感染T細胞斑點試驗在耐多藥肺結核診斷中的應用價值

胡鈺卿　潘愛珍　王靜　朱敏

[摘要] 目的 分析探討感染T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）在耐多藥肺結核診斷中的應用價值。 方法 選擇2014年1月～2016年1月我院收治的耐多藥肺結核患者71例，另選擇35例同期健康體檢者作為對照組，比較各種檢測方法診斷的陽性率，并采用敏感性、特異性、準確度作為診斷試驗的評價指標。 結果 T-SPOT.TB檢測診斷耐多藥肺結核陽性率最高，達95.8%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（P<0.05）。抗酸桿菌涂片、結核菌培養、T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的敏感性較高，達90%以上。T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的特異性最高，達91.9%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（P<0.05）。T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的準確度最高，達96.2%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（P<0.05）。 結論 與其他檢查方法相比，感染T細胞斑點試驗對診斷耐多藥肺結核具有特異性高、準確度高的優點，值得廣泛推廣和應用。

[關鍵詞] 耐多藥肺結核；感染T細胞斑點試驗； 敏感性；特異性

[中圖分類號] R521 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）25-0070-04

Application value of T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis

HU Yuqing1 PAN Aizhen2 WANG Jing1 ZHU Min1

1.Tuberculosis Laboratory， Hangzhou Red Cross Hospital， Hangzhou 310003， China； 2.Tuberculosis Laboratory， Center for Tuberculosis Prevention and Control， Zhejiang Center for Disease Control， Hangzhou 310051， China

[Abstract] Objective To analyze the application value of T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis. Methods A total of 71 patients with multi-drug resistant tuberculosis who were admitted to our hospital from January 2014 to January 2016 were selected. Another 35 healthy subjects were selected as the control group. The diagnosis positive rate of each test method was compared， and sensitivity， specificity and accuracy were applied as the evaluation indicators of the diagnostic test. Results The positive rate of T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis was the highest， reaching up to 95.8%， significantly higher than that of other test methods， and the differences were statistically significant（P<0.05）. The sensitivity of acid-fast bacillus test， tuberculous bacillus culture and T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis was higher， reaching over 90%. The specificity of T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis was the highest， reaching up to 91.9%， significantly higher than that of other test methods， and the differences were statistically significant（P<0.05）. The accuracy of T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis was the highest， reaching up to 96.2%， significantly higher than that of other test methods， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion Compared with other test methods， T-SPOT.TB test in the diagnosis of multi-drug resistant tuberculosis has advantages of high specificity and high accuracy， which is worthy of wide promotion and application.

[Key words] Multi-drug resistant tuberculosis； T-SPOT.TB test； Sensitivity； Specificity

結核病是一種慢性傳染病，是由結核分枝桿菌感染引起的疾病，其中最為常見的是肺部結核。近年來全球結核病疫情呈回升狀態，耐藥結核菌發生率不斷增加[1，2]。其中，耐多藥肺結核指結核菌至少同時對利福平、異煙肼兩種抗結核藥物耐藥，發病率較高，約占全世界25.0%，還存在持續向外播散耐多藥結核菌情況。耐多藥肺結核治療難度大，治療周期長，治愈率低，因此，尋找特異的檢測方法，快速且準確診斷是結核病控制的關鍵問題，且對于監測結核病的發展、轉歸及臨床治療具有重要意義。結核菌素試驗（purified protein derivative tuberculin，PPD）為診斷結核病的主要方法，但假陽性率較高。結核感染T細胞斑點試驗（TB infection of T cells spot test，T-SPOT.TB）為一種新型的診斷方法，敏感性和特異性水平較高。本研究選取耐多藥肺結核病例行T-SPOT.TB試驗，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月～2016年1月我院收治的耐多藥肺結核患者71例，入選研究對象均知情同意，均排除合并嚴重心、腦、肝、腎、消化系統等疾病者。其中男38例，女33例；年齡22～67歲，平均（41.2±6.2）歲；病史0.5～3年，平均（14.1±3.2）個月。疾病類型：原發性肺結核15例，繼發性肺結核40例，血型播散型肺結核16例。另選擇35例同期健康體檢者作為對照組，其中男18例，女17例；年齡20～58歲，平均（42.3±5.4）歲。兩組的性別、年齡等比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

1.2.1 T-SPOT.TB試驗 取枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血5 mL，分離外周血單核細胞（PBMC）放在包被IFN-7抗體的微孔板，加入結核分枝桿菌特異性抗原早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培養基濾過蛋白（CFP-10）作為抗原，37℃溫箱培養24 h后，洗去抗原致敏效應T淋巴細胞，加入生物素標記的二抗，再經酶聯顯色，在細胞因子分泌的地方形成斑點，通過記錄斑點數檢測結核分枝桿菌特異抗原致敏的效應T淋巴細胞數量。

1.2.2 結果判斷 當空白對照孔內斑點數<6時，任一實驗孔斑點數減去空白孔斑點數≥6，結果即為陽性；若空白對照孔斑點數>6，任一實驗孔斑點數大于空白孔斑點數的2倍，結果也表示陽性[3]。

1.2.3 其他檢查方法 （1）PPD試驗：采用Mantoux法，取PPD 0.1 mL（含5單位結核菌素）行前臂尺側皮內試驗，48～72 h后觀察結果。硬結直徑≥10 mm為TST陽性結果[4]。（2）血清結核抗體檢測：采用酶標儀讀取光密度值（OD值），并在標準滴度曲線表中查找出相應標本中抗結核抗體滴度，陽性為>400 U/mL[5]。試劑盒為南京大淵代理的蛋白芯片試劑盒，嚴格按照說明書進行操作。（3）結核PCR：結核DNA檢測。（4）抗酸桿菌涂片。（5）結核分枝桿菌培養。

1.3 評價指標

采用敏感性、特異性、準確度作為診斷試驗的評價指標。①敏感性=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；②特異性=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；③準確度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）×100%。

1.4 統計學處理

采用SPSS20.0統計學軟件進行處理和分析，其中計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 T-SPOT.TB檢測與其他各項檢測方法診斷耐多藥肺結核陽性率比較

PPD、結核PCR、結核菌培養、T-SPOT.TB檢測方法用于耐多藥肺結核檢測的陽性率顯著高于對照組，組間比較，差異具有統計學意義（P<0.05）。T-SPOT.TB檢測診斷耐多藥肺結核陽性率最高，達95.8%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 T-SPOT.TB檢測與其他各項檢測方法診斷耐多藥肺結核的敏感性、特異性、準確度比較

抗酸桿菌涂片、結核菌培養、T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的敏感性較高，達90%以上。T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的特異性最高，達91.9%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（χ2=12.532、15.832、18.235、17.643、13.643，P<0.05）。T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的準確度最高，達96.2%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有統計學意義（χ2=10.542、16.127、13.633、15.211、12.452，P<0.05）。

3討論

結核病是全球嚴重的公共衛生問題之一，據WHO估計，全球約有20億人感染結核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結核。我國是結核病高發國家之一，2000年全國結核病流行病學調查顯示，全國受結核菌感染人數約5.5億，其中傳染性肺結核病患者150萬人，每年因結核病死亡的人數達13萬人。近年來結核病的發病率有上升趨勢，且耐藥趨勢較嚴重。因此，如何及早發現疾病并快速精準地進行診斷成為臨床研究的重點[6-11]。

結核菌素試驗（TST）是目前臨床常用于結核篩查的常用方法之一，但假陽性率高，且易受患者身體狀況影響結果。因此尋求一種快捷、敏感、特異性強的結核診斷方法十分重要。體外核酸擴增技術即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）自1989年法國學者Brissonneol等首先報道用于診斷結核病，為結核病的快速診斷開辟了新途徑，但由于其假陽性率較高影響了結果的可靠性[12-18]。

結核抗體檢測試驗敏感性較差，對潛伏性肺結核的篩查意義不大，價格昂貴。結核感染T細胞斑點試驗技術通過計算斑點的數量推測出患者體內結核桿菌產生反應的效應T細胞是否存在。T.SPOT實驗結合酶聯免疫斑點技術（即ELISPOT技術）與γ-干擾素釋放試驗，通過檢測受結核分枝桿菌抗原刺激而活化的效應T細胞來診斷結核感染。結核感染后體內長期存在抗原特異性T細胞，當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放γ-干擾素。實驗中利用ESAT-6和CFP-10兩種結核特異性抗原刺激外周血中結核特異性T淋巴細胞分泌γ-干擾素，并通過ELISPOT方法檢測γ-干擾素的釋放水平，從而判斷機體是否感染結核桿菌，對活動性結核分枝桿菌感染具有較高的敏感性。且結核感染T細胞斑點試驗的檢測價格便宜、簡單易行[19-26]。將結核感染T細胞斑點試驗與PPD試驗相比，結核感染T細胞斑點試驗屬于體外試驗，PPD試驗屬于體內試驗；PPD試驗的結果受多重因素制約，其臨床應用受到一定的局限性，在肺結核感染的高發地帶為患者進行PPD 試驗的假陽性呈不斷增多趨勢。本研究選擇71例耐多藥肺結核患者作為研究對象，另選擇35例同期健康體檢者作為對照組，比較各種檢測方法診斷的陽性率，并采用敏感性、特異性、準確度作為診斷試驗的評價指標。結果證實，T-SPOT.TB檢測診斷耐多藥肺結核陽性率最高，達95.8%，T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的特異性最高，達91.9%，T-SPOT.TB檢測用于診斷耐多藥肺結核的準確度最高，達96.2%，顯著高于其他各項檢測方法，差異具有顯著性（P<0.05），與張玉平等[24]報道的觀點是相符的，證實與其他檢查方法相比，感染T細胞斑點試驗對診斷耐多藥肺結核具有特異性高、準確度高的優點，值得廣泛推廣和應用。

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（收稿日期：2016-04-29）