浩，毛健，黃桂東，等.黃酒發酵過程中乳酸菌的分離、鑒定及生物學特性研究［J］.食品工業科技，2013（16）：224-228.

［30］Ke LQ，Wang LL，Li HB，et al.Molecular identification of lactic acid bacteria in Chinese rice wine using species specific multiplex PCR［J］.Eur Food Res Technol，2014，239：59-65.

［31］欒同青，李志軍，鐘其頂，等.黃酒釀造過程細菌群落結構變化初步研究［J］.食品工業科技，2013，34（12）：177-180.

［32］張鳳杰，褚小米，薛潔，等.黃酒釀造過程中細菌群落組成及發酵特性研究［J］.釀酒科技，2013（12）：32-35.

［33］周韓玲，杜麗平，孟鎮，等.黃酒發酵液中產生物胺乳酸菌的分離鑒定與評價［J］.食品與發酵工業，2011，37（8）：47-50.

［34］曹鈺，謝廣發，陳建堯，等.加飯酒大罐發酵過程中真菌群落的動力學研究［J］.食品與發酵工業，2008c，34（11）：15-20.

［35］楊靜靜，孟鎮，鐘其頂，等.黃酒生產中酵母菌多相鑒定技術研究［J］.中國釀造，2011（8）：53-56.

［36］向文良，羅海，梁華忠，等.基于16S 23S rRNA ITS AFLP對米酒發酵過程中原核微生物的演替分析［J］.釀酒科技，2010 （2）：43-46.

［37］黃繼紅，張新武，楊公明，等.客家糯米酒高產菌株篩選及鑒定研究［J］.農產品加工，2011（2）：19-22.

［38］郝瑩，王衛衛，王莉娟，等.陜北傳統米酒曲中優勢菌種的分離、純化及鑒定［J］.檢驗檢疫學刊，2010，20（2）：44-47，20.

［39］徐本剛，母應春，陳虹文，等.貴州黑糯米酒曲優良酵母茵分離篩選與鑒定［J］.中國釀造，2012，31（4）：62-67.

［40］李福榮.信陽米酒微生物群落組成［J］.信陽師范學院學報，2005，18（1）：52-53，70.

［41］傅金泉主編.中國釀酒微生物研究與應用［M］.北京：中國輕工業出版社，2008.

［42］謝廣發，鄭志強，馬晉，等.快速發酵黃酒酵母菌的篩選［J］.中國釀造，2010（8）：12-14.

［43］高永強，邊佳娜.香雪酒中的黃酒酵母選育［J］.江蘇調味副食品，2008，25（1）：29-32.

［44］胡志明，丁美珍，謝廣發.黃酒糖化菌的篩選［J］.釀酒科技，2003（3）：39-40.

［45］張建煒，肖冬光，張翠英.優良黃酒酵母單倍體的分離篩選［J］.釀酒科技，2010（5）：36-38，41.

［46］楊魯君，蔣予箭，李余動.黃酒酵母優良抗逆菌株的篩選、鑒定及發酵特性研究［J］.中國食品學報，2013，13（9）：71-77.

［47］程斐，周高峰，謝廣發，等.適用于黃酒生物酸化浸米的乳酸菌篩選［J］.食品與生物技術學報，2013，32（10）：1079-1084.

［48］夏艷秋，朱強，汪志君.高產糖化酶黃曲霉菌的選育及初步應用［J］.微生物學通報，2009，36（10）：1542-1546.

［49］潘麗軍，梁鐵艷，劉德揚，等.優良黃酒糖化菌株的選育［J］.包裝與食品機械，2007，25（6）：34-37.

［50］Kole MM，Altosaar I.Increased chitinase production by a non-pigmented mutant of Serratia marcescens［J］.FEMS Microbiol Letters，1985，26（3）：265-269.

［51］趙然然，陸健，謝廣發.基于PCR方法敲除黃酒酵母精氨酸酶基因的工程菌構建［J］.食品工業科技，2012，33（17）：159-162.

［52］申超，吳殿輝，李曉敏，等.尿素吸收型工業黃酒酵母單倍體工程菌的構建［J］.食品與發酵工業，2014，40（3）：25-29.

［53］Chen S，Xu Y.Adaptive Evolution of Saccharomyces cerevisiae with Enhanced Ethanol Tolerance for Chinese Rice Wine Fermentation［J］.Appl Biochem Biotechnol，2014，173：1940-1954.

［54］劉雯雯，孫劍秋，平文祥，等.中國白酒窖池真菌的研究進展［J］.中國釀造，2012，31（6）：1-6.

Research progress on the microorganisms of Chinese ricewine

LIU Cheng1，XIE Guang-fa2，3，SUN Jian-qiu1，*，ZOU Hui-jun2，3，WANG Rui-qi1，3，QIAN Bin2，3，ZANG Wei1，ZHOU Jian-di2，3，SHOU Huang-rong1，BAI Feng-yan4
（1.College of Life Sciences，Shaoxing University，Shaoxing 312000，China；2.National Engineering Research Center for Chinese Rice Wine，Shaoxing 312000，China；3.Zhejiang Guyuelongshan Shaoxing Rice Wine Co.，Ltd.，Shaoxing 312000，China；4.State Key Laboratory of Mycology，Institute of Microbiology，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101，China）

The research progresses of microbial resources in seriflux，xiaoqu，yeast starter，jiuqu，fermentation broth of Chinese ricewine and other ricewines were reviewed and the development results of microbial breeding technology in Chinese ricewine were concluded.In order to enhance the research level of microbiologies in Chinese ricewine，using modern biotechnologies to study the microbial resources，diversity，phylogenesis，ecological distribution，brewing function and breeding in Chinese ricewine and other environmental microbiologies which should have an impact on Chinese ricewine production.The study must be comprehensive，in-depth and systematical.It had important theoretical significance and application value on healthy development of Chinese ricewine industry.

Chinese ricewine；microorganism；breeding

TS201.1

A

1002-0306（2016）08-0374-07

10.13386/j.issn1002-0306.2016.08.070

2015－10－08

劉程（1993-），男，大學本科，研究方向：環境微生物技術，E-mail：185819840@qq.com。

*通訊作者：孫劍秋（1969-），男，博士，教授，研究方向：釀酒微生物技術，E-mail：jianqius@163.com。

國家自然科學基金青年基金項目（31500020）；中國科學院微生物研究所真菌學國家重點實驗室開放課題（SKLMKF201307）；浙江省重大科技專項（2013C02006-1）；浙江省大學生科技創新活動計劃暨新苗人才計劃（2015R428006）；紹興市公益性技術應用研究計劃項目（2014B70042）。