羅田甜柿總?cè)频奶崛l件分析

摘要：為了確定羅田甜柿（Diospyros kaki Thunb.）成熟果實中總?cè)坪亢吞崛l件，以湖北省羅田縣的羅田甜柿果實為試材，從不同的溶劑、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時間、溫度、料液比、提取次數(shù)來確定提取羅田甜柿成熟果實中總?cè)频淖罴褩l件，結(jié)果表明，通過單因素試驗確定提取條件為70%乙醇作為溶劑，提取時間3 h，溫度85 ℃，料液比1∶11（m∶V，g∶mL），提取2次，總?cè)铺崛×孔罡呖蛇_(dá)51.13 mg/100 g（FW）。

關(guān)鍵詞：羅田甜柿（Diospyros kaki Thunb.）；總?cè)疲惶崛l件

中圖分類號：S665.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）13-3443-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.13.043

羅田甜柿（Diospyros kaki Thunb.）是指在大別山地區(qū)生長的，不需要經(jīng)過人工脫澀就能夠直接食用的一種甜柿，因為最先在羅田縣發(fā)現(xiàn)，故而命名為羅田甜柿[1，2]。目前，該產(chǎn)品己申請國家地理標(biāo)志。羅田甜柿果實成熟后呈橙黃色，果面極具光澤，氣味清香誘人。果實中富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如葡萄糖、果糖、蔗糖、花白甙、維生素、瓜氨酸等。每100 g甜柿鮮果肉的蛋白質(zhì)含量為0.57～0.67 g、可溶性糖為11.68 g、脂肪為0.28～0.30 g，并且富含β-胡蘿卜素、尼克酸、鐵、鋅、硒等多種微量元素和維生素B1、維生素B2、維生素E等[1]。三萜類化合物在菌類、蕨類、單子葉植物、雙子葉植物、動物以及海洋生物中廣泛存在，具有抗菌消炎、抑制腫瘤細(xì)胞生長、免疫調(diào)節(jié)等多種生理活性。本試驗以湖北省羅田縣的羅田甜柿果實為材料，分析了其果實中三萜類物質(zhì)的提取條件，以期達(dá)到提高柿中三萜類物質(zhì)的提取效率，將資源優(yōu)勢轉(zhuǎn)化為經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

于2014年10月在羅田縣三里畈鎮(zhèn)摘取己成熟的新鮮羅田甜柿果實。

1.2 試驗方法

1.2.1 材料處理 將采摘的果實帶回實驗室后，去除果蒂后洗凈，自然晾干后切成塊狀并去掉種子，稱重后，于烘箱中在80 ℃下烘干至恒重，計算干物質(zhì)百分含量，粉碎后用于三萜類物質(zhì)的提取。

1.2.2 提取條件單因素試驗

1）提取溶劑的種類：準(zhǔn)確稱取4份甜柿粉碎物各10.00 g，分別加入11倍體積（甜柿∶提取溶劑=1∶11，m∶V，g∶mL，下同）的60%正己烷、85%乙醚、70%乙醇、80%甲醇，在85 ℃下水浴回流提取3 h，提取2次。

2）乙醇的體積分?jǐn)?shù)：準(zhǔn)確稱取5份甜柿粉碎物各10.00 g，分別加入11倍體積的60%、70%、80%、90%、100%乙醇，在85 ℃下水浴回流提取3 h，提取2次。

3）提取時間：準(zhǔn)確稱取5份甜柿粉碎物各10.00 g，加入11倍體積的70%乙醇，分別在85 ℃水浴回流提取 2、3、4、5、6 h，提取2次。

4）提取溫度：準(zhǔn)確稱取4份甜柿粉碎物各10.00 g，加入11倍體積的70%乙醇，分別在65、75、85、95 ℃下水浴回流提取3 h，提取2次。

5）料液比：準(zhǔn)確稱取5份甜柿粉碎物各10.00 g，分別加入不同體積的70%乙醇，料液比（g∶mL，下同）為1∶9、1∶11、1∶13、1∶15、1∶17，置于85 ℃下水浴回流提取3 h，提取2次。

6）提取次數(shù)：準(zhǔn)確稱取5份甜柿粉碎物，每份10.00 g，分別加入11倍體積的70%乙醇，置于85 ℃水浴下回流提取3 h，過濾后，在濾渣中再次加入11倍體積的70%乙醇，重復(fù)上述操作，合并濾液后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓濃縮，濃縮液定容后，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用紫外分光光度法，在560 nm波長下測定其吸光度，確定總?cè)祁惖暮浚蔡崛?次。

所有提取液分別過濾后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓濃縮，濃縮液定容后，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用紫外分光光度法，在560 nm波長下測定其吸光度，確定總?cè)祁惖奶崛×縖3，4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑種類的確定

由圖1可知，甲醇、乙醇等極性較強的溶劑提取效果優(yōu)于極性弱的溶劑乙醚或正己烷，其總?cè)铺崛×糠謩e為43.13、45.36、30.43、13.25 mg/100 g（FW）。因此，以70%乙醇的提取效果最佳。

2.2 提取溶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)的確定

不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取甜柿中總?cè)频慕Y(jié)果如圖2所示。乙醇體積分?jǐn)?shù)從60%上升至70%的過程中，總?cè)铺崛×侩S著提取液體積分?jǐn)?shù)的升高而升高，分別為38.96、50.09 mg/100 g（FW）；隨后繼續(xù)升高乙醇體積分?jǐn)?shù)至80%、90%、100%，總?cè)铺崛×侩S之下降，分別為45.36、42.73、19.87 mg/100 g（FW），其中70%乙醇所提取的總?cè)铺崛×孔罡摺?/p>

2.3 提取時間的確定

由圖3可知，在提取時間為2 h時，總?cè)铺崛×孔畹停瑸?1.32 mg/100 g（FW），隨著提取時間的增加，總?cè)铺崛×坑兴撸容^小。提取時間為3、4、5 h時，總?cè)祁愄崛×糠謩e為49.76、49.97、50.13 mg/100 g（FW）；當(dāng)提取時間為6 h時，總?cè)祁愄崛×繛?9.36 mg/100 g（FW），因此，綜合考慮時間和效益，選擇提取時間為3 h。

2.4 提取溫度的確定

由圖4可知，隨著提取溫度從65 ℃升高至85 ℃時，總?cè)铺崛×糠謩e為20.21、37.12、50.03 mg/100 g（FW）。當(dāng)溫度升高到95 ℃時，其提取量隨之下降到48.87 mg/100 g（FW）。因此，提取羅田甜柿中總?cè)频淖钸m溫度為85 ℃。

2.5 提取料液比的確定

由圖5可知，在料液比較低的情況下，羅田甜柿中總?cè)铺崛×恳草^低，為18.13 mg/100 g（FW）。而當(dāng)料液比上升至1∶11時，羅田甜柿中總?cè)铺崛×可叩?9.97 mg/100 g（FW）；但是當(dāng)料液比依次升高為1∶13、1∶15、1∶17時，總?cè)铺崛×棵黠@下降。因此，羅田甜柿中總?cè)铺崛⌒Ч罴训牧弦罕葹?∶11。

2.6 提取次數(shù)的確定

由圖6可知，當(dāng)提取次數(shù)為1次時，羅田甜柿果實總?cè)铺崛×孔畹停瑸?6.53 mg/100 g（FW）；提取次數(shù)為2次時，總?cè)铺崛×窟_(dá)到最大，為51.13 mg/100 g（FW）；隨著提取次數(shù)的增加，總?cè)铺崛×拷档停謩e為41.79、35.95、33.18 mg/100 g（FW）。因此，羅田甜柿果實中總?cè)频淖罴烟崛〈螖?shù)為2次。

3 小結(jié)與討論

在所選擇的幾種提取溶劑中，以70%乙醇的提取效果最好，其次是80%甲醇、85%乙醚，最差的是60%正己烷，分析原因可能與回流提取溶劑的極性大小有關(guān)。根據(jù)相似相溶原理，極性越接近三萜類物質(zhì)的極性，提取效果越好[5]。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過70%時，一些醇溶性物質(zhì)的溶出對總?cè)频奶崛×吭斐捎绊懀崛⌒Ч陆怠Ｋ裕掖俭w積分?jǐn)?shù)為70%時提取效果最佳。在提取時間方面，提取時間太長，有的三萜類物質(zhì)會發(fā)生降解，從而影響總?cè)频奶崛×縖6]。出于對效率和效益的綜合考慮，在提取羅田甜柿果實中總?cè)茣r，最佳提取時間是3 h。隨著水浴溫度的升高，分子熱運動加快，羅田甜柿果實中總?cè)铺崛×侩S之增加，而溫度達(dá)到85 ℃時提取量最大，隨著溫度的繼續(xù)升高，提取率逐漸降低，這是由于總?cè)剖腔钚晕镔|(zhì)，溫度過高易破壞其結(jié)構(gòu)或影響其活性[7]。料液比達(dá)到一定比例時[8]，原料中的總?cè)萍航?jīng)基本萃取完全，故繼續(xù)增加溶劑的量，不僅會造成單位提取液中總?cè)茲舛鹊慕档停速M溶劑和能源，而且也會給后續(xù)的濃縮工作帶來困難。隨著提取次數(shù)的增加，總?cè)铺崛×肯仍黾雍蠼档停?dāng)提取次數(shù)過多時，將增加濃縮工序的難度，也會浪費試劑。因此，在提取羅田甜柿果實中總?cè)茣r，提取次數(shù)為2次，提取效果較好。

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