p57/Kip2在食管鱗癌腦轉移瘤中的表達及意義

茹 藝 陳曉杰 張鵬飛 高社干 高 強 王玉峰 劉麗娜 馮笑山*

1)河南科技大學第一附屬醫院 洛陽 471000 2)南陽市第二人民醫院腫瘤科 南陽 473000

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p57/Kip2在食管鱗癌腦轉移瘤中的表達及意義

茹 藝1)陳曉杰1)張鵬飛1)高社干1)高 強1)王玉峰1)劉麗娜2)馮笑山1)*

1)河南科技大學第一附屬醫院 洛陽 471000 2)南陽市第二人民醫院腫瘤科 南陽 473000

目的 探討p57/Kip2在食管鱗癌腦轉移瘤組織中的表達，探討其在食管鱗癌腦轉移中的作用。方法 選擇食管鱗癌腦轉移瘤組織，采用免疫組化檢測p57/Kip2的表達水平。結果 免疫組化方法結果顯示，食管鱗癌腦轉移癌旁組織中 p57/Kip2的表達水平顯著高于癌組織，且與腫瘤病理分化程度相關(P<0.05)，p57/Kip2在中-高分化病例中的陽性表達率為57.1%，在中-低分化病例中陽性表達率為18.2%，差異有統計學意義(P=0.000)。結論 p57/Kip2食管鱗癌腦轉移癌組織中表達顯著下調，且與病理分化程度相關，即表達下調明顯病理分化程度越差。

食管鱗癌；p57/Kip2；病理分化；腦轉移

p57/Kip2基因具有抑制細胞增殖和分化作用，誘導細胞凋亡，并與基因組印記有關[3]。本研究通過檢測p57/Kip2在賁門癌及其配對的癌旁組織中的表達以及與臨床病理資料之間的關系，探討p57/Kip2在賁門癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1．1 研究對象 選擇2006-01—2016-02河南科技大學第一附屬醫院及南陽市第二人民醫院神經外科經手術切除的15例食管鱗癌腦轉移瘤手術標本，診斷均有病理檢查支持。男10例，女5例；年齡60～72歲。所有患者術前均未經放療治療。病理診斷及分級參照WHO消化道系統腫瘤分類標準(2007年版)：15例病例中低-分化7例，中分化5例，中-高分化3例。另選取15例同期住院的經手術切除的正常腦組織的患者(正常腦組織組)，男10例，女5例，年齡23～47歲。標本切除離體后，病理科常規石蠟包埋切片。

1．2 方法

1．2.1 HE染色：二甲苯侵泡15 min(2次)，無水乙醇侵泡5 min(2次)，95%乙醇侵泡 5 min(2次)，80%乙醇侵泡 5 min，水洗，蘇木精染色 5 min，流水沖洗，1%鹽酸分化1 s，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇侵泡5 min，95%乙醇侵泡5 min(2次)，無水乙醇侵泡 5 min，95%乙醇侵泡5 min，二甲苯侵泡5 min(2次)，中性樹膠封片。

1．2.2 免疫組織化學染色：所有組織切片均進行常規免疫組織化學染色，主要步驟如下：脫蠟，水化，抗原修復，封閉，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育并且4℃過夜，TBS漂洗10分鐘，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB顯色，蒸餾水漂洗，1%鹽酸酒精分化，蘇木素復染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。

1．2.3 判定免疫組化的結果：在光學顯微鏡下對組織切片進行觀察，閱片采取2位病理科醫師雙盲閱片方法，每張切片取6個高倍視野 (×400)，對視野內陽性細胞計數。陽性表達細胞的判斷標準：①完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽性范圍：0分：<5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分>75%；二者相加分數為判定結果：陰性(-)：<2分，弱陽性(+)：2～3分，中度陽性(++)：4～5分，強陽性(+++)：6～7分。

1．3 統計學處理 所有數據采用SPSS 18．0軟件進行處理，采用Wilcoxon符號秩檢驗比較配對設計的等級資料。

2 結果

2．1 p57/Kip2表達的檢測結果 細胞染色定位于細胞核，胞核呈棕黃色為表達陽性，。轉移癌組織中p57/Kip2總陽性表達率和強陽性表達率分別為26.7%(4/15)、0；癌旁組織為 73.3%(11/15)、26.7%(4/15)。正常組織為 100%(15/15)、53.3%(8/15)。根據Wilcoxon秩檢驗結果看出腫瘤、癌旁組織及正常組織中p57/Kip2的表達差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2．2 p57/Kip2與臨床病理分化具有相關性 為檢測腫瘤組織中p57/Kip2的表達水平與臨床病理分化程度是否具有相關性，我們采用COX回歸分析p57/Kip2的表達水平與臨床病理分化程度之間的關系。結果提示腫瘤組織中p57/Kip2 的表達水平與臨床病理分化程度具有相關性(P<0.01)，即病理分化程度越高p57/Kip2表達水平越高。見表2、表3。

表1 各組p57/Kip2表達情況比較 [n(%)]

注：與瘤旁組比較，*P<0.05；與正常組比較，#P<0.05

表2 賁門癌臨床特征分布

表3 臨床病理分化程度與p57/Kip2蛋白表達情況比較 (n)

注：與中-高分化組比較，#P<0.05

3 討論

不同腫瘤出現腦轉移的幾率不同，惡性腫瘤出現腦轉移為 15%～40%，食管癌腦轉移僅為1.4%～1.7%[1]，比較少見。 我院 9 a間共收治食管癌腦轉移患者 15 例，占同期食管癌患者的 2.11%。國內外對于食管癌腦轉移尚無大宗臨床報道。食管癌腦轉移多出現在食管癌診斷后1 a以內。診斷主要依據病史、癥狀、體征以及影像學檢查，臨床癥狀多見頭暈、頭痛、惡心、嘔吐及步態不穩等。 影像學檢查可顯示單發或多發的顱內占位性病變，且多伴明顯的瘤周水腫，增強造影可出現病灶被強化。活檢為最終診斷手段。我國食管癌腦轉移多見于食管鱗癌患者，與我國食管鱗癌高發一致。食管癌腦轉移患者男性居多，且發病年齡較大，中位年齡60歲。 Wadhwa R等[2]報道食管癌腦轉移患者，臨床分期較差。

p57/Kip2是Matsuoka等于1995年發現、定位于人染色體11p15.5、作用于細胞周期的基因[3]。

CDKN1C(p57KIP2)抑制細胞周期依賴激酶(CDK)的活性，是Cip/Kip家族成員之一，多項研究證明在絕大多數腫瘤細胞中該蛋白的表達水平明顯下降。許多腫瘤組織中存在p57/Kip2基因變異率低而蛋白表達下降或失活率高的現象，與p57/Kip2蛋白表達水平除了取決于基因外還要受轉錄、翻譯、翻譯后修飾等多個環節的影響有關[4]。p57KIP2的氨基末端區域與其他的Cip/Kip家族成員具有同源性，該區域能夠結合cyclin-CDK復合體從而控制細胞周期的進程。然而人類的p57KIP2該區域富含脯氨酸序列(PAPA)，這在其他Cip/Kip家族成員中未發現，本研究提示與其他家族成員相比p57KIP2可能具有特殊功能。p57KIP2參與多個細胞生命活動，包括對細胞周期的調控、細胞分化、凋亡以及腫瘤的發生、發展。因此根據基因的染色體位置、生物功能和作為遺傳印跡的地位，p57KIP2已經被公認為抑癌基因。此外，因在許多晚期腫瘤中p57KIP2表達缺失，p57KIP2在臨床上有潛在的預測預后和臨床治療腫瘤的價值。本研究通過檢測p57/Kip2在賁門癌及其配對的癌旁組織中的表達以及與臨床病理資料之間的關系，探討p57/Kip2在賁門癌發生、發展中的作用。結果提示，腫瘤組織中p57/Kip2的表達水平與臨床病理分化程度有相關性，即病理分化程度越高p57/Kip2表達水平越高。

[1] Yoshida S．Brain metastasis in patients with esophageal carcinoma[J]．Surg Neurol，2007，67(3):280-290．

[2] Wadhwa R，Taketa T，Correa AM，et al．Incidence of brain metastases after trimodality therapy in patients with esophageal or gastro-esophageal cancer:implications for screening and surveillance[J]．Oncology，2013，85 (4):204-207．

[3] Guan KL，Jenkins CW，Li Y，et al．Growth suppression by p18，a p16INK4/MTS1- and p14INK4B/MTS2-related CDK6 inhibitor，correlates with wild-type pRb function [J]．Genes Dev，1994，8(24):2 939-2 952．

[4] Chan FK，Zhang J，Cheng L，et al ．Identification of human and mouse p19，a novel CDK4 and CDK6 inhibitor with homology to p16ink4[J]．Mol Cell Biol，1995，15(5):2 682-2 688．

(收稿2016-03-18)

2011年河南省科技公關重大項目112101310100

馮笑山，男，博士，教授，E-mail：samfeng137@hotmail.com

R739.41

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1673-5110(2016)20-0079-03