飼料中n—3長鏈多不飽和脂肪酸水平對花鱸幼魚血清生化指標的影響

徐瀚林

摘 要：為研究飼料中n-3 長鏈多不飽和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）水平對花鱸幼魚血清生化指標的影響，以初始體重（29.2±1.34）g的花鱸幼魚為研究對象，分別投喂n-3 LC-PUFA含量分別為0.13、0.30、056、1.03、1.45、2.41（%飼料干物質）的飼料，實驗周期63 d。結果表明，飼料中n-3 LC-PUFA水平對花鱸幼魚血清堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）活性、總甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）含量無顯著性影響（P>0.05），而血清中肌酐（CREA）水平在飼料中n-3含量為1.45%時顯著高于其余各組（P<0.05）。結果表明，以血清CREA含量為標準，花鱸幼魚飼料中n-3 LC-PUFA含量應低于1.45%。

關鍵詞：花鱸；n-3長鏈多不飽和脂肪酸；血清生化指標

魚油是海水魚類飼料中非常重要的組成部分，其主要功能之一就是為魚類提供生長所需的n-3 長鏈多不飽和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）。對大多數海水魚類而言，n-3 LC-PUFA是其必需脂肪酸。其對魚類的作用包括：（1）促進魚類組織細胞正常發育，維持其正常生理機能[1-2]；（2）促進魚類神經系統發育[3]；（3）促進魚類繁育[4]；（4）提高免疫力[5]。但大多數海水魚類缺乏由亞油酸和亞麻酸合成LC-PUFA的能力[6]。在自然環境中，海水魚類從藻類或是食物鏈中等級較低的生物中攝入n-3 LC-PUFA。而對于養殖的海水經濟魚類而言，飼料是其最主要的營養來源，因此，在飼料中必須添加適量n-3 LC-PUFA以滿足海水魚類正常生理需要。當前，魚油是海水養殖魚類飼料中n-3 LC-PUFA的主要提供者。但隨著近年來水產飼料工業的不斷發展，魚油需求量逐年增加，而近年來捕撈業衰退、海洋資源嚴重匱乏導致魚粉和魚油產量逐年下降，難以滿足市場需求，魚油資源不足是導致養殖成本升高的一個重要因素。同時，為發展低魚油低魚粉含量的環境友好水產飼料，貫徹水產行業可持續發展戰略，必須提高飼料中魚油的利用率。因此，科研人員已經從各個方面研究飼料中n-3 LC-PUFA水平對養殖魚類影響，以期提高魚類對于n-3 LC-PUFA的利用率，以達到降低飼料中魚油水平的目的。

花鱸（Lateolabrax japonicus）是我國重要的海水養殖品種，在我國南北方均有養殖，肉食性，性格兇猛，具有養殖周期短，經濟價值高等優勢。根據中國漁業統計年鑒（2015），2014年我國花鱸產量為113 803 t，位居海水養殖魚類前列。花鱸的一個非常重要的特點是其飼料普及率較高。研究n-3 飼料中LC-PUFA水平對花鱸幼魚血清生化指標的影響能夠一定程度上為設計營養合理，高效健康的花鱸幼魚飼料提供參考。

1 材料及方法

1.1 實驗飼料

實驗基礎飼料以脫脂魚粉和豆粕為主要蛋白源，粗蛋白含量約為46%，粗脂肪含量約為12%，通過向基礎飼料中添加不同量的DHA富含油（DHA含量：總脂肪酸的37.65%；形式：DHA-甘油三酯；江蘇天凱生物科技有限公司）以及EPA富含油（EPA含量：總脂肪酸的52%；形式：EPA-甘油三酯；河北海源健康生物科技有限公司），用軟脂酸甘油酯調平，保持DHA/EPA為205左右，制作含有不同濃度（0.10%、0.25%、0.60%、1.00%、1.50%、2.50%干物質）n-3 LC-PUFA的6種等氮等能的飼料，同時在飼料中添加2%ARA富含油以滿足花鱸幼魚生長的需求。飼料中n-3 LC-PUFA含量通過高效氣相色譜（GS， HP6890， USA）測定，分別占干物質含量的0.13%、0.30%、0.56%、1.03%、1.45%、2.41%。

飼料原料磨碎后過320 μm篩，按比例由少到多混勻后，加入不同比例的n-3 LC-PUFA富含油，充分混合后加水制粒（FII型雙螺桿擠條機，華南理工大學，廣州）。顆粒大小約為2.5 mm× 5.0 mm，制好的飼料顆粒45 ℃烘干12 h，存放于-20 ℃待用。

1.2 養殖實驗

實驗用魚由寧波市象山縣外高泥村象山港灣育苗場購得，為當年同批孵化所得苗種。正式養殖實驗進行前，先將實驗所用到的花鱸幼魚暫養，養殖環境為海水浮式網箱（3.0 m× 3.0 m× 3.0 m），同時投喂商業飼料2周，以促使實驗魚轉餌，以適應實驗用顆粒飼料以及所處養殖水環境。

實驗開始前24 h，停止商業飼料的投喂，使實驗魚處于饑餓狀態，用丁香酚（1：10 000）麻醉后對實驗魚體重進行稱量。選取規格相近的實驗魚（29.2±1.34）g，將其隨機分配到18個海水浮式網箱中（1.5 m×1.5 m×2.0 m），每個網箱放入30尾。每組飼料設三個重復網箱。每日早晚（早晨5：00及下午5：00）各飽食投喂一次。養殖實驗共持續9周，期間水溫為22.5 ℃到29.5 ℃，鹽度為28‰ 到33‰，海水溶氧約為6 mg/L。

1.3 血清生化指標的測定

待養殖試驗結束，將實驗魚饑餓24 h，準備進行取樣。取樣前用丁香酚對實驗魚進行麻醉，用酒精擦拭魚體，用27號針和1 mL注射器通過抽取尾靜脈血的方式由花鱸尾部取血，將取出的血液放入無菌的新1.5 mL離心管中，室溫靜置2 h，然后放入4 ℃冰箱靜置4 h。將分層后的全血在4 ℃下500 g離心10 min，吸取上層血清入新無菌的1.5 mL離心管中，-20 ℃保存待用。將每個網箱獲得的血清混合。血清堿性磷酸酶（ALP）活性、肌酐（CREA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）及乳酸脫氫酶（LDH）含量根據相應試劑盒說明書使用邁瑞BS-100自動生化分析儀（邁瑞，中國）進行測定。

1.4 計算與數據分析

數據統計使用SPSS 20.0，首先進行單因素方差分析（one-way ANOVA），當數據達到顯著水平后（P<0.05），采用Turkey方差齊性分析，數據表示為“平均值±標準誤”。

2 結果

在本實驗研究水平內，飼料中n-3 LC-PUFA含量未對花鱸幼魚血清ALP、TG、TC及LDH造成顯著性影響（P>0.05）（圖1）。而血清中肌酐水平在n-3含量為1.45%時顯著高于其余各組（P<0.05）。

3 討論

血液是動物十分重要的組織，其生理生化指標能夠很好地反映機體狀態。本實驗研究發現，隨著飼料中n-3 LC-PUFA水平上升，花鱸血清中ALP含量呈現先上升后下降的趨勢，但這種趨勢并不顯著。ALP在調控水產動物代謝中起到十分重要的作用，在體內能夠直接調控磷酸基團的轉移與代謝[7]，除此之外，研究表明ALP在魚類體內還參與了對免疫反應的調控[8]。本實驗結果說明，飼料中n-3 LC-PUFA能夠在一定程度上增強魚體健康水平，但這種作用效果并不明顯。

而在飼料中n-3 LC-PUFA水平為145%（干物質）組，實驗魚血清CREA的含量顯著高于其它各組。CREA是肌酸和磷酸肌酸的代謝最終產物，主要通過腎小球進行代謝。臨床上，血清CREA常用于反映腎臟受損情況。而在魚類的研究中，其與肌肉活動量相關[9]。本實驗在海水浮式網箱中進行，實驗隨機分組，因此實驗魚可認為有較相似的活動量。因此，1.45% n-3 LC-PUFA組肌酐的顯著性升高可能與實驗魚腎臟受損有關。

血清TC和TG含量是衡量魚體脂肪沉積與否的重要因素。本實驗中，血清TC和TG含量并未顯著受到飼料中n-3 LC-PUFA水平的影響，這與在Wistar大鼠中的研究結果類似：在飼料中添加n-3 LC-PUFA后，其血清TG與TC含量與對照組無顯著性差異。同時，本實驗中，血清TC含量呈現先升高后下降的趨勢，但趨勢并不顯著，這可能是由于當飼料中的n-3 LC-PUFA處在合適水平時，魚體健康水平上升，TC含量恢復正常所致。

LDH存在于機體各組織器官中，參與機體糖酵解過程。臨床上，乳酸脫氫酶也用于反映組織細胞受損程度的指標。在本實驗中LDH的水平并未隨著n-3 LC-PUFA水平的變化發生顯著變化。這從一定程度上說明，本研究所涉及的n-3 LC-PUFA水平并不會對花鱸幼魚組織如心臟、肝臟等造成顯著性傷害。

綜上所述，飼料中適宜n-3 LC-PUFA水平（約1.03%干物質）能夠一定程度提高花鱸幼魚魚體健康水平，而從血清CREA的角度表明，花鱸幼魚飼料中n-3 LC-PUFA含量應低于1.45%。

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Abstract：The study was conducted to evaluate the effect of dietary n-3 LC-PUFA content on serum biochemical indexes of juvenile Japanese seabass （Lateolabrax japonicus）. Triplicate groups of 30 Japanese seabass were fed with six diets with grade levels of n-3 LC-PUFA （0.13%， 0.30%， 0.56%， 1.03%， 1.45% and 2.41% of dry weight） to apparent satiation twice daily for 9 weeks. According to the results， the activity of serum alkaline phosphatase （ALP） and lactate dehydrogenase （LDH） and the content of serum total cholesterol （TC） and triglyceride were not significantly affected by the dietary n-3 LC-PUFA level （P<0.05）. In the 1.45% n-3 LC-PUFA group， the creatinine （CREA） content was significantly higher than other groups. Based on the index of CREA， the optimum dietary n-3 LC-PUFA level may not be higher than 1.45%.

Key words：Japanese seabass； n-3 LC-PUFA； serum biochemical indexes

（收稿日期：2016-05-31）