普羅布考對動脈粥樣硬化兔MMP9表達的影響

劉玉梅　郝赫　梁霄

普羅布考對動脈粥樣硬化兔MMP9表達的影響

劉玉梅郝赫梁霄

目的 觀察普羅布考對兔主動脈粥樣硬化病變及基質金屬蛋白酶-9（MMP9）表達的影響。方法 27只新西蘭大耳白兔建立動脈粥樣硬化癥模型，隨機加喂普羅布考（n=9，普羅布考組）或阿托伐他汀（n=9，阿托伐他汀組）或高脂飲食（n=9，模型組）6周。觀察各組大白兔血脂含量，免疫組化法測各組兔主動脈MMP9表達。結果普羅布考組主動脈粥樣斑塊，低密度脂蛋白膽固醇及MMP9表達均較模型組降低。結論 普羅布考在降低膽固醇的同時，抑制MMP9表達，發揮抗動脈粥樣 硬化、穩定斑塊作用。

普羅布考；動脈粥樣硬化；高密度脂蛋白膽固醇；基質金屬蛋白酶-9

普羅布考是一種抗動脈粥樣硬化和穩定斑塊類藥物，其具體作用機制并不清晰。基質金屬蛋白酶（matrixmetallo proteinases，MMPs）可降解細胞外基質，MMP9在細胞外基質降解過程中起關鍵作用，成為動脈粥樣硬化的炎性因子，參與并導致斑塊破裂，近年來受到廣泛關注。本實驗通過建立兔動脈粥樣硬化模型，觀察動脈粥樣硬化斑塊，血脂及MMP9水平的變化。分析普羅布考抗動脈粥樣硬化及穩定斑塊機制。

1　材料和方法

1.1實驗動物和試劑

36只3月齡新西蘭大白兔由延邊大學基礎醫學院動物飼養中心提供。體重（2.0±0.5）kg。普羅布考：吉林康奈爾藥業提供；阿托伐他汀鈣：北京嘉林藥業股份有限公司；蛋黃粉：天津化學試劑公司提供；膽固醇：上海惠世生化試劑有限公司提供。MMP9免疫組織化學試劑盒（Abcam公司提供）。

1.2方法

36只兔飼養1周，隨機選27只高膽固醇飼料喂5周。第6周起隨機加喂普羅布考1.5 g/d（普羅布考組，n=9）或阿托伐他汀鈣10 mg/d（阿托伐他汀鈣組，n=9）或高脂飲食（模型組，n=9），余9只普通飼料喂養13周作對照組。

13周時取空腹血4 ml，分離后血清。氧化酶法測血清總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG），低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoproteincholesterol，LDLC）和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDLC）。采用SABC法，石蠟包埋，烘片，脫蠟，滅活內源酶，修復抗原。免疫組化結果判定：用AB值法測MMP9表達的半定量分析結果。

1.3統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行分析。采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），方差齊時用LSD-t檢驗，方差不齊時用Tamhane-t檢驗進行兩兩比較。計數資料用Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有統計學意義，均為雙側檢驗。

2　結果

2.1各組兔13周時血脂比較

13周末普羅布考組、阿托伐他汀組血清TC、LDL低于模型組，差異具有統計學意義（P＜0.05），血清TG、HDL與模型組對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。普羅布考組、阿托伐他汀組與正常對照組血清TC、TG、HDL、LDL對比，差異無統計學意義（P ＞0.05），如表1。

2.2各組兔免疫組化MMP9蛋白的表達

普羅布考組與模型組相比MMP9明顯降低，差異具有統計學意義（P＜0.05），與阿托伐他汀鈣片組比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），如圖1。

表1　13周4組血脂比較（±s，n=9）（mm o l/L）

表1　13周4組血脂比較（±s，n=9）（mm o l/L）

注：與模型組比較，**P＜0.05

TC　TG　HDL　LDL正常對照組　2.38±0.25**　1.18±0.82　1.19±0.37　1.59±0.56**模型組　36.15±4.31　1.14±0.33　0.89±0.28　13.38±4.21普羅布考組　2.26±1.36**　0.78±0.32　1.13±0.33　1.21±0.64**阿托伐他汀組　1.69±1.34**　1.25±0.37　1.02±0.32　0.78±0.38**

圖1　各組兔主動脈免疫組化（×100）

3　討論

普羅布考具有獨特的抗動脈粥樣硬化屬性，包括降低LDL-C、抗氧化及抗炎功能[1］， 穩定斑塊和降膽固醇作用已得到證實[2］。動脈粥樣硬化是一種與氧化應激和血栓相關的炎癥性疾病。HDL抑制動脈粥樣硬化通過抑制LDL氧化[3］。普羅布考雖降低HDL-C水平，仍具較強抗動脈粥樣硬化作用[4］。 本實驗發現普羅布考組兔的動脈粥樣硬化面積和程度均較模型組下降。基質金屬蛋白酶存在于人體各組織，能降解所有細胞外基質的蛋白成分[5］。MMP-9作為其一員，在組織損傷、修復中不可或缺。動脈粥樣 硬化斑塊由纖維帽和粥樣物組成，MMP-9高表達纖維帽被降解變薄、易破損，其內部粥樣物釋放入血；所以脂質多少及纖維帽的薄厚決 定斑塊的穩定[6］。嚴鵬科等實驗結論[7］，普羅布考可抑制巨噬細胞分泌MMPs及影響其活性，啟到穩定斑塊作用。本實驗得出普羅布考組主動脈MMP-9，血脂水平明顯降低，明顯低于模型組，普羅布考是通過降低MMP-9表達，發揮抗動脈粥樣硬化，穩定斑塊作用。普羅布考與阿托伐他汀組在實驗結果上無統計學差異，然而他汀類藥物主要副作用是肝臟和肌肉毒性[8］。在日本，普羅布考已經被用來治療那些不能耐受阿托伐他汀的高血脂患者。本實驗進一步確定MMP9 在普羅布考抗動脈粥樣硬化中地位。但普羅布考能否作為臨床患者不適用阿托伐他汀時的替代藥，需要進一步觀察。

[1]Yu-Song Guo，Cai-Xia W ang，Jian Cao，et al. Antioxidant and lipid-regulating effects of probucol combined withatorvastatin in patients with acute coronary syndrome[J］. J Thorac Dis，2015，7（3）：368-375.

[2]趙水平，洪紹彩，鄧平，等. 普羅布考對主動脈粥樣斑塊形成及血栓調節蛋白的 影響[J］. 中國動脈硬化雜志，2006，14（6）：503-507.

[3]Shekhanawar M，Shekhanawar SM，Krisnaswamy D，et al. The role of‘paraoxonase-1 activity' as an antioxidant in coronary artery diseases[J］. J Clin Diagn Res，2013，7（7）：1284-1287.

[4]Inagaki M，N akagaw a-Toyam a Y，N ishida M，et al. Effect o f probuco l on antioxidant properties of HDL in patients with heterozygous fam ilial hypercholesterolem ia[J］. JAtheroscler Thromb，2012，19（7）：643-656.

[5]Lu P，Takai K，Weaver VM，et al. Extracellu lar Matrix Degradation and Remodeling in Development and Disease[J］. Cold Spring Harb Perspect Biol，2011，3（12）：1750-1754.

[6]許學升. 急性冠脈綜合征與金屬基質蛋白酶相關性探討[J］. 醫藥論壇雜志，2006，27（7）：15-16.

[7]嚴鵬科，廖端芳，楊永宗. 普羅布考對巨噬細胞分泌基質金屬蛋白酶9的抑制作用[J］. 中國動脈硬化雜志，2003，11（3）：199-202.

[8]W hayne TF Jr. Problem s and possible solutions for therapy with statins[J］. Int J Angiol，2013，22（2）：75-82.

Effect of Probucol on the Expression of MMP9 in Atherosclerotic Rabbits

LIU Yumei HAO He LIANG Xiao Department of Internal Medicine-Cardiovascular， The Affliated Hospital of Jilin Medical College， Jilin Jilin 132000， China

Objective To observe the effect of probucol on the expression of matrix metalloproteinases （MMP9） in atherosclerotic lesions of rabbits. Methods Establishment of atherosclerosis model in 27 New Zealand white rabbits， 6 weeks were random ly fed to probucol （n=9， probucol group） or atorvastatin （n=9， atorvastatin group） or high fat diet （n=9， model group）. The blood lipid levels were observed in each group， and the expression of MMP9 in aorta of each group was measured by immunohistochem istry. Resu lts Com pared with the m odel group， the exp ression o f aortic atherosclerotic plaque， low density lipoprotein cholesterol and MMP9 were decreased in the group. Conclusion While lowering cholesterol， MMP9 expression was inhibited， and the role of anti atherosclerosis and stabilizing plaque was also played.

Probucol， A therosclerosis， High density lipoprotein cholesterol， Matrix metalloproteinases-9

R 965

A

1674-9308（2016）25-0132-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.25.081

吉林醫藥學院附屬醫院心內科，吉林 吉林 132000