解淀粉芽孢桿菌B1619脂肽類抗生素的分離鑒定及其對番茄枯萎病菌的抑制作用

向亞萍，周華飛，劉永鋒，陳志誼

（1江蘇省農業科學院植物保護研究所，南京 210014；2南京農業大學植物保護學院，南京 210095）

解淀粉芽孢桿菌B1619脂肽類抗生素的分離鑒定及其對番茄枯萎病菌的抑制作用

向亞萍1，2，周華飛1，2，劉永鋒2，陳志誼1，2

（1江蘇省農業科學院植物保護研究所，南京 210014；2南京農業大學植物保護學院，南京 210095）

【目的】從解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）生防菌株B1619發酵液上清中分離脂肽類抗生素，分析其抑菌活性相關成分，為應用解淀粉芽孢桿菌B1619菌株防控番茄枯萎病提供依據。【方法】利用特異性引物對B1619中3種脂肽類抗生素合成相關基因sfp、ituA和fenB進行檢測；通過鹽酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽類抗生素粗提物；用SupelcleanTMLC-18柱及PHASE HF-NH2柱對3種脂肽類抗生素粗提物進行分離；通過MALDI-TOF-MS和HPLC分析、鑒定3種脂肽類抗生素；采用平板對峙培養分別測定3種脂肽類抗生素粗提物對番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici）的抑菌活性。【結果】從解淀粉芽孢桿菌B1619的基因組DNA中擴增sfp、ituA和fenB等脂肽類抗生素合成基因，擴增產物經克隆、測序分析，表明B1619菌株中含有這3個基因。通過HPLC分析，發現60%甲醇洗脫液分離物分別在12、16.5、18 min處出現相應峰值，保留時間與bacillomycin L標準品一致，分泌量為18.5 mg·L-1；70%甲醇洗脫液分離物分別在22、34、37、51及53 min處出現相應峰值，保留時間與fengycins標準品一致，分泌量為5.1 mg·L-1；100%甲醇洗脫液分離物分別在27、37、41、51及53 min處出現相應峰值，保留時間與surfactins標準品一致，分泌量為74.3 mg·L-1。經液質聯用進一步驗證分析3種脂肽類抗生素的質子化峰值，60%甲醇洗脫液分離物峰值范圍在m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da，是C13—C15的bacillomycin L；70%甲醇洗脫液分離物峰值范圍在m/z= 1 463.9、1 477.9、1 491.9和1 505.9 Da，是C15—C17的fengycins；100%甲醇洗脫液分離物峰值范圍在m/z=1 008.6、1 022.7和1 036.7 Da，是C13 —C15的surfactins。平板對峙法試驗結果表明1 mg·mL-1bacillomycin L和fengycins對番茄枯萎病菌有較強的抑菌效果，而1 mg·mL-1surfactins對番茄枯萎病菌的抑菌活性較弱，再將surfactins的濃度提高至3和6 mg·mL-1，發現其抑菌效果沒有明顯變化?！窘Y論】B1619菌株分泌3種脂肽類抗生素，其中對番茄枯萎病菌生長起重要抑制作用的抗生素是bacillomycin L和fengycins，surfactins對番茄枯萎病菌的抑制活性較弱。

解淀粉芽孢桿菌B1619；脂肽類抗生素；抑菌活性；番茄枯萎病菌

0 引言

【研究意義】番茄枯萎病是由番茄尖鐮孢番茄專化型（Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici）引起的一種維管束疾病，現已成為影響番茄生產和品質的重要土傳病害。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）是重要的植物根圍促生細菌（PGPR），在植物病害生物防治中起重要作用［1］。解淀粉芽孢桿菌B1619菌株是筆者實驗室研發的生物殺菌劑發酵菌株之一，能有效防控設施蔬菜枯萎病的發生和危害［2］。芽孢桿菌分泌的脂肽類抗生素是其抑制病原真菌生長的主要抑菌物質之一［3-6］，分離與鑒定 B1619分泌的脂肽類抗生素，可為應用 B1619 生物防控設施茄科蔬菜枯萎病提供依據?！厩叭搜芯窟M展】郝曉娟等［7］發現短短芽孢桿菌（Brevibacillus brevis）JK-2菌株對番茄枯萎病有較好的防治效果；詹發強等［8］從大田土壤中分離出一株解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens GU323369.1）近似種，其在土壤及根中有較好的定殖效果，從而能夠抑制番茄枯萎病的發生及擴散。解淀粉芽孢桿菌能夠產生多種抗菌物質，解淀粉芽孢桿菌FZB42的全基因組測序揭示了其能產生多種防病促生物質［9］，戴秀華等［10］發現解淀粉芽孢桿菌Lx-11可產生蛋白酶、纖維素酶和嗜鐵素等物質，而脂肽類抗生素是其最重要的抗菌物質［11-12］。脂肽類抗生素包括伊枯草素家簇iturins（iturin A、iturin C、iturin D、iturin E；bacillomycin D、bacillomycin F、bacillomycin L；mycosubtilin）、泛革素家簇 fengycins和表面活性素家簇 surfactins［4，13-15］，但不同種類的脂肽類物質抗菌性能不同，其中iturins和fengycins具有很強的抗真菌活性，而surfactins對病毒、腫瘤、支原體都有很高的抑制活性［5，16-17］。解淀粉芽孢桿菌SWB16分泌的脂肽類抑菌物質fengycins和iturins可以抑制球孢白僵菌（Beauveria bassiana）的生長［18］。ARREBOLA等［19］從水果表面分離出解淀粉芽孢桿菌PPCBO04，發現其抗菌活性物質為iturinA；喬俊卿等［20］發現B1619在番茄根部定殖能力較強，其還可促進植物生長，抑制線蟲［21］、治理水環境污染等?！颈狙芯壳腥朦c】生防菌B1619能夠有效地防控番茄枯萎病，防治效果達到80%左右，其主要控病作用機理是B1619在植物根部定殖，保護植物不受病菌侵染，誘導植株產生抗病性等［20］，現已開發成安全、環保、高效的生物殺菌劑“1.2億活芽孢/g 解淀粉芽孢桿菌B1619水分散粒劑”［22］。然而筆者前期發現生防菌B1619分泌的脂肽類抗生素對番茄枯萎病有直接的抑菌作用?！緮M解決的關鍵問題】分離、鑒定B1619分泌的3種脂肽類抗生素，并研究3種脂肽類抗生素對番茄枯萎病菌生長的抑菌活性及其強弱，為推廣應用生物殺菌劑B1619防控番茄枯萎病提供依據。

表1　脂肽類抗生素相關基因引物名稱和序列Table 1 Primer names and sequences of the lipopeptide antibiotics corresponding genes

1 材料與方法

試驗于 2015年在江蘇省農業科學院植物保護研究所完成。

1.1供試菌種

解淀粉芽孢桿菌B1619菌株、番茄枯萎病菌均為筆者實驗室保存。B1619菌株所用培養基為 LB （g·L-1）：胰蛋白胨10、酵母粉5、NaCl 10。番茄枯萎病原真菌培養基為PDA（g·L-1）：馬鈴薯200、蔗糖20、pH 7.0，28℃培養。

1.2主要試劑及儀器

所用甲醇、乙腈、三氟乙酸等試劑為色譜純，DNA Marker、Taq DNA聚合酶、DNA提取試劑盒、質粒提取試劑盒和膠回收試劑盒購于北京全式金生物技術有限公司，SupelcleanTMLC-18柱由美國色譜科公司生產，PHASE HF-NH2柱由美國安捷倫公司生產。高速冷凍離心機GL-21M購自湖南湘儀離心機儀器有限公司，Agilent 1100高效液相色譜儀和Agilent 6410三重串聯四級桿質譜儀購自美國安捷倫公司，MyCyclerTM梯度PCR儀購自美國BioRad公司，分光光度計購自上海第三分析儀器廠。

1.3脂肽類抗生素合成相關基因克隆

設計擴增sfp、ituA和fenB等基因的引物序列（表1），引物在上海生工生物工程股份有限公司合成。提取解淀粉芽孢桿菌B1619基因組DNA，采用PCR方法進行擴增，sfp、ituA以及fenB大小為預期產物大小，分別為 675、1 150和1 400 bp。

根據所設計引物的退火溫度和擴增片段大小設計PCR擴增反應程序。擴增產物經膠回收試劑盒凝膠回收后，連接至 pMD18-T質粒載體，測序在生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.4脂肽類抗生素的分離和純化

脂肽類粗提物的提取采用酸沉淀和甲醇提取的方法。B1619在LB培養基中培養72 h后離心除去菌體，上清液用濃鹽酸調至pH 2.0沉淀過夜。10 000×g離心25 min得到沉淀，沉淀用甲醇抽提2次（甲醇總體積為發酵液體積的1/10），每次抽提2 h，合并甲醇抽提物。甲醇抽提物減壓濃縮后過0.22 μm濾膜，即為脂肽類化合物粗提物。

脂肽類抗生素的分離方法參照LUO等［23-24］。將粗提物采用去離子水稀釋為含 30%甲醇水溶液，pH調至7.0，然后上樣于NH2固相萃取柱，分別用含50%甲醇水溶液，100%甲醇，含0.5%甲酸甲醇溶液，1%甲酸甲醇溶液，2%甲酸甲醇溶液梯度洗脫，在1%甲酸甲醇洗脫溶液中含有目標化合物。將含 1%甲酸甲醇洗脫溶液的pH調至7.0，氮氣吹干濃縮后用去離子水稀釋為30%甲醇水溶液，然后上樣于C18固相萃取柱；采用3倍柱體積的50%、60%、70%、80%、90% 和100%甲醇水溶液梯度洗脫。將60%、70%、80%、90%和100%甲醇水洗脫液氮氣吹干濃縮，再經過真空液氮冷凍儀將不同甲醇水洗脫液干燥成粉。

1.5基質協助激光解吸附離子化-飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）和高效液相色譜（HPLC）檢測

為了準確了解菌株產生的脂肽類抗生素種類，對其進行基質協助激光解吸附離子化-飛行時間質譜分析。使用337 nm氮激光源解吸附和電離，采用α-氰-4-羥肉桂酸（α-cyano-4-hydroxycinnamic acid）為基質，1 μL樣品與等體積的基質混勻，置于儀器離子源進行測定。質量掃描范圍為1 000—2 000 Da，方法參考文獻［14］。BacillomycinL、sunfactins及fengycins為筆者實驗室前期自主制備［23-24］，配制成1 mg·mL-1，作為標準樣品。HPLC采用C18柱（微粒大小3.5 μm；柱長及柱直徑 25和 41 mm；型號 VYDAC 218 TP；VYDAC，Hesperia，CA）；流動相為水∶乙腈∶三氟乙酸（60∶40∶0.5 V/V；50∶50∶0.5 V/V；20∶80∶0.5 V/V）；流速為 0.5 mL·min-1；紫外檢測波長為210 nm。

1.6脂肽類抗生素對番茄枯萎病菌的抑制作用

將分離的bacillomycin L、sunfactins及fengycins分別配制成濃度為1 mg·L-1的甲醇溶液，與B1619脂肽類抗生素粗提物對比進行抑菌試驗；將濃度為1、3 和6 mg·L-1的surfactins對番茄枯萎病菌進行抑菌活性試驗，觀察其對番茄枯萎病菌的抑菌活性。

將植物病原真菌點接在PDA平板中央，待菌落生長至直徑約2 cm后在菌落的四周分別等距離點接脂肽類物質粗提物與3種抗生素分離物。脂肽類物質加100 μL，用甲醇做對照并設置空白對照，每個處理3個重復。逐日觀察并記錄。

1.7統計方法

采用DPS統計軟件進行數據統計與分析。

2 結果

2.1B1619菌株脂肽類抗生素合成基因PCR檢測

對解淀粉芽孢桿菌B1619 sfp、ituA以及fenB合成基因 PCR擴增檢測結果見圖 1，解淀粉芽孢桿菌B1619分別在675、1 150和 1 400 bp左右處出現條帶，即能擴增出sfp、ituA以及fenB合成基因。根據分析結果推測解淀粉芽孢桿菌 B1619基因組中可能存在surfactins、bacillomycin L、fengycins代謝合成操縱子序列，該菌株可能代謝產生3類脂肽類抗生素。

圖1　PCR擴增脂肽類抗生素相關基因Fig. 1 PCR detection of lipopeptiedes related genes

2.2B1619菌株脂肽類抗生素的HPLC檢測

將解淀粉芽孢桿菌 B1619分泌的脂肽類物質的分離物分別進行HPLC檢測，結果表明（參考LUO等［23-24］），60%甲醇水洗脫分離物分別在12、16.5、 18 min處出現相應峰值，與bacillomycin L標準品一致，由此可以進一步確定 60%甲醇洗脫分離物是bacillomycin L，其分泌量為18.5 mg·L-1（圖2-A）；70%甲醇洗脫分離物分別在22、34、37、51及53 min處出現相應峰值，與fengycins標準品一致，由此可以進一步確定分離物fengycins，其分泌量為5.1 mg·L-1（圖2-B）；100%甲醇洗脫分離物分別在27、37、41、51及53 min處出現相應峰值，與surfactins標準品一致，由此可以進一步確定 100%甲醇洗脫分離物質surfactins，其分泌量為74.3 mg·L-1（圖2-C）。

2.3脂肽類抗生素的質譜檢測

將解淀粉芽孢桿菌B1619分泌的3種脂肽類抗生素的分離物進行基質輔助解離質譜法測定，B1619產生的3種抗生素對應的特征峰如表2所示。

解淀粉芽孢桿菌B1619的60%甲醇水洗脫液分離物經檢測，發現其峰值m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da，相差 14 Da，它們為脂肪酸鏈相差 1個亞甲基（-CH2-）的同系物，屬于C13—C15的bacillomycin L鈉離子加合峰；70%甲醇水洗脫液分離物信號譜帶在m/z=1 463.9、1 477.9、1 491.9和1 505.9 Da，對應C16 和C17的fengycins，不同的是肽環上6位氨基酸不同，分別為Ala和Val；100%甲醇水洗脫液分離物峰值范圍在m/z=1 008.6、1 022.7和1 036.7 Da，它們屬于C13—C15的surfactins的質子加合峰（圖3）。脂肽類物質質譜峰的分析參考VATER等［25-26］。

2.4對番茄枯萎病菌的抑菌活性

1 mg·mL-1的脂肽類抗生素粗提物以及 3種脂肽類抗生素的分離物對番茄枯萎病菌的抑菌活性見圖4，結果表明，3種脂肽類抗生素的分離物中fengycins對番茄枯萎病菌的抑制效果較好圖（4-A-2），bacillomycin L活性次之（圖4-A-1），而surfactins（圖4-A-3）對番茄枯萎病菌沒有明顯的抑制作用，脂肽類抗生素總粗提物對番茄枯萎病菌的抑制效果較以上三者更為明顯（圖4-A-4）。濃度為1、3和6 mg·mL-1的surfactins對番茄枯萎病菌活性試驗表明，在低濃度1 mg·mL-1（圖4-B-1）和3 mg·mL-1（圖4-B-2）條件下對番茄枯萎病菌的抑制作用沒有明顯變化，在高濃度6 mg·mL-1條件下對番茄枯萎病菌有較弱的抑制作用（圖4-B-3）。

3 討論

圖2　B1619菌株3種脂肽類物質的HPLC圖Fig. 2 HPLC for the lipopeptide antibiotics isolated from B1619

表2　B1619菌株粗提液中脂肽類抗生素surfactins、iturins以及fengycins分子質量測定Table 2 Calculated mass values of bacillomycins， fengycins and surfactins in culture lipopeptides extracts from B1619

圖3　B1619菌株3種脂肽類物質MALDI-TOF-MS檢測圖Fig. 3 MALDI-TOF-MS for the lipopeptide antibiotics isolated from B1619

解淀粉芽孢桿菌可以產生種類繁多的次級代謝產物，主要在非核糖體肽合成酶（NRPS）和聚酮合酶（PKS）的組織下合成，這些產物可以抑制植物根際中的有害細菌和真菌［27］。本研究發現在解淀粉芽孢桿菌生防菌株B1619的NRPS途徑中至少產生3種具有抑制番茄枯萎病菌生長的物質，bacillomycin L、fengycins和surfactins。目前國內外對芽孢桿菌脂肽類物質的研究越來越廣泛，多數研究者認為 iturins和fengycins具有很強的抗真菌活性，而 surfactins對病毒、腫瘤、支原體都有很高的抑制活性。

ROMERO 等［4］從枯草芽孢桿菌（B. subtilis）UMAF6614發酵液中提取到 iturins、surfactins、fengycins 3類脂肽類抗生素，其中iturins和fengycins對植物病原真菌Podosphaera fusca起主要抑制作用。對桃褐腐病菌（Monilinia fructicola）抑菌試驗的研究中發現，在解淀粉芽胞桿菌C06菌株同時產生的脂肽類抗生素bacillomycin D和fengycins中［28］，以及在枯草芽孢桿菌 CPA-8菌株產生 fengycins、iturin A和surfactins［29］等多種脂肽類抗生素中，fengycins均發揮主要的作用。在本研究中分離到fengycins，當其濃度為1 mg·mL-1時，對番茄枯萎病菌就有非常明顯的抑制作用，其抑菌作用僅次于脂肽類抗生素粗提物。

王雅等［30］在枯草芽孢桿菌Bv10胞外抗菌物質中純化到iturin A2和iturin A4，兩者對芝麻白絹病菌（Sclerotium rolfsii）的抑菌中濃度EC50分別為36.79 和43.03 mg·L-1。從枯草芽孢桿菌M51中分離到脂肽類抗生素iturin A2，當其使用濃度為100 μg·g-1土時就能完全抑制番茄枯萎病菌對番茄的侵染［31］。羅楚平等［3］發現枯草芽孢桿菌Bs916分泌的bacillomycin L能使病原真菌菌絲致畸和抑制孢子萌發，當濃度為500 μg·mL-1時，其對水稻紋枯病和苗瘟的防治效果分別為71%和56%。在本研究中分離到bacillomycin L，當bacillomycin L濃度為1 mg·mL-1時，對番茄枯萎病菌也有明顯的抑制作用。從平板抑菌試驗結果發現，fengycins的抑菌活性強于bacillomycin L，但是從HPLC 及MALDI-TOF-MS結果分析發現，bacillomycinL的分泌量為fengycins的3.6倍，因此，bacillomycin L和fengycins在B1619抑制番茄枯萎病菌中都起相當重要的作用。

圖4　B1619菌株3種脂肽類物質對番茄枯萎病菌的抑菌效果Fig. 4 The inhibition effect of the three lipopeptides antibiotics on F. oxysporum

本研究發現 surfactins在解淀粉芽孢桿菌 B1619中的分泌量較高，但其對番茄枯萎病菌生長的抑制菌活性較弱，這與其他研究結果類似，但其在生防中的其他重要作用不可小覷，是解淀粉芽孢桿菌發揮生防作用的重要基礎物質。Surfactins具有較強的表面活性并與細菌生物膜的形成有關，它的表面活性作用可以促進生防菌株在植株上的定殖及擴展［23-24］。BAIS等［32］報道的枯草芽孢桿菌6051分泌的surfactins能使該菌株更好地定殖在擬南芥根部，抵抗丁香假單胞菌的入侵。ONGENA等［33-34］發現，surfactins可以誘導大豆和番茄產生抗病性。任鵬舉等［35］也發現芽孢桿菌分泌surfactins對煙草花葉病毒的防治效果顯著，且能誘導煙草產生誘導系統抗性。張榮勝等［36］發現解淀粉芽孢桿菌 Lx-11粗提物中含有 surfactins、bacillomycin D 和fengycins等3種脂肽類抗生素，surfactins對水稻細菌性條斑病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzicola）具有較強的抑制作用，是抑制條斑病菌主要物質之一。

在脂肽類抗生素的制備分離中，較常用的為色譜法。別小妹等［37］利用RP-C18柱進行HPLC 分離純化，并采用硅膠板進行TLC分析，對枯草芽孢桿菌fmbR抗菌物質進行了有效的分離純化。但此法常用于高純度脂肽抗生素的分析和制備，但規模小、成本高。本研究利用SupelcleanTMLC-18柱及PHASE HF-NH2柱，以甲醇為洗脫液對脂肽類抗生素粗提物進行分離，用此方法分離的脂肽類抗生素的產量較高，而且吸附柱可以通過再生得到重復利用，從而有效降低生產成本。SUN等［38］利用Sephadex LH-20柱，對解淀粉芽孢桿菌ES-2產生的surfactins和fengycins進行提純；另外，MUKHERJEE等［39］利用Sephadex G-50將脂肽類抗生素與雜質分離；用XAD-2作吸附色譜柱，也可以從發酵上清液中分離出surfactin類似物的粗產物［40］。

國內外對芽孢桿菌脂肽類化合物的研究已從純化、特性和鑒定深入到遺傳、代謝和機理改造等方面。如通過將脂肽類化合物內源啟動子更換為強啟動子，構建工程菌株，iturin A 表達量提高了 3倍，mycosubtilin表達量提高了 15倍［3，41］。本研究分析了B1619分泌的脂肽類化合物的種類及抑菌作用，為其今后的開發和應用推廣提供理論依據，并為進一步采用基因工程的手段改良生防芽孢桿菌菌株，大幅度提高脂肽類化合物分泌量，特別是脂肽類化合物調控機制的研究打下了基礎。

4 結論

通過甲醇梯度洗脫的方法對解淀粉芽孢桿菌B1619菌株分泌的3類主要脂肽類抗生素進行了有效的分離，通過HPLC和 MALDI-TOF-MS分析驗證了B1619產生的3種脂肽類物質，其中在對番茄枯萎病菌的抑制作用中起重要作用的抗生素是 bacillomycin L和fengycins，surfactins對番茄枯萎病菌的抑制活性較弱。

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（責任編輯 岳梅）

Isolation and Identification of Lipopeptide Antibiotics Produced by Bacillus amyloliquefaciens B1619 and the Inhibition of the Lipopeptide Antibiotics to Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici

XIANG Ya-ping1，2， ZHOU Hua-fei1，2， LIU Yong-feng2， CHEN Zhi-yi1，2
（1Institute of Plant Protection， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014；2College of Plant Protection， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095）

【Objective】 Bacillus amyloliquefaciens， biocontrol strain B1619， can effectively prevent and control the occurrenceand damage of tomato fusarium wilt. In order to study and analyze the antifungal substances produced by strain B1619， the lipopeptide antibiotics were isolated from the supernatant of fermented broth.【Method】Three primers designed based on the known lipopeptide genes sfp， ituA and fenB were used to amplify the corresponding genes from the genome of B1619 strain. The crude lipopeptides extracts were extracted by acid precipitation and methanol. The supelcleanTMLC-18 column and PHASE HF-NH2 column were used to separate lipopeptide antibiotics. All the samples were analyzed by HPLC and MALDI-TOF-MS techniques. Inhibition rates of the three lipopeptide antibiotics against Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici were tested by dual culture on plate. 【Result】The PCR products with three primer pairs were cloned and sequenced. The result showed that the sfp， ituA and fenB genes existed in the genome of B1619. The HPLC results showed that the peak time of 60% methanol eluent isolates were at 12，16.5 and 18 min， the secretion was 18.5 mg·L-1， and the retention times were consistent with bacillomycin L standards. The peak time of 70% methanol eluent isolates were at 22， 34， 37， 51 and 53 min， the secretion was 5.1 mg·L-1， and the retention times were consistent with fengycins standards. The peak time of 100% methanol eluent isolates were at 27， 37， 41， 51 and 53 min， the secretion was 74.3 mg·L-1， and the retention times were consistent with surfactins standards. The further verification of MALDI-TOF-MS results showed that 60% methanol eluent isolates which m/z were 1 043.4， 1 057.5 and 1 071.4 Da， was C13-C15 bacillomycin L， 70% methanol eluent isolates which m/z were 1 463.9， 1 477.9， 1 491.9 and 1 505.9 Da， was C15-C17 fengycins， 100% methanol eluent isolates which m/z were 1 008.6， 1 022.7 and 1 036.7 Da， was C13-C15 surfactins. The mycostatic tests showed that the antifungal activities of 1 mg·mL-1fengycins were higher than 1 mg·mL-1bacillomycin L， and the 1 mg·mL-1surfactins had the weakest effect on F. oxysporum. However， when the concentration of surfactins was increased to 3 and 6 mg·mL-1， the antifungal activities didn’t change obviously.【Conclusion】B1619 strain secreted the three kinds of lipopeptide antibiotics in which fengycins and bacillomycin L played an important role in the inhibitory effect on F. oxysporum， while the surfactins had no obvious effect on it.

Bacillus amyloliquefaciens B1619； lipopeptide antibiotics； antifungal activities； Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici

2015-03-14；接受日期：2016-04-18

國家高技術研究發展計劃（“863”計劃）（2011AA10A201）、江蘇省農業科技自主創新資金（CX（14）2128）

聯系方式：向亞萍，E-mail：xiangyaping393@163.com。通信作者陳志誼，Tel：025-84390393；E-mail：chzy84390393@163.com