苗藥狹葉崖爬藤的抗菌活性研究

摘要：目的 探討苗藥狹葉崖爬藤提取物對表皮葡萄球菌的抗菌活性。方法 采用中藥抑菌實驗方法，對狹葉崖爬藤提取物進行98株表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度（MIC）檢測。結果 狹葉崖爬藤提取物對208株表皮葡萄球菌中的55株耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）與43株耐甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）的最低抑菌濃度分別為1185 μg/ml、286 μg/ml。結論 苗藥狹葉崖爬藤具有較強的抑菌作用。

關鍵詞：苗藥；狹葉崖爬藤；表皮葡萄球菌；抗菌活性

Abstract：Objective To study the antibacterial activity of Tetrastigma Serrulatum extracts on the staphylococcus epidermidis.Methods The bacteriostasis of TCM was tested.The MIC（minimal inhibitory concentration）of Tetrastigma Serrulatum extracts for 98 strains of staphylococcus epidermidis was detected.Results The MIC for 55 strains of MRSE and 43 strains of MSSE was1185μg/ml and 286μg/ml（P<0.05）.Conclusion The Tetrastigma Serrulatum has a stronger bacteriostasis effect.

Key words：Miao Ethnic medicine；Tetrastigma Serrulatum；Staphylococcus epidermidis；Antibacterial activity

表皮葡萄球菌是臨床感染中最為多見的一種病原菌，屬于革蘭陽性球菌，研究表明其在臨床標本中的分離率高達50%～80%[1]。目前，我國抗菌類藥物的使用存在濫用情況，導致耐甲氧西林表皮葡萄球菌對多種抗菌類藥物存在耐受性。苗藥狹葉崖爬藤又名五爪金龍，來源于葡萄科植物崖爬藤的全株，其性溫、味辛，歸冷、熱二經，在貴州苗族民間常用于治療風寒濕痹、瘀血內停、高血壓等心臟等慢性疾病[2]。有研究顯示，苗藥狹葉崖爬藤具有降低炎癥因子水平的作用[3]。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1抗菌藥物 苗藥狹葉崖爬藤、青霉素、氨芐西林等。

1.1.2病原菌菌種 表皮葡萄球菌共98株，其中耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）55株，耐甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）43例。所有病原菌均制備成0.5麥氏單位菌液待用。

1.2方法

1.2.1苗藥狹葉崖爬藤提取液制備方法 采用水提醇沉法提取苗藥狹葉崖爬藤的有效成分，然后將提取液制備成1 g/ml的藥液。采用0.45 μm微孔濾膜對藥液進行濾過，進行滅菌后待用。

1.2.2藥液稀釋方法 取無菌試管10支并分別標號，其中第2～10支無菌試管內加入滅菌蒸餾水10 ml。取滅菌的苗藥狹葉崖爬藤提取液20 ml，第1～2支無菌試管內分別加入10 ml。充分搖勻第2支試管，然后取出混合液10 ml加入第3支試管內。充分搖勻第3支試管，然后取出混合液10 ml加入第4支試管內。通過上述連續稀釋方法至第9支試管，棄掉第9支試管內取出的10 ml混合液。第10支試管再次加入10 ml滅菌蒸餾水作為對照。

1.2.3平板制備方法 取無菌M-H瓊脂900 ml，將其溶化后分別加入10瓶標號的培養瓶內，每瓶90 ml。將第1支含有10 ml 25%苗藥狹葉崖爬藤提取液置入第1瓶培養瓶內，在充分混合后傾注4個平板，每個平板含有瓊脂25 ml，后續平板制備方法同上。第1組平板含苗藥狹葉崖爬藤1∶40，第2組為1∶80，第3組為1∶160，依此類推。

1.2.4培養基藥物濃度計算方法 將50 ml苗藥狹葉崖爬藤提取物按照1∶4比例置于37℃溫箱內進行烘干并稱重，然后得到每1 ml苗藥狹葉崖爬藤提取物的實際重量，并進而得到每1 ml培養基中苗藥狹葉崖爬藤提取物的干重量。根據上述計算方法，第1組苗藥狹葉崖爬藤提取物的干重為9500 μg/ml，第2組為4750 μg/ml，第3組為2370 μg/ml，以此類推。

1.2.5檢測方法 采用多點接種儀分別吸取各種菌液并點種于含不同藥物濃度的瓊脂平板上，然后在35℃環境中培養24 h，并觀察最低抑菌濃度（MIC）。另外，分別統計MIC 50與MIC 90藥物濃度以及濃度累積抑菌百分率。

1.2.6最低抑菌濃度檢測方法 采用M-H瓊脂檢測青霉素以及氨芐西林，并對98株表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度進行檢測。

2 結果

2.1最低抑菌濃度檢測結果 55株MRSE中，對青霉素、氨芐西林的耐藥率分別為100.00%（55/55）、70.91%（39/55）；43株MSSE中，對青霉素、氨芐西林的耐藥率分別為58.14%（25/43）、65.12%（28/43），見表1。

2.2苗藥狹葉崖爬藤抑菌效果分析 苗藥狹葉崖爬藤對MRSE的MIC50以及MIC90分別為286.0 μg/ml、1185.0 μg/ml，對MSSE的MIC50以及MIC90分別為143.0 μg/ml、286.0 μg/ml，見表2。對表皮葡萄球菌濃度累積抑菌率，見表3。

3 討論

目前研究顯示[4-6]，苗藥狹葉崖爬藤地上部分可以分離初10個化合物，分別為8-谷甾醇，棕櫚酸、正二十五烷、胡蘿卜苷、白藜蘆醇、沒食子酸、沒食子酸乙酯、兒茶素、7-氧-沒食子酰基-兒茶素、3，3-二甲氧基鞣花酸-4-氧-葡萄糖苷[7-8]。現代藥理研究已經證實，谷甾醇、白藜蘆醇、沒食子酸、沒食子酸乙酯以及兒茶素等均具有不同程度的抗炎免疫調節作用[9-10]。

本研究對苗藥狹葉崖爬藤的體外抑菌作用進行了實驗研究。通過本研究，能夠為苗藥狹葉崖爬藤的臨床抗菌應用提供理論依據。

綜上所述，MRSE與MMSE對青霉素以及氨芐西林的耐藥性均較高，而苗藥狹葉崖爬藤具有較強的抑菌作用。

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