自制棉酚餌料對小白鼠的抗生育作用

摘要：為了探討棉酚對小白鼠生殖功能的影響，本試驗將30只健康小白鼠（雌、雄各半），隨機分為3組，每組10只（雌雄各半），對照組飼喂基礎餌料，試驗1組飼喂添加1.0%的棉酚的基礎餌料，試驗2組飼喂添加0.5%溴敵隆的基礎餌料，試驗結束后計算適口性，睪丸、卵巢臟器系數，制作睪丸、卵巢組織學切片，統計合籠后的產仔情況。結果表明，在適口性方面，添加1.0%棉酚的混合餌料比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好；試驗1組，小鼠的生精小管的管壁厚度比對照組?。≒<0.01），管腔直徑大。試驗2組小鼠的生精小管管壁管，管腔直徑與對照組相比顯著變小（P<0.05）。配對以后試驗1組小鼠的幼仔個數少于對照組。結果表明，棉酚對小鼠精巢有影響，影響生精小管管壁直徑，精子數量，并且降低了雌鼠所懷幼仔個數。說明棉酚能起到降低了雄性小鼠的生育能力的作用。

關鍵詞：棉酚；適口性；臟器系數；精巢

中圖分類號：TQ645.9+7 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）13-3402-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.13.034

植物不育劑是由具有抗生育作用的天然植物中的提取物配制而成，用不育劑配制的混合餌料，對雌雄鼠生殖機能均有一定的破壞性，起到了阻斷生殖的作用，又不污染環境和破壞生態平衡。所以近年來選用植物不育劑制作環保型鼠藥越來越受到人們的重視。棉酚是棉子、棉殼、棉子餅及棉粕中含有的一種有毒物質，它是萘的衍生物。在動物的餌料中加入少量的棉酚，并不會引發中毒，但加入大量棉酚，在豬、牛和羊中有中毒的記載[1]。游離棉酚的中毒量與餌料中蛋白質水平、亞鐵離子水平及鈣離子水平有關[1]。棉酚對雄性大鼠有抗生育作用，但對大鼠的交配行為及副性腺的功能均無明顯的影響，亦不改變大鼠及猴血漿中睪酮的含量[2]。但影響抗生育的機理有待于研究。

本試驗以小白鼠作為試驗動物，并且喂以配有棉酚的自制餌料飼喂小白鼠，記錄攝食量，體重，計算適口性，臟器系數，用組織學方法研究精巢和卵巢組織結構的變化，觀察小鼠懷幼崽個數。試驗目的是通過棉酚研究出植物源的無公害的滅鼠餌料，達到對田間、林地害鼠種群的調控。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

30只昆明小白鼠源于西安醫學院動物實驗中心，體重為14～20 g。隨機分為3組，每組10只，雌、雄各半，分開放置于小鼠鼠籠。

1.2 配制混合餌料

基礎餌料的配制：玉米35%；麩皮22%；豆渣24%；鹽1%；骨粉1%；面粉17%?；D為對照組餌料。試驗1組在基餌中添加1.0%的棉酚（購自西安慈緣生化科技有限公司）；試驗2組在基餌中添加0.5%溴敵?。ㄙ徸躁兾飨绒r生物科技有限公司）。各組餌料固定為餅狀烘干待用。

1.3 試驗方法

1.3.1 加藥飼養 每天每只飼喂基餌或混合餌料10 g，自由飲水。一周換一次墊料，換墊料時稱量所剩餌料的重量，試驗期共30 d，計算不同餌料對小白鼠日攝食量的影響，日攝食量（g）=（10×30-剩余餌料）÷30。

1.3.2 第一部分

1.3.2.1 臟器系數 30 d后，從3組中每組雌雄各選2只，共12只，稱重，20%烏來糖腹腔麻醉，經左心室輸入0.1 mol/L生理鹽水磷酸緩沖液100～150 mL（pH 7.4），剪破右心房以使血液流出，再輸入4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液300 mL（pH 7.4），立即取雙側睪丸和卵巢，測臟器系數。臟器系數=雙側睪丸或卵巢（g）/體重（g）。

1.3.2.2 組織學切片 另一側睪丸和卵巢置于Bouin’s液中固定，做冰凍切片。切片厚度8 μm，H.E染色，在顯微鏡下觀察并測量雄性各組同一橫截面生精小管管徑、生殖上皮厚度。觀察并測量卵巢中黃體的面積。

1.3.3 第二部分 30 d后，將剩余的小鼠合籠并重新分為3組（每組雌、雄鼠各3只），對照組：飼喂基餌；試驗1組：飼喂1.0%棉酚混合餌料；試驗2組：飼喂0.5%的溴敵隆。合籠后均以正常餌料喂養，觀察雌性個體的產仔潛伏期和產仔數量。

1.4 統計分析

用SPSS10.0軟件系統對日進食量、臟器系數、生精小管管徑、生殖上皮厚度、黃體的大小、產仔潛伏期和產仔數量進行統計分析，數據以平均值±標準誤（x±sd）來表示，根據Non-parametric test，產仔潛伏期和產仔數量為非正態分布，因而用Mann-Whitney U test，其他為正態分布，用Independent-Samples T test，P<0.05時表示兩組數據具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 適口性分析

由表1可知，與對照組相比，試驗1組雌、雄小白鼠日攝食量差異不顯著（P>0.05），而試驗2組的日攝食量均極顯著小于對照組（P<0.01）。在一定程度上攝食量與適口性是呈正相關的，所以可得知添加1.0%棉酚的混合餌料的適口性比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好。

2.2 小鼠臟器指數

由表2可知，試驗1組的睪丸臟器系數與對照組之間差異不顯著（P>0.05）。試驗2組的睪丸臟器系數極顯著小于對照組（P<0.01）。由表3可知，雌性試驗1組卵巢臟器系數與對照組之間差異不顯著（P>0.05）。雌性試驗2組卵巢臟器系數極顯著小于對照組（P<0.01）。

2.3 混合餌料對睪丸、卵巢結構的影響

由圖1可知，光鏡下觀察到對照組生精小管管壁完整，管壁較厚。間質中可見單個或成群地間質細胞。試驗1組和試驗2組生殖上皮厚度較薄，睪丸間質增大，間質細胞較為少見。試驗1組和試驗2組小鼠的生精小管管腔直徑比對照組極顯著性增大。試驗1組和試驗2組小鼠的管壁厚度與對照組相比極顯著或顯著變薄。對照組雌性小鼠和試驗組卵巢中發育成熟的卵泡均較多，但試驗2組黃體萎縮，結構模糊。試驗1組雌性小鼠和對照組無顯著性差異，試驗2組雌性小鼠黃體最大橫截面積極顯著低于對照組。

2.4 產仔情況

由表4可知，試驗1組的產仔數明顯比對照組少（P=0.01）。試驗2組配對后死亡，所以無產仔數。

3 討論

用含棉酚的混合餌料飼養的小鼠日攝食量與對照組之間沒有明顯差異，表明混合餌料并不影響到小鼠的進食量，有較好的適口性。而食用溴敵隆混合餌料的小鼠日進食量比對照組明顯減小，表明溴敵隆混合餌料適口性差。食用混合餌料的雄性睪丸臟器系數和雌性卵巢臟器系數明顯比對照組小，說明棉酚作用在動物體上一段時間后睪丸和卵巢的相對質量減小了，但質量的減少不僅與藥物有關，可能與適口性也有關。

有研究認為棉酚對睪丸曲細精管生精上皮的損傷，以晚期精子細胞和初級精母細胞最為明顯。如精母細胞核固縮，精子細胞核空泡化，形成多核巨細胞，胞漿呈嗜酸性。然而，即使在曲精細管生精上皮受到嚴重損傷，只剩下1～2層細胞的情況下，仍能見到精原細胞和支持細胞，由此可見，晚期精子細胞和初級精母細胞對棉酚較為敏感，而精原細胞和支持細胞對棉酚則表現一定的耐受性。棉酚對大鼠睪丸生精上皮的損傷具有長效作用[2]。本試驗通過制作小鼠精巢組織學切片，觀察到棉酚試驗組管壁厚度均變薄，管腔直徑變大，合籠后產仔量減少，可能長期服用棉酚減少精子數量，從而降低生育能力。

本試驗還觀察到棉酚試驗組雌性卵巢的組織學切片發現試驗組雌性個體卵巢內黃體面積與對照組相似，未出現萎縮，而食用溴敵隆組雌性黃體極度萎縮，還未合籠就已死亡，說明毒性極大。有研究認為黃體能夠分泌雌激素和孕激素，這兩種激素對于子宮內膜的周期性變化及受精卵著床、胎兒發育極為重要[3]?？梢姡薹涌赡苤皇怯绊懶坌跃驳陌l育，而對雌性影響不大，這與其他學者研究結果一致[4]。

參考文獻：

[1] 王 剛，唐克偉.含棉酚飼料的科學應用[J].中國養殖學，2009， 36（1）：44-46.

[2] 張寅恭.棉酚抗生育作用的研究II.雄性大鼠的抗生育作用[J].上海中醫學，1980（6）：43.

[3] 何鳳琴.雷公藤和莪術混合餌料對棕色田鼠生殖作用的影響[J].中國媒介生物學及控制雜志，2013，24（1）：34-38.

[4] 雷海鵬.醋酸棉酚對雄性大鼠的抗生育作用[J].中華醫學雜志， 1979，59（7）：402.