HPLC-RI法同時測定食品中5種糖的含量

馮海青，鄒君（荊州市食品藥品檢驗所，湖北荊州434000）

HPLC-RI法同時測定食品中5種糖的含量

馮海青，鄒君
（荊州市食品藥品檢驗所，湖北荊州434000）

建立HPLC-RI法同時測定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的含量。采用Inertsil NH2色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），乙腈∶水（80∶20，體積比）為流動相，流速1.0 mL/min，柱溫30℃。果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的線性范圍分別是3.9116μg～156.4655μg（r=0.9996）、3.1887μg～127.5491μg（r=0.9996）、2.6983μg～107.9337μg（r=0.9991）、4.290 9 μg～171.635 4 μg（r=0.999 8）、3.730 9 μg～149.237 7 μg（r=0.999 6）；平均加樣回收率分別為98.6%、98.4%、97.8%、97.8%、99.2%，RSD分別為1.28%、1.70%、1.63%、1.55%、1.81%。

HPLC-RI；總糖；果糖；葡萄糖；蔗糖；麥芽糖；乳糖

糖類化合物是自然界中為人體提供能量的最主要營養素，也是大部分食品的主要成分之一。實際工作中發現絕大多數食品中主要含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖這5種糖。國家標準GB/T 5009.7-2008《食品中還原糖的測定》、GB/T 5009.8-2008《食品中蔗糖的測定》和GB/T 20977-2007《糕點通則》中規定了食品中還原糖、蔗糖和總糖的檢測方法［1-3］，均采用的化學滴定的方法，該方法樣品預處理過程長，分析時間長，檢測效率低。而食品中糖的含量是一樣重要指標，化學滴定法的檢測結果受水解溫度、水解時間、滴定溫度和滴定速度等多因素的影響［4］，并且化學滴定法無法滿足快速檢測大批量樣品的要求，影響檢測時效性，因此在參考GB/T 18932.22-2003《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法液相色譜示差折光檢測法》和GB/T 20882-2007《果葡糖漿》的基礎上采用HPLC-RI同時測定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖這5種糖的含量［5-6］。新建立的檢測方法快速、簡單、準確。

1　儀器與試劑

DIONEX P680 ASI-100高效液相色譜（包括P680泵、Shodex RI-101示差折光檢測器、ASI-100自動進樣器、Chromeleon液相色譜工作站）：戴安公司；METTLER AB265-S電子天平：瑞士METTLER TOLEDO公司。

標準品葡萄糖（批號110833-201205）、果糖（批號100231-201305）、蔗糖（批號111507-201303）、麥芽糖（批號100287-201303）、乳糖（批號100058-201204）：均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈：色譜純；水：超純水；其余試劑均為分析純。

樣品共計12批，均來自荊州市食品藥品檢驗所日常檢驗之樣品。

2　方法

2.1混合對照品溶液的制備

精密稱取上述對照品適量至10mL容量瓶中加6mL水溶解后用乙腈定容至刻度，搖勻，得混合標準品溶液（果糖10.431 0 mg/mL、葡萄糖8.503 3 mg/mL、蔗糖7.195 6 mg/mL、麥芽糖11.442 4 mg/mL、乳糖9.949 2 mg/ mL），然后分別將標準品溶液稀釋2、5、10、20、40倍得到不同濃度的標準品溶液，用于繪制標準曲線。

先將樣品粉碎后取樣約5.0 g，精密稱定，加適量水超聲溶解后置100 mL容量瓶中加乙腈定容至刻度，過濾，濾液過0.45 μm濾膜。

2.3色譜條件

色譜柱：InertsilNH2色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相∶乙腈-水（80∶20，體積比）；流速：1.0 mL/min；檢測器：Shodex RI-101示差折光檢測器（檢測池溫度：45℃）；柱溫：30℃；進樣量15 μL。

2.4線性關系考察

吸取上述不同濃度的標準品溶液，按照“2.3”項下的色譜條件進樣測定。以濃度為縱坐標，峰面積為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。

2.5精密度試驗

取“2.1”項下的混合標準品溶液，以“2.3”項下色譜條件連續進樣測定5次。

存在句按照語義層面來進行分類，基本上可以劃分為時間類、空間類和時空混合類；再出現頻率上來看，空間類存現句出現的次數最多，而時間類或時空混合類存現句出現的頻率相對較低。

2.6穩定性試驗

取同一批樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.3”項下色譜條件，分別于制備后0、2、4、6、12、24 h進樣檢測各成分的峰面積。

2.7重復性試驗

取同一批樣品6份，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.3”項下色譜條件進樣測定。

2.8加樣回收試驗

取“2.6”項已測知含量的同一批樣品5份，每份精密加入已知濃度的混合標準品溶液5 mL，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.3”項下色譜條件進樣檢測，計算回收率。

2.9樣品含量測定

取本所日常檢驗的樣品12批分別用化學滴定法和HPLC法測定樣品中總糖含量，最終結果都以葡萄糖計。

3　結果與討論

3.1混合對照品溶液色譜圖測定

取“2.1”項下混合對照品溶液，按“2.3”項下色譜條件試驗，色譜圖見圖1。

圖1混合對照品的HPLC色譜圖Fig.1　HPLC chromatograms of mixed reference substances

3.2線性關系考察

線性關系考察結果見表1。

表1　各被測成分的標準曲線方程、相關系數和線性范圍Table 1 Regressive equations,correlation coefficients,and linear ranges of the investigated components

3.3精密度試驗

精密度試驗結果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖含量RSD值依次為0.47%、0.66%、0.63%、0.45%、0.10%。

3.4穩定性試驗

穩定性試驗結果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖峰面積24 h內的RSD（n=6）分別為0.58%、1.27%、0.94%、0.70%、0.73%，表明樣品中各成分在24 h內穩定。

3.5重復性試驗

重復性試驗結果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖含量RSD值依次為1.09%、1.24%、1.03%、0.93%、1.19%。

3.6加樣回收試驗

加樣回收試驗結果見表2。

3.7樣品含量測定

樣品含量測定，經配對t檢驗，P≥0.05，兩種方法檢測結果無顯著性差別，結果見表3。

表2　各成分的加樣回收率結果Table 2　The recovery of standard addition of the components

表3　12批樣品兩種不同檢測方法結果對比（X±S，n=12，%）Table 3　The detect resulst obtained by two methods（X±S，n= 12，%）

4　結論

在大量的實際檢驗工作中發現絕大多數食品中都是含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或多種糖，所以選擇這5種糖作為檢測指標。綜合考慮實際檢測結果的分離度、儀器的性噪比以及實際工作所測得的樣品的糖含量而最終確定該方法的色譜條件和線性范圍。特別指出的是在檢測含糖量高的樣品時應減少取樣量或增加樣品溶解時的水的量以使樣品中得糖能充分溶出。若樣品全部用水溶解則會影響各成分峰形和分離度，而樣品溶劑中加入適量乙腈可以改善。

本文分別采用化學滴定法和HPLC法對本所12批樣品總糖含量進行對比檢測，結果顯示兩種方法的檢驗結果無顯著差別，同樣HPLC法也適用用于食品中還原糖和蔗糖等指標的測定。新建立的檢測方法簡單、準確、快速、重復性好，更適用于日常檢驗工作，并且還能同時測定五種糖的含量，對生產企業產品的質量控制具有指導意義。

［1］中華人民共和國衛生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.7-2008食品中還原糖的測定［S］.北京：中國標準出版社，2009

［2］中華人民共和國衛生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.8-2008食品中蔗糖的測定 ［S］.北京：中國標準出版社，2009

［3］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 20977-2007糕點通則［S］.北京：中國標準出版社，2007

［4］孫淑玲，劉坤，楊新濤.食品中總糖測定的方法與評價［J］.中國衛生檢驗雜志，2013，23（13）：2852-2853

［5］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 18932.22-2003蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法液相色譜示差折光檢測法［S］.北京：中國標準出版社，2004

［6］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 20882-2007果葡糖漿［S］.北京：中國標準出版社，2007

Simultaneous Determination of Five Kinds of Sugars in Food by HPLC-RI

FENG Hai-qing，ZOU Jun
（Jingzhou Institute for Food and Drug Control，Jingzhou 434000，Hubei，China）

A HPLC method for simultaneous determination of five components including fructose，glucose，sucrose，maltose，lactose in food was established.The chromatographic separation was achieved on a Inertsil NH2 colum（5μm，4.6 mm×250mm）and the column temperature was 30℃.The mobile phase was consisted of acetonitrile-water（80：20），the flow rate was 1.0 mL/min.The linear range of fructose，glucose，sucrose，maltose，lactose，were 3.911 6 μg-156.465 5 μg（r=0.999 6），3.188 7 μg-127.549 1 μg（r=0.999 6），2.698 3 μg-107.933 7 μg（r=0.999 1），4.290 9 μg-171.635 4 μg（r=0.999 8），3.730 9 μg-149.237 7 μg（r=0.999 6）.The average recoveries were 98.6%（RSD=1.28%），98.4%（RSD=1.70%），97.8%（RSD=1.63%），97.8%（RSD= 1.55%），99.2%（RSD=1.81%），respectively.

HPLC-RI；total sugar；fructose；glucose；sucrose；maltose；lactose

2015-09-05

馮海青（1980—），男（漢），主管藥師，學士/本科，研究方向：食品藥品檢驗技術。