早期梅毒血清IL-37和IL-38的檢測

張勝佳　李富容　劉丹璇　溫　晶　李　珍肖海璐　李中偉　鄭榮濤　侯建玲　田洪青

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·論著·

早期梅毒血清IL-37和IL-38的檢測

張勝佳1,2李富容2劉丹璇2溫晶2李珍2肖海璐1,2李中偉2鄭榮濤2侯建玲2田洪青2

目的：檢測早期梅毒患者血清IL-37和IL-38的水平。方法：采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測140例早期梅毒患者和180例正常對照血清IL-37、IL-38的表達水平。結果：早期梅毒患者血清中IL-37和IL-38的中位數分別為14.15 pg/mL和12.21 pg/mL,正常對照組分別為31.76 pg/mL和17.09 pg/mL，差異均有統計學意義(均P<0.005)。結論：早期梅毒患者外周血清中IL-37和IL-38降低，可能與梅毒患者細胞免疫相關。

早期梅毒；IL-37；IL-38

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum TP)引起的一種慢性性傳播疾病，幾乎可侵犯全身各個器官，產生多種多樣的癥狀或體征、功能障礙、組織破壞乃至死亡。細胞免疫是機體清除梅毒螺旋體的主要免疫反應[1]。梅毒早期細胞免疫反應以Th1為主、Th17細胞高表達是其特征之一[2，3]。TNF-α作為一種經典的Th1型細胞因子在梅毒螺旋體的清除中發揮了重要作用，在早期梅毒外周血的表達明顯高于正常對照[4-6]。IL-37作為新型的抗炎細胞因子，具有抑制炎癥反應及炎癥因子的功能，尤其是對TNF-α 的抑制率可以達到80%～98%[7]。Th17細胞是具有

獨立功能的細胞亞群，Th17細胞在自身免疫性疾病、感染性等疾病中發揮著重要作用，Th17細胞以及其主要細胞因子IL-17在早期梅毒外周血中的表達明顯高于正常對照[8]。IL-38作為炎癥抑制因子，具有抑制Th17產生IL-17和IL-22的功能，在Th17介導的炎癥中發揮作用[9]。因此我們推測IL-37、IL-38可能與早期梅毒的細胞免疫具有相關性。通過檢測IL-37、IL-38在早期梅毒外周血與正常對照外周血中的表達水平，探討其作用。

1　資料與方法

1.1研究對象研究對象均為2013年4月至2014年3月就診于我院性病門診的早期梅毒初診患者。早期梅毒入選標準：病期在2年以內；未經驅梅治療；TRUST和TPPA試驗均陽性，或TP-PCR陽性。對照入選標準：無梅毒相關臨床表現；未經驅梅治療；TRUST和TPPA試驗均陰性；可疑患者如果行TP-PCR檢測，結果為陰性。早期梅毒和對照的排除標準：①HIV抗體檢測陽性；②患有自身免疫性疾病或其他感染性疾病者；③妊娠、哺乳期婦女。

1.2實驗方法

1.2.1主要儀器和試劑IL-37、IL-38 ELLSA 試劑盒(上海嚴謹生物科技有限公司)；酶標分析儀(北京普朗新技術有限公司)；微孔振蕩器；電熱恒溫培養箱；TRUST和TPPA試劑盒等。

1.2.2標本采集抽取患者和對照組靜脈血2 mL，收集于無菌干燥試劑管中，靜置、分離血清后置于-80攝氏度保存備用。

1.2.3TRUST、TPPA、HIV檢測，操作均嚴格按照操作規則進行。

1.2.4IL-37、IL-38水平的檢測采用雙抗體夾心ELLSA方法，嚴格按照說明書步驟進行操作(標準品的稀釋、加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止、測定)。在450 nm波長按順序測量出各標本的吸光度(OD值)。用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度。

1.3統計學方法使用SPSS 19.0統計軟件，計量資料以均數±標準差表示，兩組數據比較采用獨立樣本t檢驗；多組數據比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1臨床資料早期梅毒組入選140例。由于蛋白質降解的原因，部分標本未能檢測到數據。最終納入統計的例數：IL-37組為128例、IL-38組為138例。IL-37病例組：男53例，女75例；年齡16～86歲,平均32.4歲；一期梅毒21例，二期梅毒43例，早期潛伏梅毒(病期在2年以內)64例；有癥狀梅毒組包括一期和二期梅毒，無癥狀梅毒組包括早期潛伏梅毒。IL-38病例組：男59例，女79例；年齡15～86歲,平均32.7歲；一期梅毒23例，二期梅毒46例，早期潛伏梅毒69例。

對照組入選180例。由于蛋白質降解的原因，部分標本未能檢測到數據。最終納入統計的例數：IL-37組為176例、IL-38組為180例。IL-37對照組：男100例、女76例，年齡17～69歲,平均33.2歲；IL-38對照組：男95例，女85例，年齡18～69歲,平均33.7歲。

2.2檢測結果

2.2.1IL-37、IL-38對照組和病例組的檢測結果見表1。用兩組獨立樣本t檢驗進行比較，結果顯示：IL-37對照組和病例組間的差異有統計學意義(P<0.01)，IL-38 對照組和病例組間的差異有統計學意義(P<0.01)(表1)。

2.2.2對IL-37、IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒3組的檢測結果進行方差分析比較，結果顯示：3組IL-37差異無統計學意義(P>0.05)，而3組IL-38差異則具有統計學意義(P<0.01)(表2)。

2.2.3對IL-37、IL-38在有癥狀梅毒組和無癥狀梅毒組的檢測結果進行t檢驗比較，結果顯示：IL-37、IL-38在有癥狀組、無癥狀組間差異均無統計學意義(P>0.05)(表3)。

表1　IL-37和IL-38在梅毒病例組與對照組的檢測結果

表2　IL-37和IL-38在各期梅毒組的檢測結果

表3　IL-37和IL-38在有/無癥狀梅毒組的檢測結果

3　討論

IL-37是IL-1家族新型的抗炎細胞因子，具有抗炎和免疫抑制作用[10，11]。1992年Fitzgerard提出了梅毒發病機制中Th1/Th2反應失衡的學說：梅毒早期以Th1型介導的反應為主，隨著梅毒病程的進展逐漸遷延轉變為Th2型介導的反應，梅毒螺旋體的清除以Th1細胞免疫為主，一旦Th1/Th2失衡，向Th2方向漂移，機體的細胞免疫將會受到抑制，造成梅毒病程的遷延。許多國內外學者通過檢測典型細胞因子在梅毒外周血的表達也進一步證實了Th1/Th2反應失衡的學說[12]。

TNF-α作為典型的Th1型細胞因子，其在早期梅毒外周血中的表達明顯高于正常對照，而IL-37對TNF-α有很強的抑制力，本研究結果表明IL-37在早期梅毒外周血中的表達明顯低于正常對照，降低了對Th1的抑制作用，可能與梅毒早期Th1細胞免疫增強具有相關性。

IL-38也是IL-1家族的成員，是一種抗炎細胞因子，通過抑制炎癥因子從而抑制Th17細胞介導的炎癥反應。IL-17在早期梅毒外周血中的表達明顯高于正常對照，Th17在早期梅毒的細胞免疫中發揮重要作用[13-15]。

我們的研究結果表明IL-38在早期梅毒外周血中的表達明顯低于正常對照，降低了對Th17以及IL-17的抑制作用，可能與早期梅毒Th17表達升高具有相關性。

我們對早期梅毒不同的分期進行了比較。IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒間的表達具有顯著性差異，二期梅毒高于早期潛伏梅毒和一期梅毒。IL-37在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒間無顯著性差異。推測二期梅毒患者血清中IL-38免疫抑制功能比一期梅毒更低，對IL-17表達的抑制進一步減弱。早期梅毒的不同分期之間的免疫反應可能存在差異。

以上兩種細胞因子的試驗均未納入晚期梅毒患者。進一步擴大樣本量或進一步分病期可能會進一步揭示相關細胞因子的作用。梅毒的細胞免疫機制錯綜復雜，這兩種細胞因子具體以什么方式或通路發揮作用有待于進一步研究。

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(收稿：2015-03-11修回：2015-04-08)

Detection of serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis

ZHANGShengjia,LIFurong,LIUDanxuan,WENJing,LIZhen,XIAOHailu,LIZhongwei,ZHENGRongtao,HOUJianling,TIANHongqing.

1.SchoolofMedicalandLifeScience,UniversityofJinan,Jinan250062,China; 2.ShandongProvincialInstituteofDermatologyandVenereology,Jinan250022,China

TIANHongqing,E-mail:tianhq2006@126.com

Objective: To detect the serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis. Methods: The level of IL-37 and IL-38 was detected with ELISA in 140 patients with early syphilis and 180 healthy controls. Results: The medians of IL-37 and IL-38 in patients of early syphilis were 14.15 pg/mL and 12.21 pg/mL, which was lower than those of in healthy controls 31.76 pg/mL and 17.09 pg/mL (均P<0.05). Conclusion: The level of IL-37 and IL-38 is lower in the patients with early syphilis, indicating that IL-37 and IL-38 may be involved in the cellular immunity.

early syphilis; interleukin-37; interleukin-38

山東省科技發展計劃項目(編號：2014GSF118104)

1濟南大學山東省醫學科學院醫學與生命科學學院，濟南，250062

2山東省皮膚病醫院 山東省皮膚病性病防治研究所,濟南,250022

田洪青，E-mail：tianhq2006@126.com