糖尿病腎病患者炎癥水平、免疫功能及與腎臟病變的關系

張體華　王　明

(商丘醫學高等專科學校,商丘476100)

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糖尿病腎病患者炎癥水平、免疫功能及與腎臟病變的關系

張體華王明

(商丘醫學高等專科學校,商丘476100)

目的：探討糖尿病腎病(DN)患者炎癥水平、免疫功能與腎臟病變的關系。方法：將124例DN患者根據24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)隨機分為正常白蛋白尿(NA)組35例，微量白蛋白尿(MA)組45例和臨床白蛋白尿(CP)組44例，另選取35例健康體檢者為對照組，應用放射免疫法測定各組C反應蛋白(CRP)水平，應用酶聯免疫法測定各組白細胞介素(IL)-6、細胞腫瘤壞死因子(TNF)-α及體液免疫(IgG、IgA、IgM)水平，采用流式細胞儀測定機體細胞免疫反應(CD4+Th17、Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg)。采用全自動化生化分析儀測定各種血清血肌酐(Scr)、半胱氨酸蛋白酶抑制物C(CYSC)及UAER。結果：NA組、MA組、CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于對照組(P<0.05)，CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于對照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清IgA、IgM、Th17/Treg、CD4+Th17水平顯著高于對照組(P<0.05)。經Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(P<0.05)，而與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負相關(P<0.05)。結論：DN患者存在微炎狀態及免疫功能紊亂的情況，通過控制或消除促炎因素，改善DN患者免疫功能，對延緩DN患者病情發生發展有重要的意義。

糖尿病腎病；微炎癥狀態；細胞免疫功能；體液免疫；腎臟病變

糖尿病腎病(DN)是2型糖尿病(T2DM)常見并發癥，目前普遍認為炎癥因子與內分泌、免疫系統、氧化應激、脂肪代謝異常等因素相互作用引起的細胞結構異常及胰島素抵抗和微血管病變有關[1，2]。機體炎癥及免疫反應可導致DN發生，并在DN病情進展及預后過程中起到重要的作用[3]。本研究將通過測定DN患者血清炎癥因子水平、細胞免疫、體液免疫及腎功能等相關指標，探討DN患者病變發生的機制及影響因素，旨在為DN臨床防治提供指導。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取商丘市第一人民醫院2014年6月至2015年6月收治的124例Ⅱ～Ⅳ期DN患者為研究對象，納入標準：(1)均符合美國糖尿病協會及我國糖尿病協會2009年制定的DN診斷標準；(2)24 h尿蛋白定量>0.3 g,且<1.0 g；(3)均簽署知情同意書；(4)所有病例均經本院醫學倫理委員會審批。排除標準：惡性腫瘤、自身免疫系統性疾病、外傷性感染、心血管疾病、肝腎功能不全的患者。男性68例，女性56例，年齡35～78歲，平均年齡(42.8±3.4)歲，病程1個月～3年，平均病程(1.85±0.79)年。合并視網膜病變14例，合并高血壓15例，合并神經病變2例。根據24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)隨機分為正常白蛋白尿(NA)組35例，微量白蛋白尿(MA)組45例和臨床白蛋白尿(CP)組44例。另選取35例健康體檢者為對照組，患者入組時均經相關檢查排除腎臟不全者，其余排除標準與DN組相同，其中男性18例，女性17例，年齡28～78歲，平均年齡(40.8±3.2)歲，兩組患者性別、年齡無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法空腹抽取兩組患者靜脈血液3 ml，經離心處理后留取上清液，并將上清液置于-20℃冰箱中保存待測。應用放射免疫法測定各組CRP水平，CRP試劑盒由鄭州安賽生物科技有限公司提供；應用酶聯免疫法測定各組IL-6、TNF-α及IgG、IgA、IgM水平，IL-6試劑盒由上海紀寧生物科研有限公司提供；TNF-α試劑盒由北京賽馳生物科技有限公司提供；IgG、IgA、IgM試劑盒由上海逸峰生物科技有限公司提供；采用流式細胞儀測定外周血CD4+Th17、Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg比率。采用全自動化生化分析儀測定各組血清Scr、CYSC及UAER。

2　結果

2.1各組血清炎癥因子及腎功能指標對比NA組、MA組、CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于對照組(P<0.05)，CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于NA組、MA組(P<0.05)，見表1。

2.2各組細胞免疫與體液免疫相關指標對比NA組、MA組、CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于對照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清IgA、IgM、Th17/Treg、CD4+Th17水平顯著高于對照組(P<0.05)，見表2。

2.3炎癥因子與體液免疫、細胞免疫及腎臟指標的關系經Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(P<0.05)，而與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負相關(P<0.05)，見表3。

GroupsCasesCRP(mg/ml)IL-6(ng/ml)TNF-α(ng/ml)Scr(μmol/L)CYSC(μg/ml)UAER(mg/min)Controlgroup350.75±0.1818.25±4.024.25±0.850.98±0.220.52±0.126.22±0.58NAgroup354.58±0.221)24.69±4.851)6.85±1.231)1.85±0.241)1.28±0.291)11.25±3.481)MAgroup457.28±2.151)2)34.25±5.021)2)8.22±1.021)2)2.22±0.321)2)2.59±0.421)2)52.36±3.781)2)CPgroup4410.48±2.431)2)3)39.32±4.781)2)3)12.98±2.851)2)3)2.89±0.401)2)3)3.89±1.221)2)3)112.89±22.851)2)3)Fvalue8.2369.1217.9868.0227.6329.456Pvalue0.0000.0000.0000.0000.0000.000

Note：Compared with control group,1)P<0.05；compared with NA group，2)P<0.05；compared with MA group，3)P<0.05.

GroupsCasesCD4+Th17(%)Th17/Treg(%)CD4+CD25+Treg(%)IgG(g/L)IgA(g/L)IgM(g/L)Controlgroup3532.98±3.5818.25±4.5615.32±2.2515.20±2.851.45±0.241.42±0.35NAgroup3535.15±4.981)22.36±5.021)13.52±3.281)13.22±2.621)1.98±0.321)1.78±0.421)MAgroup4539.96±5.481)2)26.98±6.321)2)11.25±2.961)2)11.22±2.181)2)2.58±0.321)2)2.29±0.371)2)CPgroup4442.65±4.261)2)3)38.59±7.261)2)3)8.26±2.021)2)3)9.05±1.961)2)3)2.92±0.361)2)3)2.98±0.451)2)3)Fvalue8.4569.86210.4259.78510.4239.523Pvalue0.0000.0000.0000.0000.0000.000

Note：Compared with control group,1)P<0.05；compared with NA group，2)P<0.05；compared with MA group，3)P<0.05.

表3炎癥因子與體液免疫、細胞免疫及腎臟指標的關系

Tab.3Relationship between inflammatory factor and humoral immunity,cellular immunity and kidney index

RelationshipScrCYSCUAERCD4+Th17Th17/TregCD4+CD25+TregIgGIgAIgMCRP0.3261)0.3181)0.3691)0.119-0.3421)-0.3221)-0.3451)0.1220.138IL-60.3181)0.3051)0.3521)0.114-0.3521)-0.3171)-0.3321)0.1140.118TNF-α0.3321)0.3461)0.3291)0.123-0.3361)-0.3091)-0.3271)0.1280.126

Note：1)P<0.05.

3　討論

DN的發病機制尚不明確，但近年相關研究認為炎癥因子在DN大血管病變中起到重要的作用[4]。Kentaro等[5]認為炎癥因子水平紊亂是血管動脈粥樣硬化的前期，是引起血管內皮細胞功能損傷的重要誘因。高血脂、高血糖均會增加血管內皮細胞通透性，引起血管內皮功能損傷，使得相關炎癥因子(如CRP、IL-6、TNF-α)水平紊亂，從而加劇血管內皮功能損傷，導致腎小管濾過功能受損[6]。CRP是機體非特異性炎癥標記物，可作為血管損傷程度的標記物，其在T2MD血管病變中的作用已獲得肯定[7]。IL-6由巨噬細胞產生，它可趨化及激活中性粒細胞、噬堿性粒細胞、T細胞至炎癥反應部位，并誘導細胞產生層黏連蛋白、膠原蛋白Ⅲ、Ⅳ，從而加重血管內皮損傷[8]。高水平TNF-α可刺激血管內皮細胞，并誘導趨化蛋白、黏附因子生成，增加血管內皮細胞通透性及刺激血管平滑肌細胞增生，引起血管動脈粥樣硬化，從而導致血管病變[9]。本研究結果顯示，與正常對照組相比，DN患者血清炎癥因子水平顯著升高，且隨著UAER水平的升高，DN患者血清炎癥因子水平顯著升高，經Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(P<0.05)。這表明炎癥細胞因子水平異常升高與機體腎功能損傷有密切的關系，炎癥因子表達水平升高有可能促進DN腎功能進行性衰竭。吳瓊皎等[10]認為趨化因子、黏附分子、各種類型細胞因子水平升高，可促進血管內皮細胞、中性粒細胞及單核細胞黏附，并會誘導單核細胞趨化及釋放各種細胞因子，從而加重腎臟損傷及炎癥反應。

目前已有研究表明，DN屬于自身免疫性疾病，由自身抗體及自身免疫應答性T淋巴細胞介導對自身抗原發生免疫應答引起，其發生及進展過程屬于免疫系統自身調節異常的過程[11]。DN患者中CD4+T細胞分化功能性減弱導致T細胞免疫功能、細胞因子分泌水平異常，從而導致DN患者免疫功能障礙。Andy等[12]認為自身應答性T淋巴細胞可介導機體抗原免疫應答反應，并參與機體免疫系統調節平衡過程。糖尿病患者由于體內自身應答性T淋巴細胞活性下降，會導致細胞因子及其受體分泌水平異常，從而導致免疫功能障礙。本研究結果顯示，DN患者血清中CD4+CD25+Treg水平顯著低于對照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。這提示T淋巴細胞調節失衡是引起DN發生及病情進展的重要因素。本研究中DN患者血清IgG水平低于對照組，而IgA、IgM水平高于對照組， 經Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負相關(P<0.05)，進一步表明機體中存在非活動性炎癥反應。

綜上所述，炎癥因子及機體免疫反應與DN的發生及進展有密切的關系，當微炎癥發生后，DN患者腎功能衰竭也可能進一步加重。通過控制或消除促炎因素，對改善DN患者免疫功能及延緩DN患者病情發生進展有重要的意義。

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[收稿2015-09-25修回2015-10-10]

(編輯倪鵬)

Relationship of micro-inflammation,cellular and humoral immune function and kidney disease of patients with diabetic nephropathy

ZHANG Ti-Hua,WANG Ming.

Department of Preventive Medicine,Shangqiu Medical College,Shangqiu 476100,China

Objective:To investigate the relationship of micro-inflammation,cellular and humoral immune function and kidney disease of patients with diabetic nephropathy.Methods: 124 cases of DN were randomly divided into normal albuminuria group (NA,n=35),microalbuminuria group (MA,n=45) and clinical albuminuria groups(CP,n=44) based on 24 h urinary albumin excretion rate (UAER) and the healthy subjects were selected as the control group(n=35).The levels of C-reactive protein (CRP) were measured with radioimmunoassay,the levels of interleukin-6(IL-6),tumor necrosis factor-α(TNF-α) and humoral immunity(IgG enzyme-linked immunosorbent assay,IgA,IgM) were measured with ELISA.The levels of immune response (CD4+Th17,Th17/Treg,CD4+CD25+Treg) were measured with flow cytometry cellular.The levels of creatinine (Scr),cystatin C (CYSC) and UAER of each groups were analyzed with fully automated biochemistry.Results: The levels of CRP,IL-6,TNF-α,Scr,CYSC,UAER of NA group,MA group,CP groups were higher than control groups(P<0.05),the levels of CRP,IL-6,TNF-α,Scr,CYSC,UAER of CP groups were higher than NA,MA group (P<0.05).The levels of CD4+CD25+Treg,IgG were lower than the control group (P<0.05),while the levels of CD4+CD25+Treg,IgG of CP groups were higher than NA group,MA group (P<0.05).The levels of IgA,IgM,Th17/Treg，CD4+Th17 of NA group,MA group,CP groups were higher than control groups(P<0.05).The levels of CRP,IL-6,TNF-α were positively correlated with Scr,CYSC,UAER(P<0.05) and were negatively correlated with Th17/Treg,CD4+CD25+Treg,IgG (P<0.05).Conclusion: DN patients with micro inflammatory status and immune function disorder,through the control or elimination of pro-inflammatory factors,improve the immune function of DN patients to delay the occurrence and progress of DN patients has important significance.

Diabetes nephropathy;Micro-inflammatory state;Cellular immunity;Humoral immunity;Kidney disease

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.024

張體華(1971年-)，女，碩士，副教授，主要從事預防醫學教學和科研工作。

R392.6

A

1000-484X(2016)10-1524-04