乳腺癌組織IGFBP7表達(dá)及其臨床意義的研究*

李伯和，袁　磊，游顏杰，馬培棟

(1.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，河南漯河 462002；2.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理學(xué)教研室，河南漯河 462002；3.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院乳腺外科，河南漯河 462002)

?

乳腺癌組織IGFBP7表達(dá)及其臨床意義的研究*

李伯和1，袁磊1，游顏杰2，馬培棟3△

(1.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，河南漯河 462002；2.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理學(xué)教研室，河南漯河 462002；3.漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院乳腺外科，河南漯河 462002)

目的探究胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)的表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素及預(yù)后的相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測105例乳腺癌患者IGFBP7的表達(dá)，并分析IGFBP7的表達(dá)情況與乳腺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，采用Kaplan-Meier法分析乳腺癌患者的5年無瘤生存率。結(jié)果105例乳腺癌患者癌組織中IGFBP7陽性率為57.1%；IGFBP7表達(dá)水平與組織學(xué)分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體表達(dá)和孕激素受體表達(dá)有明顯相關(guān)性(P<0.05)，但與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、TNM分期、病理類型和人類表皮生長因子受體2(HER-2)表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。IGFBP7陽性患者的5年無病生存率顯著高于IGFBP7陰性患者(P<0.05)。多因素Cox回歸模型分析結(jié)果表明，IGFBP7表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者生存期的獨(dú)立因素(P<0.05)。結(jié)論IGFBP7表達(dá)陽性的乳腺癌患者更易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

乳腺腫瘤；胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7；免疫組織化學(xué)；生存分析

乳腺癌是全球女性最常見的癌癥之一。盡管近年來針對乳腺癌開展的綜合治療大大提高了治療效果，但仍有三分之一的乳腺癌患者最終會復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移依然是導(dǎo)致乳腺癌患者術(shù)后死亡的首要因素[1]。最新的研究結(jié)果表明，胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7)與胃癌和食管癌的預(yù)后密切相關(guān)[2-3]，但與乳腺癌少見相關(guān)報(bào)道。本研究旨在觀察IGFBP7在中國婦女乳腺癌組織中的表達(dá)情況，探討IGFBP7與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系及其對乳腺癌患者預(yù)后的影響，為乳腺癌個體化治療提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑收集漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院2002年2月1日至2007年5月31日經(jīng)病理檢查確診并行乳腺癌根治術(shù)的105例女性乳腺癌患者。患者年齡39～72歲，中位年齡51歲，其臨床病理資料包括年齡、絕經(jīng)情況、TNM分期、病理類型、腫瘤大小、淋巴結(jié)狀態(tài)及術(shù)后免疫組織化學(xué)結(jié)果[雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長因子受體2(HER-2)表達(dá)情況]。所有病例保存有完整石蠟包埋組織樣本和隨訪資料。兔抗人IGFBP7單克隆抗體購自美國Sigma公司，免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中杉公司。切片厚4 μm，采用免疫組織化學(xué)SP法，隨抗體獲贈相應(yīng)照片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.2方法

1.2.1結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)IGFBP7主要位于細(xì)胞質(zhì)，根據(jù)陽性細(xì)胞百分率和陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度兩項(xiàng)指標(biāo)，進(jìn)行綜合半定量分析。陽性細(xì)胞百分率評分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞小于5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分[6]。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將以上兩項(xiàng)分值相乘得出最后評分：0分為(-)，1～3分為(+)，4～6分為(++)，7～9分為(+++)，10～12分為(++++)，其中++～++++為IGFBP7陽性表達(dá)[7]。

1.2.2隨訪術(shù)后開始對患者進(jìn)行定期隨訪，通過門診、電話、信件及詢問親屬等方式。無病生存時間指從手術(shù)后的第1天開始至第1次復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的時間。隨訪日期截至2012 年2月，平均隨訪時間為31個月。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。使用Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素生存分析，繪制生存曲線并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，Cox多因素模型對患者預(yù)后進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1乳腺癌組織IGFBP7蛋白的表達(dá)IGFBP7在乳腺癌組織中陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，見圖1。在105例乳腺癌患者中，IGFBP7(-)16例，(+)29例，(++)24例，(+++)15例，(++++)21例，陽性率為57.1%(60/105)。

A： IGFBP7蛋白陰性表達(dá)；B： IGFBP7蛋白陽性表達(dá)。

圖1乳腺癌組織中IGFBP7蛋白的表達(dá)(SP×400)

2.2IGFBP7蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性在105例乳腺癌患者中，分化較好的Ⅰ～Ⅱ級IGFBP7陽性率為64.4%，而分化較差的Ⅲ級IGFBP7陽性率低至40.6%(P<0.05)；已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的IGFBP7陽性率顯著低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)；腫塊大小小于2 cm的患者的IGFBP7陽性率明顯高于腫塊大于或等于2 cm的患者 (P<0.05)；ER和PR陽性患者的IGFBP7陽性率分別為71.1%和68.1%，均顯著高于ER和PR陽性患者的IGFBP7陽性率(P<0.05)。IGFBP7蛋白的表達(dá)與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、TNM分期、病理類型和HER-2表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

表1　　乳腺癌患者IGFBP7的表達(dá)與臨床病理特征的比較[n(%)]

續(xù)表1　　乳腺癌患者IGFBP7的表達(dá)與臨床病理特征的比較[n(%)]

2.3IGFBP7表達(dá)與5年無瘤生存率的關(guān)系在105例乳腺癌患者中，IGFBP7陽性患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移9例，IGFBP7陰性患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移21例，IGFBP7陽性患者的5年無瘤生存率為77.3%，而IGFBP7陰性患者的5年無瘤生存率僅為46.2%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank=14.220，P<0.01)，見圖2。

圖2　　IGFBP7陽性與陰性患者的5年無瘤生存率

2.4獨(dú)立預(yù)后因素分析多因素Cox回歸模型分析結(jié)果顯示，IGFBP7表達(dá)水平和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都是影響乳腺癌患者生存預(yù)后的獨(dú)立因素，見表2。

表2　　乳腺癌患者預(yù)后因素Cox風(fēng)險(xiǎn)模型分析

3　討　　論

IGFBP7屬IGFBP超家族成員，基因定位于人染色體4q12。人IGFBP7前體由282個氨基酸殘基組成，含26個氨基酸殘基的信號肽，切除信號肽后成熟的分泌型IGFBP7含有256個氨基酸殘基。通過同源性比對分析，IGFBP7除了其N端高度保守的IGFBP結(jié)構(gòu)域外，還含有肝素結(jié)合結(jié)構(gòu)域、Kazal樣結(jié)構(gòu)域和Ig樣C2結(jié)構(gòu)域。IGFBP7在正常人體不同組織器官中普遍表達(dá)，但在脂肪細(xì)胞、血細(xì)胞和淋巴細(xì)胞表達(dá)呈陰性。IGFBP7在衰老的乳腺上皮細(xì)胞的表達(dá)量為正常水平的10倍，但在多種腫瘤組織中呈低表達(dá)甚至缺失，如胃癌、胰腺癌、乳腺癌和甲狀腺癌等[2,6-8]，

本研究顯示，105例乳腺癌患者中有60例患者IGFBP7的表達(dá)呈陽性，陽性率為57.1%。在甲狀腺癌、肺癌、前列腺癌、食管癌和結(jié)腸癌中，IGFBP7基因啟動子的過度甲基化導(dǎo)致了IGFBP7表達(dá)下降甚至缺失[3,8-11]，然而在乳腺癌中IGFBP7表達(dá)陰性是否也是由于IGFBP7基因啟動子的過度甲基化尚無相關(guān)報(bào)道。

Liu等[2]對247例胃癌的病例對照研究發(fā)現(xiàn)，IGFBP7與TNM分期和預(yù)后密切相關(guān)。Tomimaru等[12]在研究中發(fā)現(xiàn)IGFBP7陰性的肝癌患者腫瘤直徑較大，易侵襲血管，生存率低。然而An等[6]的研究結(jié)果卻顯示，IGFBP7的表達(dá)情況與胰腺癌的病理特征并無顯著相關(guān)性，但I(xiàn)GFBP7陰性患者預(yù)后較差。本研究發(fā)現(xiàn)，IGFBP7表達(dá)陽性的乳腺癌患者分化程度較好，腫瘤直徑較小，不易向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且雌激素受體和孕激素受體表達(dá)多為陽性。這提示IGFBP7可能與乳腺癌細(xì)胞分化、增殖、侵襲及雌激素受體和孕激素受體的表達(dá)密切相關(guān)。

Tania等[15]的研究發(fā)現(xiàn)，IGFBP7 mRNA水平在三陰乳腺癌患者中最低，IGFBP7過表達(dá)可激活p38MAPK-p53-p21 CIP1/WAF1通路抑制乳腺癌MDA-MB-468細(xì)胞增殖和遷移，以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡和衰老。作者之前的研究也發(fā)現(xiàn)IGFBP7可通過上調(diào)p21 CIP1/WAF1的表達(dá)及抑制ERK1/2信號通路活化阻滯乳腺癌細(xì)胞于G1期[14-15]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，IGFBP7表達(dá)陽性的乳腺癌患者5年無瘤生存率顯著高于IGFBP7表達(dá)陰性的乳腺癌患者。多因素分析結(jié)果顯示，IGFBP7表達(dá)陰性是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與文獻(xiàn)報(bào)道較為一致[2,6,12]。這提示IGFBP7可作為預(yù)測乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的潛在指標(biāo)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)IGFBP7陰性的乳腺癌患者腫瘤惡性程度較高，容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，這表明IGFBP7在乳腺癌臨床診斷和判斷預(yù)后上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。此外，推測IGFBP7及去甲基化藥物有可能用于未來乳腺癌的預(yù)防或治療。

[1]Frieboes HB,Edgerton ME,Fruehauf JP,et al.Prediction of drug response in breast cancer using integrative experimental/computational modeling[J].Cancer Res,2009,69(10):4484-4492.

[2]Liu L,Yang ZH,Zhang WX,et al.Decreased expression of IGFBP7 was a poor prognosis predictor for gastric cancer patients[J].Tumor Biol,2014,35(9):8875-8881.

[3]Smith E,Ruszkiewicz AR,Jamieson GG,et al.IGFBP7 is associated with poor prognosis in oesophageal adenocarcinoma and is regulated by promoter DNA methylation[J].Br J Cancer,2014,110(3):775-782.

[4]Li J,Yu Y,Yang Y,et al.IGFBP7,a novel immunohistochemical marker in differentiating dermatofibroma from dermatofibrosarcoma protuberans[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2012,26(3):382-385.

[5]楊歡，陳曉耕，陳新，等．乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織 Ki-67 表達(dá)及其分子分型的意義[J]．中華腫瘤防治雜志，2012，19(3)：212-216．

[6]An W,Ben QW,Chen HT,et al.Low expression of IGFBP7 is associated with poor outcome of pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Ann Surg Oncol,2012,19(12):3971-3978.

[7]Amemiya Y,Yang W,Benatar T,et al.Insulin like growth factor binding protein-7 reduces growth of human breast cancer cells and xenografted tumors[J].Breast Cancer Res Treat,2011,126(2):373-384.

[8]Vizioli MG,Sensi M,Miranda C,et al.IGFBP7:an oncosuppressor gene in thyroid carcinogenesis[J].Oncogene,2010,29(26):3835-3844.

[9]Suzuki M,Shiraishi K,Eguchi A,et al.Aberrant methylation of LINE-I,SLIT2,MAL and IGFBP7 in non-small cell lung cancer[J].Oncol Rep,2013,29(4):1308-1314.

[10]Sullivan L,Murphy TM,Barrett C,et al.IGFBP7 promoter methylation and gene expression analysis in prostate cancer[J].J Urol,2012,188(4):1354-1360.

[11]Dimberg J,Thai TH,Skarstedt M,et al.Analysis of APC and IGFBP7 promoter gene methylation in Swedish and Vietnamese colorectal cancer patients[J].Oncol Lett,2013,5(1):25-30.

[12]Tomimaru Y,Eguchi H,Wada H,et al.IGFBP7 downregulation is associated with tumor progression and clinical outcome in hepatocellular carcinoma[J].Int J Cancer,2012,130(2):319-327.

[13]Benatar T,Yang W,Amemiya Y,et al.IGFBP7 reduces breast tumor growth by induction of senescence and apoptosis pathways[J].Breast Cancer Res Treat,2012,133(2):563-573.

[14]袁磊，范文娟，宋國華，等．外源性胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7抑制人乳腺癌MDA-MB-453細(xì)胞的增殖[J]．生理學(xué)報(bào)，2013，65(5)：519-524．

[15]袁磊，左曙光，宋國華，等．IGFBP7對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制[J]．中國病理生理雜志，2012，28(10)：1835-1840．

Study on the expression of IGFBP7 in patients with breast cancer and its clinical significance*

LiBaihe1,YuanLei1,YouYanjie2,MaPeidong3△

(1.LaboratoryofMolecularMedicine,LuoheMedicalCollege,Luohe,Henan462002,China；2.DepartmentofPathology,LuoheMedicalCollege,Luohe,Henan462002,China；3.DepartmentofBreastSurgery,FirstAffiliatedHospitalofLuoheMedicalCollege,Luohe,Henan462002,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between insulin-like growth factor binding protein 7(IGFBP7) and clinical factors and prognosis of breast cancer.MethodsA total of 105 cases of breast cancer were detected for the expression of IGFBP7 by the immunohistochemical method,and the relationship between the expression of IGFBP7 and clinical factors was analyzed.The 5-year disease-free survival(DSF) was analyzed by Kaplan-Meier method.ResultsThe expression of IGFBP7 was detected in 57.1% of breast cancer cases.In the 105 cases of breast cancer patients,the expression of IGFBP7 was correlated with pathological grade,tumor size,lymph node metastasis,expression of estrogen receptor(ER) and progestrone receptor(PR),with statistical difference(P<0.05).However,it did not show any correlation with age,menopausal status,TNM stage,pathologic types and the expression of HER-2(P>0.05).The 5-year DSF of IGFBP7 negative patients was markedly lower than that of IGFBP7 positive patients(P<0.05).Cox multivariate analysis indicated that the expression of IGFBP7 and lymph node metastasis were the independent prognostic factors affecting survival rate of breast cancer patients(P<0.05).ConclusionThe IGFBP7 positive patients with breast cancer may be more prone to recurrence and metastasis.

breast neoplasms；insulin-like growth factor binding protein 7；immunohistochemistry；survival analysis

論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.24.015

河南省科技廳科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(142102310466)；漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校科研基金資助項(xiàng)目(2014-S-LMC09)。作者簡介：李伯和(1967-)，碩士，副教授，主要從事乳腺癌的臨床與基礎(chǔ)研究。△

，Tel：(0395)2969424；Email：fzyx_yl@163.com。

R737.9

A

1671-8348(2016)24-3358-03

2016-02-11

2016-03-15)