乳腺癌患者血清中中期因子、血小板因子4以及黏蛋白1含量檢測對病情評估的價值

趙麗娟，徐衛云，張曉紅，張珍，張靖

（四川省綿陽市中心醫院乳腺外科，四川綿陽621000）

乳腺癌患者血清中中期因子、血小板因子4以及黏蛋白1含量檢測對病情評估的價值

趙麗娟，徐衛云，張曉紅，張珍，張靖

（四川省綿陽市中心醫院乳腺外科，四川綿陽621000）

目的分析乳腺癌患者血清中中期因子（MK）、血小板因子4（PF4）以及黏蛋白1（MUC1）含量檢測對病情評估的價值。方法選取2012年11月-2015年1月在綿陽市中心醫院接受治療的乳腺癌患者178例作為觀察組對象，根據病理分型不同分為非浸潤性癌組32例，早期浸潤性癌組50例，中晚期浸潤性癌組96例。另取同期在本院接受體檢的女性108例作為健康對照組。比較各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量；CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平；CEAmR NA、SurvivinmR NA、MMP-2mR NA、TIMP-2 mR NA表達等差異。進一步分析血清中MK、PF4以及MUC1含量與乳腺癌惡性生物學指標值之間的相關關系。結果乳腺癌患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量明顯高于健康對照組，25-OH-D水平低于健康對照組（P<0.05）；中晚期浸潤性癌組患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。結論乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效準確的評估患者的病情嚴重程度，可以作為遠期評價臨床治療效果及治療預后的指標之一。

乳腺癌；病情評估；血清指標

乳腺癌是危害女性健康的主要惡性疾病之一，發病率在全球呈上升趨勢。目前，乳腺癌的臨床診斷及治療已經獲得巨大的進步，但是仍有一部分乳腺癌患者死于復發或者轉移[1]。提高乳腺癌的早期診斷一直是臨床研究的重點，最新的研究發現中期因子（Midkine，MK）含量、血小板因子4（platlet factor 4，PF4）、黏蛋白1（mucin 1，MUC1）均在乳腺癌患者的血清中存在異常表達，有望成為早期診斷乳腺癌的全新標志物[2]。本次研究主要分析乳腺癌患者血清中MK、PF4以及MUC1含量檢測對病情評估的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2012年11月-2015年1月在綿陽市中心醫院接受治療的乳腺癌患者178例作為觀察組。均經空芯針穿刺病理確診為乳腺癌，且為原發性單側、未接受放化療及內分泌治療。根據病理分型不同包括非浸潤性癌組32例，早期浸潤性癌組50例，中晚期浸潤性癌組96例。另取同期在本院接受體檢的健康女性108例作為健康對照組。觀察組患者年齡40～72歲，平均（57.92±6.05）歲；對照組患者年齡38～71歲，平均（54.67±6.11）歲。兩組研究對象的基線資料差異無統計學意義，P>0.05。

1.2樣本處理

在采取干預措施前，抽取所有入組對象的晨起空腹外周靜脈血2 ml，經1 000 r/min離心3 min（離心半徑17.5 cm），靜置取上層血清后放入-80℃冰箱內保存待測。

1.3檢測指標

采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定入組對象的MK含量、PF4、MUC1水平。采用電化學發光免疫分析法測定血清糖類抗原153（CA153）水平，采用ELISA法測定血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、25-羥基維生素D（25-OH-D）水平，采用免疫比濁法測定D-二聚體（D-Dimer）水平。靜脈血加入枸櫞酸鈉抗凝后，用淋巴細胞分層液分離外周血單個核細胞，加入Trizol 1 ml后，用經典方法抽提總RNA。經反轉錄獲得cDNA及實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time PCR）后，測定血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2mRNA水平。

1.4統計學方法

采用SPSS 23.0統計軟件進行數據分析，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，用方差分析，相關性分析用Pearson檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1血清MK、PF4以及MUC1含量

乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量明顯高于健康對照組（P<0.05），經LSD兩兩比較發現中晚期浸潤性癌組患者的血清MK、PF4以及MUC1含量高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P< 0.05）。見表1。

表1　各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量比較

表1　各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量比較

組別MK/（pg/ml）PF4/（ng/ml）MUC1/（u/ml）非浸潤性癌組（n=32）267.39±21.67 0.25±0.0324.65±2.18早期浸潤性癌組（n=50）403.27±37.88 0.31±0.0235.71±3.25中晚期浸潤性癌組（n=96）672.55±58.62 0.38±0.2945.38±4.92健康對照組209.73±24.96 0.21±0.0217.95±2.17 F值9.3426.2857.481 P值0.0120.0190.015

2.2CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平

乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平明顯高于健康對照組，25-OH-D水平低于健康對照組（P<0.05），經LSD兩兩比較發現中晚期浸潤性癌組患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。見表2。

2.3CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA表達

乳腺癌患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平明顯高于健康對照組（P<0.05），經LSD兩兩比較發現中晚期浸潤癌組患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。見表3。

表2　各組研究對象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比較（±s）

表2　各組研究對象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比較（±s）

組別CA153/（u/ml）VEGF/（pg/ml）25-OH-D/（nmol/L）D-Dimer/（mg/ml）非浸潤性癌組（n=32）24.89±2.36152.93±11.724.72±0.38196.23±14.52早期浸潤性癌組（n=50）30.61±2.86251.48±19.633.56±0.39261.06±20.55中晚期浸潤性癌組（n=96）54.28±4.77382.71±29.552.71±0.23378.55±29.63健康對照組12.37±0.1998.23±6.715.93±0.49123.62±10.87 F值7.93711.2736.3819.279 P值0.0150.0110.0190.013

表3　各組研究對象的血清CEA mRNA等水平比較（±s）

表3　各組研究對象的血清CEA mRNA等水平比較（±s）

組別CEA mRNA非浸潤性癌組（n=32）9.75±0.83早期浸潤性癌組（n=50）13.61±1.73中晚期浸潤性癌組（n=96）20.45±2.11健康對照組7.13±0.69 F值9.341 P值0.014 SurvivinmRNAMMP-2mRNATIMP-2mRNA 4.76±0.398.43±0.76156.28±12.71 5.88±0.4519.25±0.17190.33±17.52 7.93±0.6830.82±3.14218.62±19.37 3.12±0.293.27±0.39101.72±9.55 6.3849.83212.047 0.0190.0070.002

2.4相關關系

采用一元線性回歸法分析血清MK、PF4以及MUC1含量與乳腺癌惡性程度指標值之間存在的相關關系。結果顯示，MK、PF4以及MUC1含量與CA153、VEGF、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平呈正相關，與25-OHD水平呈負相關（P<0.05）。

3 討論

乳腺癌是女性高發惡性腫瘤性疾病，檢測血清腫瘤標志物是判斷疾病預后的良好方式，具有無創便捷等特點。中期因子（MK）在多種人類惡性腫瘤組織中均呈過度表達，已經有研究證實MK在乳腺組織中呈高表達且具有高度特異性。目前國內對于MK的研究多側重于其在腫瘤組織中的表達，忽略了其血清學檢測[3]。血小板因子4（PF4）是內源性血管新生抑制物，屬于血小板特異性蛋白，可以抑制VEGF功能而發揮作用。黏蛋白1（MUC1）是分布于機體正常黏膜表面的高分子量糖蛋白，分子由肽核心及糖鏈組成，對正常上皮起潤滑和保護作用，還有介導信號轉導、免疫活化及抑制作用[4]。在乳腺腫瘤組織中MUC1可出現量與質的改變，目前認為MUC1有望成為新型腫瘤標志物用于乳腺癌的早期診斷及預后判斷。本次研究中首先檢測了各組患者血清中MK、PF4、MUC1的含量情況，結果顯示MK、PF4、MUC1在乳腺癌患者的血清中均呈高表達，且隨著腫瘤浸潤程度加重其水平上升。MK、PF4、MUC1作為臨床新發現的腫瘤組織特異性表達分子，在患者血清中也有顯著的異常表達，使其可以成為觀察患者病情進展、指導臨床治療及判斷預后的有效指標。

糖類抗原153（CA153）最先發現于乳腺癌細胞中，是乳腺細胞上皮表面糖蛋白的變異體，當細胞發生癌變時可引起細胞表面糖類的變化，由癌細胞向血循環中釋放，是臨床乳腺癌篩查的有效指標。血管內皮細胞生長因子（VEGF）是目前已知的作用最強的促血管生成因子之一，許多腫瘤細胞均可分泌VEGF并促進腫瘤侵襲轉移[5]。VEGF已經成為判斷腫瘤侵襲力的常用指標，VEGF表達量高的患者多將早期發生遠處轉移及預后不佳。25-羥基維生素D（25-OH-D）可以通過抑制腫瘤細胞周期進展、誘導乳腺癌細胞凋亡、下調c-myc、c-fos等前癌基因提升機體的抗腫瘤能力。隨著細胞內鈣離子濃度上升，Bax/Bcl-2比值增大，可以進一步引起不依賴Caspase-3途徑的細胞凋亡[6]。25-OH-D是檢測乳腺癌惡性程度的又一敏感指標，其水平過低是乳腺癌發病的潛在促發因素。D-二聚體（D-Dimer）是交聯蛋白的特異性產物，其水平增高反映機體繼發性纖溶增強。最新研究表明血漿D-Dimer水平可以作為預測腫瘤發生血栓的獨立因素，乳腺癌患者尤其是晚期患者常伴有凝血功能異常。早期檢測乳腺癌患者的D-Dimer水平可以作為判斷預后及術后復發轉移的指標之一。本次研究對上述指標的血清水平均進行檢測，結果顯示，乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平呈高表達，25-OH-D水平較低，且隨著乳腺癌浸潤程度加深這種變化趨勢更為明顯。這一變化與各個分子在乳腺組織細胞癌變過程中的演變過程一致，進一步提示CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer在判斷乳腺癌病情程度及預后方面的有效性及實用性。

CEA屬于上皮組織特異性標志基因，通常作為消化道腫瘤的標志物。目前研究顯示，CEA高表達于乳腺癌組織中，正常血液、骨髓、淋巴結等組織中則不表達，故CEAmRNA檢測可以作為判斷乳腺癌轉移的方式之一。MMP-2屬于基質金屬蛋白酶（MMPs）家族成員，可以降解基底膜和基質、突破基質屏障并促進腫瘤的侵襲轉移，主要表達于乳腺癌細胞胞質中，在正常組織及良性組織中極少表達[7]。TIMP-2是MMP-2的特異性抑制物，可以抑制腫瘤細胞的侵襲轉移，以1∶1的非共價鍵形式與活化的MMP-2形成復合物，有效抑制MMP-2的膠原分解活性及明膠活性。在乳腺癌患者中存在MMPs與TIMPs之間的平衡失調，有研究顯示乳腺癌患者中TIMP-2與MMP-2表達均高于正常組織，是由于腫瘤細胞受到腫瘤刺激后產生更多的TIMP-2，增強機體抑制原發性腫瘤生長、局部浸潤轉移的作用。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，其具有腫瘤特異性，只表達于腫瘤及胚胎組織中，且與腫瘤細胞的分化增殖、浸潤轉移等關系密切[8-9]。有研究測定Survivin在乳腺癌中的表達時發現其表達陽性率高達90.2%，在緊鄰正常組織中僅為23%，故Survivin成為診斷乳腺癌的有效、獨立的標志物。本次研究檢測上述腫瘤標志物的血清表達情況，結果顯示，乳腺癌患者的血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA均呈高表達，且隨著腫瘤浸潤程度增加其表達量上升，進一步說明其與腫瘤進展變化的緊密關系[10]。

MK、PF4以及MUC1是乳腺癌檢測的新指標，CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA是判斷乳腺癌進展程度、預后等的傳統指標。MK、 PF4以及MUC1具有檢測方便、可重復測定等優勢，關于其與傳統乳腺癌惡性指標間的相關性，本次研究做進一步分析，結果顯示，MK、PF4、MUC1指標水平與CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA等均存在直接的相關關系，提示可以通過測定MK、PF4、MUC1水平全面準確地評價乳腺癌患者的腫瘤惡性程度，判斷臨床治療的有效性，對治療結局做合理地預估，減少乳腺癌患者的血液指標檢測項目但是并不降低檢測準確性及有效性。

綜上所述，得出以下結論：乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效準確地評估患者的病情嚴重程度，并可以作為遠期評價臨床治療效果及治療預后的指標之一，具有現實應用價值。

[1]何建明,朱少芳,黃偉,等.25-羥基維生素D血鈣鈣敏感受體及E-鈣粘蛋白與乳腺癌發生風險的病例對照研究[J].廣東醫學, 2014,35(2):213-215.

[2]張敏.中期因子在乳腺癌患者血清中的表達及其臨床意義[J].海南醫學院學報,2016,22(2):108-111.

[3]黃芳.VEGF和CA153表達水平與乳腺癌疾病進展的關系[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(2):147-150.

[4]STEPHENSON J J,NEMUNAITIS J,JOY A A,et al.Randomized phase 2 study of the cyclin-dependent kinase inhibitor dinaciclib(MK-7965)versus erlotinib in patients with non-small cell lung cancer[J].Lung Cancer,2014,83(2):219-223.

[5]BRIDGES KA,TONIATTI C,BUSER CA,et al.Niraparib (MK-4827),a novel poly(ADP-Ribose)polymerase inhibitor,radiosensitizes human lung andbreast cancercells[J].Oncotarget, 2014,5(13):5076-5086.

[6]馮春翠.宮頸癌患者血清TSGF、SCC含量檢測及腫瘤惡性生物學行為的評估[J].海南醫學院學報,2015,21(1):105-107.

[7]張錄民,楊瑞光,姚健.卵泡抑素、MUC1基因在乳腺癌患者血清中的表達及其臨床意義[J].中華臨床醫師雜志,2013,7(4): 1458-1461.

[8]MITA M M,JOY A A,MITA A,et al.Randomized phase II trialofthecyclin-dependentkinaseinhibitordinaciclib (MK-7965)versus capecitabine in patients with advanced breast cancer[J].Clin Breast Cancer,2014,14(3):169-176.

[9]鄒禮明.乳腺癌患者血清MK的定量檢測及其臨床意義[J].中國實用醫藥,2014,9(18):43-46.

[10]張文進,李云濤,袁洋,等.乳腺浸潤性導管癌患者血中PF4和VEGF表達臨床意義分析[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21 (11):827-830.

（張蕾編輯）

Value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of severity of disease

Li-juan Zhao，Wei-yun Xu，Xiao-hong Zhang，Zhen Zhang，Jing Zhang
（Department of Breast Surgery，Central Hospital of Mianyang，Mianyang，Sichuan 621000，China）

Objective To analyze the value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of disease condition.Methods A total of 178 breast cancer patients treated in our hospital between November 2012 and January 2015 were chosen as the subjects of observation group.According to differentpathological types，the breast cancer patients were divided into early-invasive cancer group（n=50），non-invasive cancer group（n=32）and advanced-invasive cancer group（n=96）.At the same time 108 cases of healthy women undergoing medical examination in our hospital were chosen as control group.The differences in serum MK，PF4 and MUC1 content，CA153，VEGF，25-OH-D and D-Dimer levels，and CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA，TIMP-2 mRNA expressions were compared among the groups.The correlations of serum MK，PF4 and MUC1 content with malignant breast cancer indexes were further analyzed.Results Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels of the breast cancer patients were significantly higher than those of the healthy control group，while their 25-OH-D level was lower than that of the healthy control group（P＜0.05）.Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels were significantly higher while 25-OH-D level was significantly lower in theadvanced-invasive group than in the early-invasive carcer and non-invasive cancer groups（P＜0.05）.Conclusions Serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients can be effectively and accurately assess the severity of the disease，and can be used as long-term evaluation indicators of therapeutic effect and prognosis.

breast cancer；assessment of disease condition；serum index

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.18.012

1005-8982（2016）18-0060-04

2016-02-22