HPLC法測定黃龍咳喘膠囊中淫羊藿苷的含量

常　潤，夏傳濤，方　宇

(1．西安交通大學藥學院，西安　710061；2．陜西東科制藥有限責任公司，西安　710043)

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HPLC法測定黃龍咳喘膠囊中淫羊藿苷的含量

常潤1，2，夏傳濤2，方宇1*

(1．西安交通大學藥學院，西安710061；2．陜西東科制藥有限責任公司，西安710043)

目的建立黃龍咳喘膠囊中淫羊藿苷的HPLC含量測定方法。方法采用HPLC法。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調pH值約為4.5)(25∶75)；流速：1mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：270nm。結果淫羊藿苷在0.008 1～0.081 0mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為98.7%，RSD值為1.62%(n=6)。結論該方法簡便，結果準確可靠，可作為該膠囊的質量控制方法。

黃龍咳喘膠囊；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測定

黃龍咳喘膠囊是由黃芪、地龍、淫羊藿、山楂、桔梗、魚腥草、射干、麻黃和葶藶子9味中藥材制成的膠囊，主要功能為益氣補腎、清肺化痰、止咳平喘，用于肺腎氣虛、痰熱郁肺之咳喘以及急慢性支氣管炎、支氣管哮喘等。淫羊藿為此方中君藥之一，有補腎助陽之效，主要成分為淫羊藿苷。為控制該產品質量，需對其君藥藥材質量有效控制，故采用HPLC法測定黃龍咳喘膠囊中的淫羊藿苷。

1　儀器與試藥

1.1儀器SHIMADZU10A型高效液相色譜儀，紫外檢測器。

1.2試藥淫羊藿苷對照品，來源于中國藥品生物制品檢定研究院(供含量測定用)，批號110737-200415；黃龍咳喘膠囊(批準文號：國藥準字Z20025060)，楊凌東科麥迪森制藥有限公司生產，批號：140701，140702，140703；水：純化水；色譜純：乙腈，其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色譜柱[1]，流動相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調pH值約為4.5)(25∶75)；柱溫：30 ℃；檢測波長：270nm；流速：1mL·min-1；進樣體積：10μL[2]。理論板數按照淫羊藿苷峰計算應不低于3 000。

2.2供試品溶液的制備精密稱取供試品約0.5g，置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入25mL體積分數為50%的乙醇，稱定質量后在功率250W、頻率40kHz條件下超聲處理30min，放冷后用體積分數為50%的乙醇補足失質量，搖勻，濾過，取續濾液后制成。

2.3對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品，加甲醇制成0.03mg·mL-1的溶液。

2.4陰性空白對照品溶液的制備取除去淫羊藿的模擬處方，制成不含淫羊藿的空白樣品，按照供試品溶液制法制成陰性空白對照品溶液。

2.5空白干擾實驗見圖1。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性空白對照溶液各10μL，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，觀察比較。實驗結果表明，在陰性空白對照溶液的HPLC色譜圖中，與對照品峰相應的保留時間位置上無相應的峰出現，表明陰性空白對照溶液無干擾。

2.6線性關系考察精密稱取淫羊藿苷對照品4.0和8.1mg，分別置于100和50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為對照品溶液，其質量濃度分別為40.0和162.0μg·mL-1；再精密吸取質量濃度為162.0μg·mL-1的對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分別置于6個2mL的量瓶中，加甲醇定容至刻度，作為對照品溶液，質量濃度分別為8.1，16.2，32.4，48.6，64.8和81.0μg·mL-1。精密吸取各溶液10μL，分別注入液相色譜儀，按照含量測定方法進行測定，以對照品質量濃度為橫坐標、峰面積積分均值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=16 643.96X-3 957.33，r=0.999 9，實驗結果表明，淫羊藿苷質量濃度在8.1～81.0μg·mL-1范圍內呈良好線性關系。

圖1HPLC圖

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品；1.淫羊藿苷

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；C.negativesamplewithouticariin；1.icariin

2.7精密度實驗精密吸取同一對照品溶液(40.0μg·mL-1)和供試品溶液(批號140701)，各進樣6次，每次進樣10μL，測定峰面積積分值，計算得對照品溶液的RSD值為0.83%，供試品溶液的RSD值為2.49%。

2.8穩定性實驗取批號為140701的供試品溶液，分別在0，2，4，6和8h測定，淫羊藿苷供試品溶液在8h內峰面積積分值均變化不大，RSD值為1.48%，表明該方法制備供試品溶液在8h內穩定性良好。

2.9重復性實驗取批號為140701的黃龍咳喘膠囊樣品6份，按照2.2 項下方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定，計算得淫羊藿苷的含量分別為1.979 4，1.943 5，1.943 6，2.004 7，1.932 2和1.962 0mg·g-1，平均含量為1.960 9mg·g-1，RSD值為1.39%(n=6)。

2.10加樣回收率實驗見表1。精密稱取已知平均含量為1.960 9mg·g-1的樣品6份，每份約0.25g，分別精密加入162.0μg·mL-1的淫羊藿苷對照品溶液各3mL，按照2.2項下方法制備溶液，測定其峰面積，計算回收率。實驗結果表明，淫羊藿苷加樣平均回收率為98.7%，回收率良好，測定相對標準偏差RSD值為1.62%(n=6)。

表1淫羊藿苷加樣回收率實驗結果

Tab.1Resultsofrecoverytestforicariin(n=6)

2.11樣品測定按照2.2項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件測定3批樣品中淫羊藿苷的含量，結果供試品中淫羊藿苷的含量分別為1.668 0，1.908 4和2.520 1mg·g-1。

2.12限度的確定根據以上3批樣品的測定結果，淫羊藿苷的含量在1.66～2.52mg·g-1之間，平均值為2.00mg·g-1，根據《中國藥典》2010年版一部淫羊藿中淫羊藿苷的含量[3]，考慮到藥材的品質差異性和提取率，故初步確定本品1g含淫羊藿以淫羊藿苷計，不得少于1.40mg·g-1。

3　討論

在供試品溶液的制備方法中，首先對檢測波長進行選擇，在200～400nm波長范圍內進行掃描，最大吸收波長出現在 270nm處，故將270nm確定為檢測波長。其次，分別以甲醇、乙醇、體積分數為70%的乙醇和體積分數為50%的乙醇為提取溶劑，超聲40min，對提取溶劑進行考察。結果表明，以體積分數為50%的乙醇為提取溶劑，制劑中淫羊藿苷的含量最高，初步擬定供試品采用體積分數為50%的乙醇提取。再次，以體積分數為50%的乙醇為提取溶劑，考察超聲提取時間。結果顯示，在30min后完成超聲提取，制劑中淫羊藿苷的含量不再增加。文獻[4-6]中多采用乙腈-水作為流動相，本實驗在對流動相考察中分別用甲醇-水體系和乙腈-水體系進行實驗，結果表明，流動相為乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調節pH值約為4.5)(25∶75)時即可達到較好基線分離，且陰性樣品無干擾。結果表明，本方法穩定準確，可作為黃龍咳喘膠囊的質量控制方法。參考文獻：

[1]李維鳳，牛曉峰，李延.HPLC法測定健寶膠囊中淫羊藿苷含量[J].西安交通大學學報：醫學版，2002，23(5)：504-505.

[2]張林松.HPLC法測定復方益腎顆粒中淫羊藿苷的含量[J].中草藥，2005，36(2)：221-222.

[3]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：306.

[4]溫幼敏，潘維民，譚小敏.HPLC法測定溫補氣血口服液中淫羊藿苷的含量[J].廣西中醫學院學報，2010，13(1)：58-59.

[5]黎旸，李瑾翡，彭學東.HPLC法測定補腎強身膠囊中淫羊藿苷的含量[J].西北藥學雜志，2009，24(4)：266-267.

[6]岐琳，牛曉峰.RP-HPLC法測定前列舒樂片中淫羊藿苷的含量[J].西北藥學雜志，2012，27(5)：413-415.

Determination of icariin in Huanglongkechuan Capsules by HPLC

CHANG Run1，2，XIA Chuantao2，FANG Yu1*

(1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Shaanxi Dongke Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710043，China)

ObjectiveTodetermineicariininHuanglongkechuanCapsulesbyHPLC.MethodsHPLCcolumn:TIANHEKromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)；mobilephase：acetonitrile-0.075mol·L-1phosphoricacidsolution(adjustedpHofabout4.5withtriethylamine)(25∶75)；flowrate：1mL·min-1；columntemperature：30 ℃；detectionwavelength：270nm.ResultsIcariinwithin0.008 1-0.081 0mg·mL-1showedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.7%，withRSD1.62%(n=6).ConclusionThismethodissimple，accurateandreliable，andcanbeusedforthequalitycontrolofHuanglongkechuanCapsules.

HuanglongkechuanCapsules；icariin；HPLC；determination

常潤，女，碩士研究生，主管藥師

方宇，男，教授，博士生導師

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.009

R927.2

A

1004-2407(2016)05-0469-03

2015-10-14)