核轉錄因子7類似物2基因rs7903146多態性與漢族女性乳腺癌的關系研究

劉桂紅，劉靜普，張 松，張怡梅，周衛華，張玉娜，劉月芹，朱鐵年

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·論著·

核轉錄因子7類似物2基因rs7903146多態性與漢族女性乳腺癌的關系研究

劉桂紅，劉靜普，張 松，張怡梅，周衛華，張玉娜，劉月芹，朱鐵年

目的 探討核轉錄因子7類似物2(TCF7L2)基因rs7903146多態性與漢族女性乳腺癌的關系。方法 選取2011年1月—2012年1月于河北醫科大學第四醫院住院治療且符合納入標準的女性乳腺癌患者564例作為乳腺癌組，另選取白求恩國際和平醫院同期體檢健康的女性394例作為正常對照組。取受試者外周血提取DNA，采用聚合酶鏈式反應-連接酶檢測反應(PCR-LDR)法對TCF7L2基因rs7903146位點進行基因分型。比較兩組患者年齡、體質指數(BMI)以及TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率，并分析TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率與乳腺癌患者臨床指標(診斷時年齡、絕經狀態)和病理指標〔雌激素受體(ER)狀態、孕激素受體(PR)狀態、人類表皮生長因子受體2(HER-2)狀態、P53狀態、Ki-67狀態、淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、組織學分級、腫瘤分期、分子分型〕的關系。結果 兩組患者年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)；乳腺癌組BMI大于對照組(P<0.001)。對照組和乳腺癌組TCF7L2基因rs7903146位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，表明研究樣本具有群體代表性。兩組均未檢測出TT基因型,兩組TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。診斷時年齡≥50歲、絕經后的乳腺癌患者CT基因型頻率高于診斷時年齡<50歲、絕經前的乳腺癌患者(P<0.05)。ER狀態、PR狀態、HER-2狀態、P53狀態、Ki-67狀態、淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、組織學分級、腫瘤分期及分子分型與乳腺癌患者CT基因型頻率無關，差異無統計學意義(P>0.05)。結論 TCF7L2基因rs7903146多態性與乳腺癌的發生風險無關，其不是中國漢族女性乳腺癌的患病風險因子。

乳腺腫瘤；多態現象，遺傳；核轉錄因子7類似物2基因；漢族

劉桂紅，劉靜普，張松，等.核轉錄因子7類似物2基因rs7903146多態性與漢族女性乳腺癌的關系研究[J].中國全科醫學，2016，19(33)：4051-4055.[www.chinagp.net]

LIU G H,LIU J P,ZHANG S,et al.Correlation between rs7903146 polymorphism of transcription factor 7-like 2 gene and breast cancer in Chinese Han women[J].Chinese General Practice，2016，19(33)：4051-4055.

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，近年來中國乳腺癌發病率居女性惡性腫瘤首位,并以>3%的速度逐年遞增。糖尿病是由遺傳和環境因素共同引起的一組以糖代謝紊亂為主要表現的臨床綜合征，相關Meta分析顯示，糖尿病患者罹患乳腺癌的相對風險為一般人群的1.2～1.5倍[1-5]。目前越來越多的研究表明，糖尿病與乳腺癌的發生存在一定聯系[4-5]，但具體機制尚未明確。研究表明，乳腺癌與糖尿病均為多基因疾病[3-5]，兩種疾病可能存在相同的基因突變。核轉錄因子7類似物2(TCF7L2)基因變異是迄今為止發現的引起2型糖尿病易患性增加最為顯著的基因[6-9]，因此，本研究進一步研究了TCF7L2基因rs7903146多態性與中國漢族女性乳腺癌患病風險的關系，旨在為臨床乳腺癌的治療提供更多思路，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 納入與排除標準 納入標準：(1)漢族；(2)受試者間均無血緣關系；(3)乳腺癌患者均行單側乳腺癌改良根治術，術后標本經病理和免疫組化檢測證實為原發性乳腺癌；(4)體檢健康者均無乳腺癌家族史及其他腫瘤史。排除標準：(1)乳腺原位癌；(2)雙側乳腺癌。

1.2 研究對象 選取2011年1月—2012年1月于河北醫科大學第四醫院住院治療且符合納入標準的女性乳腺癌患者564例作為乳腺癌組，另選取白求恩國際和平醫院同期體檢健康的女性394例作為對照組。

1.3 DNA基因提取 取所有受試者清晨空腹外周靜脈血2 ml，采用DNA提取試劑盒(Promega公司)提取DNA(按說明書進行操作)，-80 ℃保存備用。

1.4 基因分型 采用聚合酶鏈式反應-連接酶檢測反應(PCR-LDR)法對TCF7L2基因rs7903146位點進行基因分型。PCR擴增上游引物5′-GGGGAGCCGTCAGATGGTAAT-3′；下游引物5′-TTGCCTTCCCTGTAACTGTGG-3′，PCR產物長232 bp。PCR反應體系中含基因組DNA 1 μl，10×PCR buffer 1.5 μl，MgCl21.5 μl，10 mmol/L dNTPs 0.3 μl，10 pmol/L引物各0.25 μl，5 U/μl熱啟動Taq DNA 聚合酶0.2 μl，進行PCR擴增。PCR擴增參數:94 ℃ 預變性2 min；94 ℃ 變性20 s，56 ℃退火20 s，72 ℃延伸40 s，35 個循環；72 ℃延伸3 min。檢測TCF7L2單核苷酸多態性(SNP)rs7903146多態性的探針為通用探針:5′-P-AGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATATTT-FAM-3′；分型探針1:5′-TTAGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATAC-3′，產物長54 bp；分型探針2:5′-TTTTTAGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATAT-3′，產物長57 bp。其中通用探針5′端磷酸化，3′端用熒光素FAM標記。配制10 μl LDR體系:10×連接酶buffer 1 μl，2 μl PCR產物，10 pmol/L分型探針及通用探針各0.01 μl，40 U/μl Taq DNA連接酶0.125 μl。反應程序:94 ℃變性30 s,56 ℃退火3 min，共30個循環。采用測序儀(型號：ABI 3730XL)進行檢測：取1 μl連接產物，加10 μl上樣loading(已混入Mark)，95 ℃變性3 min，立即冰水浴。

本文鏈接：

本研究背景：乳腺癌與糖尿病的發病率均在逐年上升，越來越多的研究表明糖尿病與乳腺癌密切相關，有關糖尿病與乳腺癌的具體發病機制目前尚不清楚，關于二者相互作用的機制也無一致的結論。乳腺癌與2型糖尿病有共同的病因學，如肥胖、高胰島素血癥及胰島素抵抗等。乳腺癌與2型糖尿病不僅具有相同的病因學，還在臨床表現、群體遺傳學背景等方面具有很多的相似性，鑒于這兩種疾病的相似性，特別是在遺傳學背景上的相似性，研究者常將2型糖尿病的易患基因作為導致乳腺癌發生的候選基因。

本研究創新之處：本研究旨在探討糖尿病易患基因之一的核轉錄因子7類似物2(TCF7L2)基因多態性與中國漢族女性乳腺癌發病風險的關系。對于TCF7L2基因單核苷酸多態性的研究很多，但多集中在其與糖尿病發病的關系方面，有關TCF7L2基因與腫瘤關系的研究國外有少量報道，主要為TCF7L2基因與結腸癌及前列腺癌關系的研究。本研究主要分析TCF7L2基因與中國漢族女性乳腺癌發生的相關性，為疾病的預防和治療提供理論基礎。

本研究不足之處：本研究為病例對照研究，因時間跨度較大，本院乳腺癌免疫組化指標檢測有所變動，故部分免疫組化指標數據缺失，可能對結果造成一定影響。

1.5 觀察指標 比較兩組患者年齡、體質指數(BMI)以及TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率，并分析TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率與乳腺癌患者臨床指標(診斷時年齡、絕經狀態)和病理指標〔雌激素受體(ER)狀態、孕激素受體(PR)狀態、人類表皮生長因子受體2(HER-2)狀態、P53狀態、Ki-67狀態、淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、組織學分級、腫瘤分期、分子分型〕的關系。病理指標均參照中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2013版)[10]進行判定。

2 結果

2.1 兩組年齡、BMI比較 兩組患者年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)；乳腺癌組BMI大于對照組，差異有統計學意義(P<0.001，見表1)。

2.3 TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率與乳腺癌患者臨床指標的關系 診斷時年齡≥50歲、絕經后的乳腺癌患者CT基因型頻率高于診斷時年齡<50歲、絕經前的乳腺癌患者，差異有統計學意義(P<0.05，見表3)。

2.4 TCF7L2基因rs7903146位點基因型與乳腺癌患者病理指標的關系 ER狀態、PR狀態、HER-2狀態、P53狀態、Ki-67狀態、淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、組織學分級、腫瘤分期及分子分型與乳腺癌患者CT基因型頻率無關，差異無統計學意義(P>0.05，見表4)。

3 討論

TCF7L2也稱T細胞轉錄因子-4(TCF-4)，該基因位于染色體10q25.3，長度約為215.9 kb，是一種含有高遷移率組(HMG)盒的轉錄因子[11]。研究表明，

表1 兩組年齡和BMI比較Table 1 Comparison of age and BMI between two groups

表2 兩組TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率分布比較〔n(%)〕Table 2 Comparison of distributions of CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 between breast cancer group and control group

表3 TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率與乳腺癌患者臨床指標的關系〔n(%)〕Table 3 Association between CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 and clinical index of breast cancer patients

表4 TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率與乳腺癌患者病理指標的關系〔n(%)〕Table 4 Association between CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 and pathological index of breast cancer patients

TCF7L2有17個外顯子，其中外顯子4、13、14、15、16是選擇性的，外顯子9、16、17具有選擇剪接的受體位點，不同的剪接方式可產生不同的基因剪接異構體，在羧基端產生短、中、長的開放閱讀框架,只有長閱讀框架才能與羧基端結合蛋白1(CtBP1)結合而抑制轉錄。TCF7L2表達產物具有高度變異性[12]。TCF7L2在人成熟的胰島B細胞和脂肪組織中高表達,少量表達于血液和骨骼肌中[13]。TCF7L2在Wnt信號通路中有很重要的作用,能與細胞核內β連環蛋白(β-catenin)結合,通過細胞表面的Wnt信號通路調節相關基因的表達，從而在細胞增殖、正常胚胎形成及調節肌肉、脂肪組織形成方面起關鍵作用[14-15]，同時在胚胎發育過程中對胰腺、胰島細胞的發育起至關重要的作用[16]。TCF7L2基因在腸內高表達，與結直腸癌的發生密切相關[17-21]。NAIDU等[22]研究表明，TCF7L2基因rs7903146(T)變異可能增加乳腺癌的發生風險，有可能成為乳腺癌的候選易感基因。這種變異還可能增加腫瘤遠處轉移風險。亦有研究表明，TCF7L2還可通過Wnt信號通路調節胰高糖素原基因的表達[23]，繼而調節GLP-1(glucagon-like peptide-1)水平改變胰島B細胞功能，從而參與葡萄糖穩態的調節。從既往研究中可知，TCF7L2基因與乳腺癌及糖尿病均有關[1-5]，因此本研究觀察糖尿病易感基因TCF7L2是否與中國漢族人群乳腺癌的發生有關。

本研究結果顯示，乳腺癌組患者BMI高于對照組，提示BMI可能是乳腺癌患病的影響因子，正常人群應注意控制飲食、增強鍛煉以減輕BMI，降低乳腺癌的發生風險。乳腺癌組患者TCF7L2基因rs7903146位點CC、CT基因型頻率分別為92.7%和7.3%，與對照組的89.3%、10.7%比較無差異，表明與CC基因型比較，CT基因型頻率未顯著改變乳腺癌的發生風險。分析乳腺癌患者不同臨床指標發現，診斷時年齡≥50歲、絕經后的乳腺癌患者CT基因型頻率高于診斷時年齡<50歲、絕經前的乳腺癌患者，表明TCF7L2基因rs7903146位點更可能是年齡≥50歲及絕經后女性患者的易感基因，因此需加強對該類人群的健康教育，包括積極體檢，以早期發現疾病并治療，提高患者的生存期。分析其不同病理指標發現，ER狀態、PR狀態、HER-2狀態、P53狀態、Ki-67狀態、淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、組織學分級、腫瘤分期及分子分型與乳腺癌患者CT基因型頻率無關，表明TCF7L2基因rs7903146多態性與乳腺癌的發生風險無關。到目前為止，只有兩項有關TCF7L2基因rs7903146多態性與乳腺癌發生風險的研究，NAIDU等[22]采用PCR-限制性片段長度多態性(RFLP)方法檢測來自馬來群島的387例乳腺癌患者及252例無任何腫瘤病史的健康女性的TCF7L2基因多態性發現，乳腺癌患者中rs7903146(T)等位基因頻率明顯高于正常人，而CT或TT基因型與乳腺癌的發生風險無關；然而攜帶T等位基因(CT+TT)或T基因型的女性乳腺癌風險明顯增加，且rs7903146(T)與淋巴結轉移有關。總之，TCF7L2基因rs7903146(T)變異可能增加乳腺癌的發生風險，成為乳腺癌的候選易患基因，這種變異還可能增加腫瘤遠處轉移的風險。CONNOR等[24]對西班牙裔及非西班牙裔白種女性的研究發現，TCF7L2基因rs7903146位點TT基因型顯著增加乳腺癌的發病風險〔OR=1.24,95%CI(1.03，1.49)〕，且與ER(-)/PR(-)有關〔OR=1.56,95%CI(1.07，2.27)〕。不同研究結論有差異的原因可能與樣本量不同、選取受試者的種族、個體特征如絕經狀態及腫瘤的不同組織病理類型等有關。這些差異可能改變病例組和對照組基因型及等位基因頻率，從而影響基因多態性與腫瘤發病風險的關系。

綜上所述，TCF7L2基因rs7903146多態性與中國漢族女性乳腺癌的發生無關，但結論仍需進一步的大樣本量研究進行驗證。

作者貢獻：劉桂紅進行試驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負責；劉靜普、張松、張怡梅、周衛華、張玉娜、劉月芹進行試驗實施、評估、資料收集；朱鐵年進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：毛亞敏)

Correlation between rs7903146 Polymorphism of Transcription Factor 7-like 2 Gene and Breast Cancer in Chinese Han Women

LIUGui-hong,LIUJing-pu,ZHANGSong,ZHANGYi-mei,ZHOUWei-hua,ZHANGYu-na,LIUYue-qin,ZHUTie-nian.DepartmentofEndocrinology,FourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China

Correspondingauthor:ZHUTie-nian,DepartmentofOncology,BethuneInternationalPeaceHospital,Shijiazhuang050082,China;E-mail:zhutienian@medmail.com.cn

Objective To investigate the correlation between the polymorphism of transcription factor 7-like 2(TCF7L2) gene and breast cancer in Chinese Han women.Methods According to the inclusion criteria,564 women with breast cancer who received treatment in the Fourth Hospital of Hebei Medical University from January 2011 to January 2012 were selected as the breast cancer group.394 healthy women who underwent physical examination at the same period in Bethune International Peace Hospital were selected as the normal control group.The DNAs were extracted from the peripheral blood of subjects.The genotypes of TCF7L2 gene rs7903146 was detected by polymerase chain reaction-ligase detection reaction(PCR-LDR).The age,body mass index(BMI) and genotype frequency of CC and CT in TCF7L2 gene rs7903146 of patients in two groups were compared,and the correlation between genotype frequency of CC and CT in TCF7L2 gene rs7903146 and clinical index(age and menopausal status at the time of diagnosis) and pathological index 〔estrogen receptor(ER) status,progesterone receptor(PR) status,human epidermal growth factor receptor 2(HER-2) status,P53 status,Ki-67 status,lymph node metastasis,tumor size,histological grade,tumor stage and molecular typing〕 of patients with breast cancer.Results There was no significant difference in age of patients between the two groups(P>0.05);BMI in breast cancer group was greater than that in the control group(P<0.001).The distribution of the TCF7L2 gene rs7903146 genotype in the control group and the breast cancer group were all in line with the Hardy-Weinberg equilibrium(P>0.05),which indicated that the study sample had group representativeness.Both of the two groups were not detected with TT genotypes.There was no significant difference in the frequencies of CC and CT genotypes in TCF7L2 gene rs7903146 between the two groups(P>0.05).The CT genotype frequency of breast cancer patients aged 50 or over after menopause at the time of diagnosis was higher than that of patients aged under 50 pre-menopause(P<0.05).There was no significant relationship between CT genotype frequency of ER status,PR state,HER-2 status,P53 status,Ki-67 status,lymph node metastasis,tumor size,histological grade,tumor stage as well as molecular typing in breast cancer patients(P>0.05).Conclusion The rs7903146 polymorphism of TCF7L2 gene is unrelated to the risk of breast cancer occurrence,and it is not the risk factor of Chinese Han women developing breast cancer.

Breast neoplasms;Polymorphism,inheritance;Transcription factor 7-like 2 gene；Han nationality

河北省衛生廳醫學科學研究重點課題(20110466)

050011河北省石家莊市，河北醫科大學第四醫院內分泌科(劉桂紅，周衛華，張玉娜，劉月芹)；白求恩國際和平醫院腫瘤科(劉靜普，張怡梅，朱鐵年)；河北醫科大學第三醫院檢驗科(張松)

朱鐵年，050082河北省石家莊市，白求恩國際和平醫院腫瘤科；E-mail：zhutienian@medmail.com.cn

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.33.006

2016-03-13；

2016-09-06)