保健食品中維生素E類成分的檢測與質量評價

廣西桂林食品藥品檢驗所（541012）蔣彥飛 張治軍 鐘名誠

維生素E為脂溶性酚類有機化合物，有較強的抗氧化作用，能清除出自由基，抵御人體過氧化產物自由基損害，保持組織完整性，提高機體免疫力、延緩衰老，另外，維生素E通過調整人體機能，對人類腫瘤細胞的生長和增殖有抑制作用[1][2][3]，所以，常用于老年營養保健食品的添加劑。保健食品中維生素E原料來源，有天然型維生素E和合成型維生素E兩種，均為α-生育酚苯環上酚羥基經乙酰化生成的醋酸酯，其中天然型維生素E為d-α-生育酚醋酸酯，合成型維生素E為dl-α-生育酚醋酸酯，其分子式均為C31H52O3。游離的α-生育酚分子式為C29H50O2，在其苯環上被取代官能團數目位置不同，又分為β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚三個同系物，其中β-生育酚、γ-生育酚分子式均為C28H48O2，δ-生育酚結構為C27H46O2。同系物的結構雖然相似，但其所具有的生物活性并不完全相同，其中α-生育酚的生物活性與抗氧化能力最強[4]。市場上的含維生素E保健食品種類繁多，產品標簽中配方原料來源，有天然維生素E，也有合成維生素E，并且價格差距較大。為科學分析評價保健食品中的維生素E，本文研究報道GC法同時測定維生素E、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量。

1 實驗儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀，具火焰離子化檢測器（美國）；數顯型漩渦混合器（Talboys，美國）；數顯恒溫水浴振蕩器（金壇市城西春蘭實驗儀器廠）。

1.2 試劑與試藥 維生素E（按C31H52O3計，含量為98.6%，中國食品藥品檢定研究院），α-生育酚(含量＞99.9%，Supelco公司，美國），γ-生育酚(含量＞98.5%，Supelco公司，美國），δ-生育酚(含量＞93.7%，Supelco公司，美國），正三十二烷（含量＞96.0%，梯希愛上海發展有限公司）；含維生素E保健食品產地分別為廣東、山東、浙江、北京、廣西等省、市、自治區的市售品；正己烷為色譜純；鹽酸為優級純；無水乙醇為分析純；水為娃哈哈飲用純凈水。

2 方法、結果與分析

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 DB-1彈性石英毛細管柱（30m×0.32mm×1μm）；進樣口溫度290℃；柱溫280℃；FID檢測器，檢測器溫度290℃；分流進樣，分流比30∶1，進樣量1μL；載氣為高純氮氣，流量2.0mL·min-1；正三十二烷內標物與維生素E分離度R，R應不小于1.5。

2.2 內標溶液制備 精密稱取正三十二烷1000.18mg，置1000mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。

2.3 試樣溶液的制備 取膠囊劑的內容物，混合均勻，片劑則研細混勻，根據樣品維生素E含量稱取試樣0.5～4g(精確到0.1mg)于50mL棕色容量瓶中，加入15mL50℃的0.5mol·L-1鹽酸溶液，充氮排除空氣，蓋上瓶塞，在漩渦混合器上漩渦1min，置于50℃振蕩器中振蕩10min后，冷至室溫，加入15mL無水乙醇，漩渦混勻1min，精密加入10mL內標溶液，再漩渦混勻2min，強力振蕩30s后，靜置，上清液用微孔濾膜濾過，收集濾液備用。

2.4 對照溶液的制備 分別精密稱取對照品維生素E40.51mg、α-生育酚40.70mg、γ-生育酚30.30mg、δ-生育酚40.28mg，置同一10mL量瓶中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照儲備液。

2.5 線性范圍考察 取混合對照儲備液逐級分別用內標溶液稀釋2、2、2、5、2、5倍，依次制成混合對照系列1、2、3、4、5、6、7溶液，進樣前用0.45μm濾膜過濾，按2.1項下色譜條件分別測定峰面積，以對照品的峰面積與內標物的峰面積比值為縱坐標Y，對照品的濃度為縱坐標X，分別繪制標準曲線，回歸方程見附表1。

維生素E混合對照溶液及某魚油樣品圖見附圖。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一混標對照溶液（系列5），連續測定6次，分別計算對照品的峰面積與內標物的峰面積比值，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的精密度（n=6）RSD值分別為0.8%、0.7%、0.5%、 0.3%。

2.7 重復性試驗 對同一樣品（某魚油2號樣品，不含維生素E）平行稱取7份，各約2g，精密稱定，按2.3項下方法同法制備，并按2.1項下色譜條件進行測定，從各標準曲線讀法對應成分濃度，分別計算試樣中各組分含量，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量的RSD值分別為1.7%、1.7%、2.0%（n=7），結果表明重復性良好。

2.8 穩定性試驗 取同一試樣溶液（某魚油2號樣品，不含維生素E），按2.1項下色譜條件，分別在0，8，16，24，30，35h測定，分別計算對照品的峰面積與內標物的峰面積比值，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚與各對應內標物比值的RSD值分別為0.6%、0.6%、0.5%。結果表明，供試品溶液配制在35h內穩定。

2.9 方法檢出限 精密稱取陰性樣品4.0128g，精密加入2.5項下混合對照系列1溶液（維生素E濃度：0.009895mg/mL，α-生育酚濃度：0.01016mg/mL，γ-生育酚濃度：0.007461mg/mLδ-生育酚濃度：0.009436mg/mL）4mL，于45℃水浴中通氮氣緩緩吹盡正己烷，按2.3項下方法同法制備并進行測定，以待測物響應值為3倍左右計，試樣最低檢出濃度為：維生素E9.9mg/kg，α-生育酚10.1mg/kg，γ-生育酚7.4mg/kg，γ-生育酚9.4mg/kg。

2.10 回收率試驗 取已知各組分含量的某魚油樣品6份，各約1g，精密稱定，精密加入混和對照液（維生素E：1.9618mg/mL，α-生育酚濃度：2.0030mg/mL，γ-生育酚濃度：1.5809mg/mL，δ-生育酚：1.5245mg/mL）1mL，按2.9項下方法同法制備，并按2.1項下色譜條件進行測定，以標準曲線法計算回收率，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的平均回收率為98.2%、99.1%、100.3%、96.7%，RSD分別為1.5%、2.0%、1.7%、2.2%。

附表1 四種成分線性關系分析結果表

附表2 25批含維生素E樣品調查檢測結果

附表3 25批保健食品維生素E狀況結果表

附表4 25批保健食品維生素E結果分析表

附圖 維生素E與生育酚混合對照溶液及某魚油樣品色譜圖（A：混合對照；B：某魚油樣品）

2.11 樣品測定 對不同來源不同批次含維生素E的樣品，按2.4項下方法測定含量，結果見附表2。

3 結果與討論

3.1 關于維生素E的定義問題 維生素E作為維生素類藥品，自《中國藥典》1977年版起，歷版均有收載，分子式均為C31H52O3，在2000年版前為dl-α-生育酚醋酸酯， 2005年版后分為天然型（d-α-生育酚醋酸酯）或合成型維生素E（dl-α-生育酚醋酸酯）。GB 19191-2003《食品添加劑 天然維生素E》中維生素E分為d-α-生育酚、混合生育酚（d-α-、d-β-、d-γ-和d-δ-生育酚）、d-α-醋酸生育酚、d-α-琥珀酸生育酚，GB 14756-2010《食品安全國家標準 食品添加劑 維生素E（dlα-醋酸生育酚）》中維生素E為dl-α-醋酸生育酚，GB 29942-2013《食品安全國家標準 食品添加劑 維生素E(dl-α-生育酚)》中維生素E為dl-α-生育酚，GB/T 5009.82-2003《食品中維生素A與維生素E的測定》中維生素E為d-α-、d-γ-和d-δ-生育酚，GB 54139-2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E 的測定》中維生素E為α-生育酚。由此可知，維生素E在不同行業、不同標準，其定義也不同，保健食品配方中維生素E為功效成分之一，筆者建議維生素E定義應以《中國藥典》規定為準。

3.2 保健食品中維生素E類成分的狀況分析共檢測保健食品25批，有2批未檢出維生素E類成分，另23批依據檢出成分類型進行歸納分類統計，結果見附表3。

附表3統計結果表明，25批樣品中，17批樣品有標示量值，比例為68%，8批檢出維生素E，比例為32%，5批檢出維生素E與α-生育酚，比例為20%，10批檢出生育酚類，比例為40%；此外，標識成分為天然維生素E的15批樣品中，僅有4批為維生素E，約占27%，多數樣品檢出成分為生育酚類成分。說明目前含維生素E保健食品標示維生素E成分與實際投料較為混亂，特別是標示為天然維生素E的保健食品，在生產過程中有以生育酚為原料或人為摻假現象，不符合國家標準預包裝食品標簽通則及衛生部保健食品標識規定的要求[5][6]。

3.3 保健食品中維生素E含量結果分析 依據測定數值折算為每粒（丸或片）含量，以每日最大服用量進行歸納分類統計，結果見附表4。

從附表4可知，除2批檢測結果為零外，23批樣品13批檢出維生素E，檢出率為52%，余下樣品檢出成分均為生育酚。參考《中國藥典》2015年版二部[7]，維生素E膠囊劑有5mg、10mg、50mg、100mg共4種規格，如以維生素E每次最小服用量5mg為限度，低于此限度的有2批，比例為9%，如以維生素E每次最大服用量100mg為高限，高于高限的有2批，比例為9%，說明多數樣品維生素E含量已達到治療劑量水平。如按食品添加劑使用標準[8]，維生素E最大使用量為0.2mg/g，除2批未檢出外，均超出標準。

3.4 測定方法的選擇 維生素E結構復雜，同系物多，準確分析測定比較困難[8]。近年來國內外致力于分析測定研究，開發的多種有效的分析方法，主要有：氣相色譜法[9]、高效液相色譜法[10]、液相色譜-串聯質譜法[11]等，這些方法各有優缺點。針對目前維生素E的研究現狀和國內實驗室儀器使用情況，本研究采用了氣相色譜分析法，因其前處理簡單，結果準確可靠，成本較低，并在較短的分析周期內，完成維生素E、α-、γ-和δ-生育酚的分析。同時，在色譜柱選擇方面，對比HP-5，DB-5，DB-1三種色譜柱，DB-1柱能有效分離這幾種成分，故本法采用DB-1毛細管柱為分離柱，可滿足保健食品中維生素E及各種生育酚同系物的定量分析要求。

3.5 結論 保健食品作為特定人群食用的食品，除安全無毒外，尚含一定量功效成分，以調節機體功能。從本文測定25批含維生素E保健食品結果看，反映出目前保健食品市場混亂，質量參差不齊，有的功效成分含量過低，達不到調節機體功能，有的過高則對人體有害，更有摻雜使假。提示相關監管部門應加強市場上保健品的衛生監管力度，除應針對衛生指標中有毒有害成分的檢測外，還應對其營養成分加強監測，以保護消費者利益。