烏雞白鳳丸治療原發性痛經的實驗研究

郭起岳，吳清和，操紅纓，茹　麗，劉　嬋，吳　君，郭重儀，黃　萍*

(1.廣州中醫藥大學科技產業園，廣州　510445；2.廣州中醫藥大學，廣州　510006；3.山東中醫藥高等專科學校，煙臺　264100；4.暨南大學，廣州　510632)

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烏雞白鳳丸治療原發性痛經的實驗研究

郭起岳1，吳清和2，操紅纓2，茹麗1，劉嬋1，吳君3，郭重儀4，黃萍2*

(1.廣州中醫藥大學科技產業園，廣州510445；2.廣州中醫藥大學，廣州510006；3.山東中醫藥高等專科學校，煙臺264100；4.暨南大學，廣州510632)

目的探討烏雞白鳳丸治療原發性痛經的作用機制。方法利用縮宮素所致SD雌性大鼠痛經模型，觀察烏雞白鳳丸不同劑量對大鼠扭體潛伏期、30min內扭體發生率和扭體次數、子宮組織中PGF2α和PGE2含量的影響；采用常規方法制備大鼠離體子宮標本，通過BL-420E生物機能實驗系統，以大鼠子宮平滑肌條的平均張力和收縮頻率作為評價指標，觀察不同劑量烏雞白鳳丸對大鼠子宮肌收縮活動及縮宮素所致子宮痙攣的作用。結果烏雞白鳳丸能明顯延長痛經模型大鼠扭體潛伏期，降低30min內扭體發生率，減少扭體次數(P<0.01)；能明顯降低痛經模型大鼠子宮組織中PGF2α的含量(P<0.01)，升高PGE2的含量(P<0.05)，降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；可顯著降低大鼠正常子宮和縮宮素引起的痙攣子宮平滑肌條的平均張力和收縮頻率(P<0.01)。結論烏雞白鳳丸對原發性痛經造成的疼痛具有良好的改善作用，其作用機制可能與調節子宮組織內PGF2α和PGE2含量及抑制子宮收縮相關。

烏雞白鳳丸；原發性痛經；大鼠痛經模型；前列腺素；離體

原發性痛經又稱功能性痛經，是指月經前后或月經期在生殖器官無器質性病變存在時發生的下腹疼痛、墜脹及其他不適感，臨床主要表現為下腹部痙攣性疼痛。流行病學研究表明，原發性痛經是目前婦科最常見的疾病之一，根據疼痛強度、對工作能力的影響和對鎮痛藥的需求程度可將痛經分為輕度、中度和重度[1]。國內抽樣調查表明，我國婦女痛經發生率為33.1%，其中原發性者占53.2%[2]，主要發生群體為青春期少女和未婚或未育的年輕婦女[3]。烏雞白鳳丸是傳統婦科良藥，全方配伍，藥性平和，不寒不躁；具有補氣養血、調經止帶之功效；臨床上用于氣血兩虛、身體虛弱、腰膝酸軟、月經不調和崩漏帶下等癥。近年來，其治療價值在臨床上得到肯定，其作用機制被現代藥理學研究所證實[4-6]，但用于治療原發性痛經的報道卻不多。本研究以原發性痛經的發病因素為著眼點，旨在通過觀察烏雞白鳳丸對痛經模型大鼠的鎮痛作用和前列腺素含量的影響，同時觀察對大鼠離體子宮平滑肌收縮功能和縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌收縮功能的作用，探討烏雞白鳳丸治療原發性痛經的作用機制，為臨床用藥提供藥效學實驗依據。

1　儀器與材料

1.1儀器RT-2100C酶標儀(深圳雷社生命科學股份有限公司)；BL-420E生物機能實驗系統,HW-400S恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)。

1.2試藥烏雞白鳳丸(干膏粉)(廣州陳李濟藥廠)，臨床口服，1次3.5g，每日2次；阿司匹林(印尼拜耳公司)，批號為BTA6EA，0.1g/片;月月舒(沖劑)(河南省宛西制藥股份有限公司)，每袋10g，臨床劑量為每次1袋，每日2次；己烯雌酚注射液(廣州白云山明興制藥有限公司)，1mL/支，1mL∶2mg；縮宮素(上海第一生化藥業有限公司)，10u/支。大鼠前列腺素F2α酶聯免疫檢測試劑盒,大鼠前列腺素E2酶聯免疫檢測試劑盒(上海卓康生物科技有限公司)。

1.3動物SD大鼠，SPF級，體質量180～220g，雌性，由廣東省實驗動物中心提供，生產許可證號為SCXK(粵)2003-0002，動物飼料也由該中心提供。

2　方法

2.1對縮宮素致痛經模型大鼠的影響選取70只雌性SD大鼠，隨機分為空白對照組、模型對照組、阿司匹林組、月月舒組和烏雞白鳳丸低、中、高劑量組，每組10只。從第1天開始，連續皮下注射己烯雌酚注射液10d(人工造成動物處于相同的動情期，以便提高子宮平滑肌對藥物的敏感性)，每日1次，第1天每只大鼠 0.8mg，第2～9天每只大鼠0.4mg，第10天每只大鼠0.8mg。從第5天開始對大鼠按照20mL·kg-1的體質量灌胃給藥，空白對照組與模型對照組分別給予等體積的蒸餾水，每日1次，連續7d。末次注射己烯雌酚24h、給藥(蒸餾水)1h后，腹腔注射縮宮素2U/只，觀察30min內大鼠的疼痛反應，以扭體反應(大鼠腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側肢體內旋)為子宮強烈收縮(痛經)的指標，包括扭體發生率、潛伏期及次數。扭體發生率=發生扭體動物數/10×100%。觀察30min后，處死大鼠，剝離大鼠子宮，用精密儀器稱取0.5g，加1mL生理鹽水，勻漿，離心，取上清液，采用大鼠前列腺素F2α酶聯免疫檢測試劑盒、大鼠前列腺素PGE2酶聯免疫檢測試劑盒檢測PGF2α和PGE2含量[7-8]。

2.2對大鼠離體子宮肌收縮活動的影響取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，實驗前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，連續3d，以促其處于動情前期或動情期，提高子宮對藥物的敏感性。實驗時，用頸椎脫臼法處死大鼠，迅速剪開腹腔，輕輕剝離子宮周圍脂肪組織，穿線結扎陰道端，剪取長約2cm的子宮，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除殘留的結締組織和脂肪，陰道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通氣管小鉤上，另一端與肌力換能器相連。恒溫水浴保持工作溫度為37±0.5 ℃，并不斷向工作液中通入氧氣，記錄肌條的等長收縮。待子宮舒縮穩定后，記錄一段正常活動曲線作為對照。然后采取累積給藥方式，向浴槽中加入烏雞白鳳丸藥液，使其終質量濃度分別達到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，記錄每次給藥后10min內子宮收縮曲線，觀察大鼠子宮平滑肌條的平均張力(g)和收縮頻率(次·10min-1)。藥物劑量指浴槽中的終質量濃度。洛氏液實驗前配制：氯化鈉9g，氯化鉀 0.42g，氯化鈣0.21g，碳酸氫鈉0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸餾水至1 000mL[9-10]。2.3對縮宮素所致離體子宮痙攣的影響取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，實驗前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，連續3d，以促其處于動情前期或動情期，提高子宮對藥物的敏感性。實驗時，用頸椎脫臼法處死大鼠，迅速剪開腹腔，輕輕剝離子宮周圍脂肪組織，穿線結扎陰道端，剪取長約2cm的子宮，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除殘留的結締組織和脂肪，陰道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通氣管小鉤上，另一端與肌力換能器相連。恒溫水浴保持工作溫度為37±0.5 ℃，并不斷向工作液中通入氧氣，記錄肌條的等長收縮。子宮舒縮穩定后，記錄一段正常活動曲線，然后加入縮宮素0.1u(終濃度為0.005u·mL-1)，待曲線收縮平衡，記錄10min內子宮收縮曲線后，采取累積給藥，向浴槽中加入烏雞白鳳丸藥液，使其終質量濃度分別達到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，記錄每次給藥后10min內子宮收縮曲線，觀察大鼠子宮平滑肌條的平均張力(g)和收縮頻率(次·10min-1)。藥物劑量指浴槽中的終質量濃度。洛氏液實驗前配制：氯化鈉 9g，氯化鉀0.42g，氯化鈣0.21g，碳酸氫鈉0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸餾水至1 000mL[9-10]。

2.4統計方法所有數據均采用統計軟件SPSS13.0進行統計，多組間比較采用方差分析法。

3　結果

3.1對縮宮素致痛經模型大鼠的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠扭體發生率增加(P<0.01)，扭體潛伏期縮短(P<0.01)；30 min內扭體次數增多(P<0.01)；子宮組織PGF2α含量增加(P<0.01)，PGE2含量降低(P<0.05)，PGF2α/PGE2比值增高(P<0.01)。與模型對照組比較，烏雞白鳳丸中、高劑量和月月舒及阿司匹林對縮宮素所致大鼠的扭體潛伏期和30 min內扭體次數具有明顯的抑制作用，可降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；烏雞白鳳丸高劑量、月月舒及阿司匹林可降低大鼠子宮內膜中的PGF2α含量(P<0.05～0.01)，增加大鼠子宮內膜中PGE2含量(P<0.05)。見表1～2。

表1烏雞白鳳丸對縮宮素所致大鼠疼痛扭體反應的影響

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與空白對照組比較▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表2烏雞白鳳丸對大鼠子宮組織PGF2α和PGE2的影響

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01;與空白對照組比較▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3.2對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響烏雞白鳳丸中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條的平均張力(P<0.05)；烏雞白鳳丸低、中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條的收縮頻率(P<0.05)。見表3。

3.3對縮宮素所致離體子宮痙攣的影響大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的平均張力和收縮頻率升高(P<0.01)；烏雞白鳳丸中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的平均張力(P<0.01)；烏雞白鳳丸低、中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的收縮頻率(P<0.01)。見表4。

表3烏雞白鳳丸對大鼠正常離體子宮的影響

注：*與給藥前正常值比較P<0.05。

表4烏雞白鳳丸對縮宮素誘發大鼠離體子宮收縮的影響

注：**與給縮宮素前正常值比較P<0.01；▲▲與縮宮素組比較P<0.01。

4　討論

現代醫學認為，子宮內膜產生和釋放的PGF2α過多，導致PGF2α/PGE2比值過度升高，高濃度的PGF2α作用于螺旋小動脈壁上的PGF2α受體，引起子宮平滑肌痙攣性收縮，表現為子宮平滑肌張力增高、收縮幅度增加等，導致子宮血流減少、子宮缺血及骨盆神經末梢對化學、物理刺激痛閾降低等。子宮異常收縮、缺血及缺氧，酸性代謝產物堆積于肌層而導致痛經[11-14]。由實驗可知，烏雞白鳳丸能很好地抑制痛經模型大鼠的扭體發生率、扭體潛伏期和30min內扭體次數。拮抗縮宮素誘發大鼠子宮肌痙攣所致疼痛反應，降低大鼠子宮內膜中PGF2α的含量，升高子宮內膜中PGE2的含量，進而引起PGF2α/PGE2比值的升高；同時，烏雞白鳳丸還對正常大鼠離體子宮平滑肌具有明顯的抑制作用，能明顯對抗縮宮素所致的子宮平滑肌強烈收縮，使收縮頻率顯著減少，子宮平均張力顯著減弱，能緩解子宮平滑肌的痙攣性收縮。由此可知，烏雞白鳳丸可抑制原發性痛經引起的子宮痙攣疼痛，這與其本身可抑制子宮異常收縮的作用有關，同時與其降低子宮內膜中PGF2α的含量和升高子宮內膜中PGE2的含量、升高PGF2α/PGE2比值的作用相關。

烏雞白鳳丸作為中醫傳統名貴中成藥，近些年來，其治療價值在婦科領域進一步得到肯定，在內科、骨科、傳染科和男科諸多領域也得到廣泛地證實和應用。本實驗通過驗證烏雞白鳳丸對實驗性痛經的治療作用，初步探討其作用機制，從而為烏雞白鳳丸臨床上用于治療原發性痛經提供了一定的藥效學依據。

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Study on the treatment on primary dysmenorrhea with Wujibaifeng Pills

GUO Qiyue1，WU Qinghe2，CAO Hongying2，RU Li1，LIU Chan1，WU Jun3，GUO Zhongyi4，HUANG Ping2*

(1.Sci-tech Industrial Park，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China；2.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China；3.Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264100，China；4.Jinan University，Guangzhou 510632，China)

ObjectiveToexplorethetherapeuticmechanismofWujibaifengPills.MethodByusingthedysmenorrheamodelofSDfemaleratsinducedbyoxytocin，theeffectofdifferentdosesofWujibaifengPillsonlatencyperiodoftwistbodyofratswasobserved，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minsweremeasured，andthecontentofPGF2αandPGE2ofuteruswasdetected；byroutinemethod,thespecimenofuteruswereprepared，accordingtotheevaluateaveragetensionandcontractilityfrequencyofuterinesmoothmuscle(bybiologicalandfunctionalexperimentalsystem-BL-420E)，thecontractilityandcramping(oxytocin-induced)ofuterusatdifferentdosesofWujibaifengPillswereexplored.ResultAfteradministeredWujibaifengPills，thelatencyperiodoftwistbodyofprimarydysmenorrhearatswasobviouslyextended，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minswasmarkedlyreduced(P<0.01)；thecontentofPGF2αofprimarydysmenorrhealrats′uteruswaslargelydecreased(P<0.01)，PGE2increased(P<0.05)andtheratioofPGF2α/PGE2significantlydecreased(P<0.01).Theaveragetensionandcontractionfrequencyofnormalorcramping(oxytocin-induced)uterinesmoothmusclewereremarkablylowered(P<0.01).ConclusionWujibaifengPillscouldvisiblyimprovethepainofprimarydysmenorrhea，andthemechanismislikelyrelatedtoregulatingthecontentofPGF2αandPGE2ofuterusandinhibitingthecontractionofuterus.

WujibaifengPills；primarydysmenorrhea；dysmenorrheamodelofrats；prostaglandin(PG)；uterus

廣東省部產學研專項資金企業創新平臺(編號：2013B090800013)

郭起岳，男，碩士，主管中藥師

黃萍，女，教授，博士生導師

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.013

R965

A

1004-2407(2016)05-0482-04

2015-12-20)