尿血紅蛋白對芐索氯銨法定量測定尿蛋白的干擾評價

孫寧娜，李洪春

(徐州醫學院附屬醫院檢驗科，江蘇徐州 221002)

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·論 著·

尿血紅蛋白對芐索氯銨法定量測定尿蛋白的干擾評價

孫寧娜，李洪春△

(徐州醫學院附屬醫院檢驗科，江蘇徐州 221002)

目的 評價尿血紅蛋白對芐索氯銨法定量測定尿蛋白的影響。方法 參照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)的EP7-A2方案，配制不同濃度血紅蛋白的尿液標本做劑量-效應試驗，同時收集50例不同隱血程度的尿液標本做臨床標本的偏倚試驗；尿蛋白定量在DPP羅氏生化工作站采用芐索氯銨法檢測，與磺基水楊酸法進行比較。結果 劑量-效應試驗顯示，當尿血紅蛋白濃度達0.2 g/L時即對芐索氯銨法測定尿蛋白產生顯著性干擾(P<0.05)；臨床標本的偏倚試驗顯示，不同程度的隱血對芐索氯銨法測定尿蛋白產生明顯的正干擾。結論 重視尿隱血陽性和/或含有紅細胞的尿液標本，在采用芐索氯銨法測定尿蛋白時應評價其準確性，必要時使用磺基水楊酸法進行確認。

血紅蛋白； 芐索氯銨法； 尿蛋白定量； 干擾

尿蛋白含量是評價腎小球濾過和腎小管重吸收功能的重要指標。尿蛋白的測定經歷了Esbach法、Hoffman稱重法、比色法、濁度法、染料結合法、免疫法等，但每種方法均有一定優缺點，存在靈敏度高低不同，對清蛋白、球蛋白反應不一致等問題，尤其“干擾”是影響尿蛋白測定結果準確性的主要因素，如尿液的pH值、混濁度、細胞、藥物等[1-3]。本研究參照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)《臨床生化干擾測試-批準指南(第2版)》(EP7-A2)方案評價尿血紅蛋白對芐索氯銨法定量測定尿蛋白的干擾性。

1 材料與方法

1.1 一般材料 (1)劑量-效應試驗標本：根據試驗設計收集臨床尿液標本3份(各10 mL)，要求蛋白定性(愛科來干化學)為標本1(-)、標本2(±)、標本3(+)，隱血試驗(愛科來干化學)均為陰性，鏡檢無紅細胞，外觀清、淡黃色，pH約6.0。(2)偏倚試驗的臨床標本：根據試驗要求選取臨床尿液標本共50份，外觀清、淡黃色，pH約6.0，分別為隱血(-)、蛋白(-、±、+、++、+++)；隱血(±)、蛋白(-、±、+、++、+++)；隱血(+)、蛋白(-、±、+、++、+++)；隱血(++)、蛋白(-、±、+、++、+++)；隱血(+++)、蛋白(-、±、+、++、+++)各2份，檢測前1 500 r/min離心3 min。

1.2 儀器與試劑 (1)DPP羅氏生化工作站(德國)，Sysmex XE-2100D全自動血液分析儀(日本)；722分光光度計(上海分析儀器廠，本年度通過徐州市計量局檢定)。(2)芐索氯銨法試劑盒購置于羅氏診斷產品(上海)有限公司；磺基水楊酸購自(上海)研域生物科技有限公司，1 mg/mL人血清蛋白標準液購自(上海)廣銳生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血紅蛋白液制備 挑選臨床血常規標本1份，采用生理鹽水充分洗滌5次，棄上清液，使用去離子水破壞紅細胞并調整血紅蛋白(血細胞分析測定)濃度至40 g/L。

1.3.2 配制不同濃度血紅蛋白 配制含不同濃度0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L的尿液標本。

1.3.3 尿蛋白濃度測定 按標準操作程序在DPP生化分析儀上使用芐索氯銨法測定尿蛋白，為平衡漂移，按順反順序測定3次，取均值。采用試劑盒內配帶的定標液定標，檢測時所使用儀器均在控。磺基水楊酸法測定尿蛋白濃度，參照張耀廷等[4]的方法，為平衡誤差，每份標本測3次取均值。

2 結 果

2.1 劑量-效應試驗 當血紅蛋白濃度達0.2 g/L時，即對芐索氯銨法尿蛋白檢測結果產生明顯干擾,與未加血紅蛋白的尿蛋白結果比較，差異有統計學意義(P<0.05)。且隨著尿血紅蛋白濃度的增加，尿蛋白測定值呈不同程度的假性增高，與血紅蛋白濃度呈“劑量依賴”趨勢。尿液中不同濃度的血紅蛋白對磺基水楊酸法測定尿蛋白未產生明顯干擾，與未加血紅蛋白的尿蛋白結果比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1、2。

表1 不同濃度血紅蛋白對芐索氯銨法尿蛋白測定的干擾±s,mg/L)

注：與未加血紅蛋白比較，*P<0.05。

表2 不同濃度血紅蛋白對磺基水楊酸法尿蛋白測定的干擾±s,mg/L)

2.2 臨床標本的偏倚試驗 臨床不同隱血程度的尿液標本對芐索氯銨法尿蛋白定量檢測，具有明顯的正干擾。見圖1。

圖1 芐索氯銨法與磺基水楊酸法測定不同程度隱血的尿蛋白

3 討 論

正常尿液中蛋白含量甚微，經腎小球正常濾過的相對小分子質量蛋白質在腎小管幾乎全部被重吸收，當炎性、毒素等原因導致腎小球的濾過膜發生改變或腎小管的重吸收能力障礙時，排出體外的尿液有含量不等、相對分子質量不同的蛋白質，可以用于判斷腎病發生與否，并可反映腎臟受損程度。有關隨機尿蛋白的檢測，臨床實驗室常用定性分析，由于尿液中蛋白質在24 h不同時間段排泄率不同，且與運動、情緒、體位等也有一定關系，所以需要做24 h尿蛋白總量測定，其準確測量的結果有助于臨床對腎臟疾病的診斷及療效觀察[5]。芐索氯銨法檢測尿液蛋白質的原理是將芐索氯銨作為蛋白質變性劑，使尿液中蛋白質變性沉淀，在404 nm比濁，從而測定蛋白含量，對清蛋白及球蛋白的靈敏度無差異，分析線性達2.0 g/L是臨床實驗室用于測定尿蛋白的成熟方法，在干化學法測定腦脊液的蛋白定量中應用更為廣泛。也是DPP羅氏生化工作站的配套方法，磺基水楊酸法既可用于尿蛋白定性，也可用于定量，并被推薦為檢查尿蛋白的確證試驗，但僅限手工操作，不利于自動化，故臨床很少采用[6]。

當腎臟功能障礙或因其他原因導致泌尿系統受損時，除含量不等的尿蛋白隨尿液排出體外，尿液內也會伴隨或多或少紅細胞出現，鏡檢紅細胞顯示數個、數十個，甚至數百個，潛血試驗呈陰性或不同程度的陽性。尿紅細胞或尿血紅蛋白對尿蛋白測定的干擾已早有報道，但大多數是評價尿蛋白的定性檢測[7-8]。由于尿蛋白定量分析屬于臨床化學檢測項目，在進行尿蛋白定量測定時即使通過離心可排除紅細胞干擾，但常會忽略尿液中血紅蛋白的存在。芐索氯銨法測定尿蛋白的試劑說明書中明確指出，尿隱血陽性對該法有干擾，但無詳細注明尿液血紅蛋白多少含量會造成多大程度的干擾。本研究參照CLSI的EP7-A2文件，配制不同血紅蛋白濃度的尿液標本，結果表明，血紅蛋白達0.2 g/L時(尿液外觀無明顯改變，潛血試驗“+”)即對芐索氯銨法測定尿蛋白造成明顯的正干擾，且隨血紅蛋白濃度的增加呈明顯的正相關性。

尿蛋白定量檢測是臨床評價腎功能的重要指標之一，準確的測定結果有助于臨床對腎臟疾病的輔助診斷、療效觀察及預后判斷。當尿液合并有紅細胞或隱血試驗呈陽性時，一定要重視其對尿蛋白分析結果的干擾，尤其是尿蛋白定量測定。

[1]張會芬.改良的磺基水楊酸-硫酸鈉比濁法測定腦脊液蛋白的實驗室評價[J].檢驗醫學,2011,26(5):343-345.

[2]苗靜,王學晶,徐國賓.鄰苯三酚紅鉬絡合法與雙縮脲比色法測定嘌呤霉素腎病大鼠尿中總蛋白濃度的比較[J].實用醫學雜志,2009,25(4):553-555.

[3]周華勝,李土珍.兩種不同方法檢測尿蛋白的比較分析[J].河北醫學,2010,16(10):1276-1278.

[4]張耀廷，郭巖，辛暨華，等.應用磺基水楊酸法測定蛋白定量[J].中國生物制品學雜志，2001,14(4):247-248.

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[7]蔣翠霞，師勇，余秀瑾,等.尿干試紙條檢測與尿鏡檢結果比較分析[J].中國現代藥物應用,2009,3(23):88-89.

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Evaluation of the interference of hemoglobin to the determination of protein in urine by benzethonium chloride

SUNNingna,LIHongchun△

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege，Xuzhou,Jiangsu221002,China)

Objective To evaluate the interference of occult blood in urine (urinary hemoglobin) and to determine the protein in urine by benzethonium chloride.Methods By reference to EP7-A2 of CLSI,urine containing different concentrations of hemoglobin were preparated to produce the "dose-effect curve",while 50 cases of clinical urine with varying degrees of occult blood were collected for "clinical sample bias test".Urinary protein was quantified by benzyl chloride in DPP roche comparing with sulfosalicylic acid method.Results When the urinary hemoglobin was 0.2 g/L or higher,the determined result of urinary protein of urinary protein would be significantly interfered by benzethonium chloride method.The "clinical sample bias test"showed that clinical urine with different degrees of occult blood caused positive interference to the determination of protein by benzethonium chloride.Conclusion Urine samples with occult blood and /or containing red blood cells should be emphasized and evaluate the accuracy when the urinary protein is quantified by benzyl chloride.If necessary,it should be confirmed by sulfosalicylic acid.

hemoglobin; benzethonium chloride method; urinary protein; interference

孫寧娜，女，技師，主要從事臨床生物化學與檢驗研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.013

A

1673-4130(2016)20-2836-02

2016-03-16

2016-06-16)