CIK治療惡性腫瘤的療效及相關腫瘤標志物的變化

劉 冰, 佟 瑞, 劉建瑞, 申方臣, 洪月光, 李光哲, 韓 冰

(河北省秦皇島市中醫醫院, 河北 秦皇島, 066000)

?

CIK治療惡性腫瘤的療效及相關腫瘤標志物的變化

劉 冰, 佟 瑞, 劉建瑞, 申方臣, 洪月光, 李光哲, 韓 冰

(河北省秦皇島市中醫醫院, 河北 秦皇島, 066000)

目的 探討CIK治療惡性實體腫瘤的療效及相關腫瘤標志物的改變。方法 選擇32例惡性實體腫瘤患者進行CIK治療，觀察治療前后生活質量、客觀療效、腫瘤標志物及免疫指標的變化。結果 CIK治療后患者卡氏評分(KPS)提高率59.4%, RR為46.9%, DCR為84.4%。治療后，相關腫瘤標志物CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、Fer檢測值總體有所下降。CD3+較治療前顯著升高(P<0.05)。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+與治療前相比無顯著變化(P>0.05)。結論 CIK細胞治療可提高惡性實體腫瘤患者的生存質量，但相關腫瘤標志物無明顯變化。

惡性實體腫瘤; CIK細胞; 腫瘤標志物

腫瘤細胞免疫治療是繼手術、放療和化療之后的第4大腫瘤治療技術[1-2]。其優勢在于個體性、靶向性、高效性，治療過程中痛苦小，安全性高，無毒副作用。1991年發現的細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是一群異質細胞，兼具T淋巴細胞強大的抗癌活性和NK細胞的非MHC限制性殺死癌細胞特點[3-5]。目前在臨床上已經用于治療多種惡性實體腫瘤，以預防腫瘤復發轉移，提高患者生存質量，并取得一定的臨床療效[6]。本研究探討CIK細胞治療惡性實體腫瘤的療效及相關腫瘤標志物的改變，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集符合CIK治療標準的2014年3月—2015年11月秦皇島市中醫醫院腫瘤科住院患者32例，其中男14例，女18例。年齡38～67歲, 平均48.5歲。其中包括肺癌11例，肝癌9例，乳腺癌8例，直腸癌2例，結腸癌2例。納入標準：32例患者均經影像學、病理學等方法確診為實體腫瘤Ⅲ、Ⅳ期；KPS評分≥60分，預計生存期≥6個月；重要器官功能基本正常；無不可控的感染性疾病；無嚴重自身免疫性疾病；非妊娠或哺乳期婦女；治療方案經患者及家屬同意后，簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 CIK細胞培養制備：以肝素鈉抗凝管抽取患者自身外周血50～100 mL, 送至生物治療中心GMP實驗室，用人外周血淋巴細胞分離液(購自天津灝洋生物制品科技)分離出外周血單個核細胞(PBMC), 洗滌后重懸于1640基礎培養基，加入CIK-Ⅱ號試劑，置于37℃、5% CO2培養箱內培養。第2天加入CIK-Ⅲ號試劑，觀察細胞生長狀況，之后每隔2～3 d補液加入CIK-Ⅳ號試劑(所用CIK試劑均購自北京五康生物公司)，視細胞生長情況培養12～16 d。

1.2.2 CIK細胞質量監測：培養至14 d左右，檢測細胞內毒素、細菌、真菌、支原體等指標；臺盼藍染色計算細胞活率大于95%; 檢測分子標記表達水平，要求CD3+CD56+≥20%。

1.2.3 CIK細胞回輸：將檢測合格的CIK細胞用生理鹽水洗滌2～3次，加入20%人血白蛋白3～5 mL, 重懸于200 mL生理鹽水，在地塞米松使用15～20 min后，將CIK細胞懸液靜脈回輸給患者, 1次/d, 每次細胞數量約2×109, 連續輸注3 d為1個療程，預計治療3個療程。

1.3 觀察指標及療效

1.3.1 生活質量評價：應用卡氏評分(KPS)對CIK細胞治療前后的患者進行生活質量評價。KPS評分提高10分或以上視為改善；變化不足10分視為穩定；降低10分或以上視為惡化。

1.3.2 客觀療效評定：所有患者治療1個月后進行影像學復查，按實體瘤療效評價標準(RECIST)進行評價。完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)和進展(PD)。有效率(RR) = (CR+PR)/總例數×100%, 疾病控制率(DCR) =(CR+PR+SD)/總例數×100% 。

1.3.3 腫瘤標志物的變化：分別抽取患者CIK治療前1周、治療后1個月的靜脈血，進行相應腫瘤標志物檢測，包括CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、FER。

1.3.4 免疫指標檢測：治療前3 d及治療后1個月分別應用流式細胞儀檢測CIK治療前后T細胞亞群的變化。

1.4 統計學方法

應用SPSS 17.0軟件對數據進行統計分析處理。計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

32例患者經CIK治療后KPS升高10分及以上者19例，升高<10分8例，無變化2例，下降3例，提高率59.4%。觀察治療期間腫瘤患者的精神狀態、睡眠質量、癌癥疼痛、疲乏無力等指標改善情況, 62.5%(20/32)的患者表現為不同程度的改善，表明CIK治療可以提高和改善腫瘤患者的生活質量。32例晚期腫瘤患者經過治療后PR 15例, SD 12例, PD 5例, RR為46.9%, DCR為84.4%。

治療后，相關腫瘤標志物CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、Fer水平總體有所下降，但差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。應用流式細胞儀檢測治療前后T細胞亞群的變化，其中CD3+較治療前顯著升高(P<0.05)。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+與治療前相比，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。32例腫瘤患者在CIK回輸過程中及回輸后出現發熱3例，但體溫均低于38.5 ℃。經對癥治療處理后，恢復正常。未見其他不良反應發生。

表1 CIK治療前后腫瘤標志物的變化

表2 CIK治療前后T細胞亞群變化

與治療前比較, *P<0.05。

3 討 論

腫瘤免疫細胞治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，它是運用生物技術將腫瘤患者自體或異體免疫細胞進行體外培養擴增，再回輸給患者，來激發、增強腫瘤患者自身的免疫功能，從而達到殺傷腫瘤細胞，改善患者生存質量的目的。CIK細胞治療是其中的一種，CIK增值能力強，殺瘤活性高，對腫瘤細胞的殺傷作用是LAK細胞的1 000倍，而對正常淋巴細胞和組織細胞無殺傷作用。目前CIK已在臨床上應用于治療多種惡性腫瘤[7-8], 預防腫瘤復發轉移，改善患者生存質量，并取得一定臨床療效。CIK細胞治療現已被認為是新一代過繼細胞免疫治療的重點方案之一。CIK細胞作用的主要機制如下[9-11]: 通過靶細胞表面分子與效應細胞的受體結合釋放穿孔素等物質裂解腫瘤細胞而直接發揮殺傷作用；激活細胞毒樣T淋巴細胞(CTL)、自然殺傷細胞(NK)等，起到間接殺傷腫瘤細胞的作用；活化靶細胞凋亡基因，誘導腫瘤細胞凋亡。CIK細胞治療的優點：殺瘤活力強，不需要依賴IL-2的介導，因此避免了IL-2帶來的副作用及不良反應；對多重耐藥的腫瘤細胞敏感；顯效時間短，患者輸入CIK后，短期內可改善食欲、睡眠、精神狀態等方面，并減輕疼痛；治療過程中，患者無明顯痛苦和不適，安全可靠；由于CIK細胞溶瘤作用是非MHC限制性的，因此對多種腫瘤均有殺傷作用，相關研究[12-15]報道應用CIK治療惡性實體腫瘤作用顯著，臨床效果較理想。

本研究選擇本院惡性實體腫瘤患者32例進行CIK治療，并從治療前后的KPS評分、臨床效果評估、腫瘤標志物改變、免疫指標變化等方面進行對比分析。結果顯示經CIK治療后，患者的KPS評分顯著提高，治療期間腫瘤患者的睡眠、疼痛、精神狀態等多方面得到改善，表明CIK治療可以減輕患者痛苦，提高腫瘤患者的生存質量。本研究重點觀察了CIK治療前后患者血清腫瘤標志物的改變，對治療前1周及治療后1個月的腫瘤標志物變化進行統計學分析，雖然相關腫瘤標志物值有所下降，但差異均無統計學意義(P>0.05)。其中4例(肝癌1例、肺癌1例、直腸癌2例)患者在CIK治療后1周左右自行要求檢測相應腫瘤標志物，作者意外發現4例患者在治療后1周時，其腫瘤標志物均有不同程度的升高，分析其原因可能是該時間段CIK集中發揮殺傷裂解腫瘤細胞作用強，可能導致相關腫瘤標志物及其他未知指標的一過性升高。此外，本研究結果顯示CIK治療可提高各類腫瘤患者的T細胞亞群比例，特別是CD3+顯著增高，提示CIK治療可提高機體免疫輔助應答及調節能力。

[1] Dougan M, Dranoff G. Immune therapy for cancer[J]. Annu Rev Immunol, 2009, 27: 83-117.

[2] Hontscha C, Borck Y, Zhou H, et al. Schmidt-Wolf IG. Clinical trials on CIK cells: first report of the international registry on CIK cells (IRCC)[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2011, 137(2): 305-310.

[3] Schmidt-Wolf IG, Negrin R S, Kiem H P, et al. Use of a SCID mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor cell activity [J]. J Exp Med, 1991, 174(1): 139-149.

[4] Jiang J, Xu N, Wu C, et al. Treatment of advanced gastric cancer by chemotherapy combined with autologous cytokine-induced killer cells[J]. Anticancer Res, 2006, 26(3B): 2237-2242.

[5] Li H F, Yang Y H, Shi Y J, et al. Cytokine-induced killer cells showing multidrug resistance and remaining cytotoxic activity to tumor cells after transfected with mdrl cDNA [J]. Chin Med J ( Engl), 2004, 117(9): 1348-1353.

[6] 王志華. CIK細胞治療癌癥: 國際臨床試驗的現狀及展望 [J]. 中國腫瘤生 物學雜志, 2013, 20(2): 129-135.

[7] Sangiolo D, Mesiano G, Carnevale-Schianca F, et al. Cytokine induced-killer cells as adoptive immunotherapy strategy to augment graft versus tumor after hematopoietic cell transplantation [J]. Expert Opin Biol Ther, 2009, 9(7): 831-840.

[8] Olioso P, Giancola R, Di Riti M, et al. Immunotherapy with cytokine-induced killer cells in solid and hematopoietie tumors: a pilot clinical trial[J]. Hematol Oncol, 2009, 27(3): 130-139.

[9] Wang Y, Dai H, LiH, et al. Growth of human colorectal cancer SW1116 cells is inhibited by cytokine-induced killer cells[J]. Clin Dev Immunol, 2011, 1011: 621414.

[10] Marten A, Ziske C, Schottker B, et al. Interactions between dendritic cells and cytokine -induced killer ce11s lead to an activation of both populations[J]. Immunotherapy, 2001, 24: 502.

[11] 高正興, 童朝暉, 張征, 等. 化療聯合 DC-CIK 治療多發性骨髓瘤的療效及其對 VEGF、IL-2及 TNF-α的影響[J]. 湖南師范大學學報: 醫學版, 2015, 12(3): 47-49.

[12] Jiang J T, Shen Y P, Wu C P, et al. Increasing the frequency of CIK cells adoptive immunotherapy may decrease risk of death in gastric cancer patients[J]. World J Gastroenterol, 2010, 16( 48): 6155-6162.

[13] Linn Y C, Hui K M. Cytokine-induced killer cells: NK-like T cells with cytotolytic specificity against leukemia[J]. Leuk Lymphoma, 2003, 44(9): 1457-1462.

[14] Zhong R, Teng J, Han B, et al. Dendritic cells combining with cytokine-induced killer cells synergize chemotherapy in patients withlatestage non-small cell lung cancer[J]. Cancer Immunol Immunother, 2011, 60( 10): 1497-1502.

[15] Ramakrishnan R, Gabrilovich D I. Mechanism of synergistic effect of chemotherapy and immunotherapy of cance[J]. Cancer Immunol Immunother, 2011, 60( 3): 419-423.

Efficacy of CIK cells in the treatment of patients with advanced malignant solid tumor and the changes of tumor markers

LIU Bing, TONG Rui, LIU Jianrui, SHEN Fangchen, HONG Yueguang, LI Guangzhe, HAN Bing

(QinhuangdaoHospitalofTraditionalChineseMedicine,Qinhuangdao,Hebei, 066000)

Objective To explore the curative effect of CIK cells on the treatment of patients with advanced malignant solid tumor and the changes of tumor markers. Methods A total of 32 patients with advanced malignant solid tumor were selected and treated with CIK therapy. The changes in the quality of life, tumor markers and immune indexes were observed before and after treatment. Results The raise ratio of KPS was 59.4% after CIK therapy. The response rate was 46.9% and the disease control rate was 84.4%. There were no significant changes in the tumor markers such as CEA, NSE, AFP, CA153, CA199, Fer after CIK therapy. The immune indexes of CD3+was significantly higher while levels of CD4+, CD8+, CD4+/CD8+had no significant changes after CIK cells treatment. Conclusion CIK cells treatment can significantly improve the survival quality in patients with malignant solid tumors, but there are no significant changes of the tumor markers.

malignant solid tumor; CIK cells; tumor markers

2016-09-26

河北省秦皇島市科技局科研計劃項目(201401A121)

韓冰

R 73

A

1672-2353(2016)23-029-03

10.7619/jcmp.201623009