全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳在地中海貧血診斷篩查中的應(yīng)用

摘要：目的 評(píng)估全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳在地中海貧血診斷篩查的應(yīng)用價(jià)值。方法 應(yīng)用全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀， 對(duì)2177 例在我院住院和門診的患者進(jìn)行血紅蛋白分析；同時(shí)應(yīng)用單管多重PCR 法和RDB/ PCR技術(shù)分別檢測其α，β-地中海貧血基因診斷。結(jié)果 2177例血紅蛋白分析中HbA2<2.5%的653例，占30.00%。HbA2>3.5%的230例，占10.56%。抽取其中HbA2<2.5%的116例、HbA2>3.5%的115例進(jìn)行α，β地中海貧血基因診斷。HbA2<2.5%的116例進(jìn)行α缺失型、中國人常見的三種α非缺失型和中國人常見的17種β-地中海地貧血基因診斷，檢測出94例α-地貧，符合率為81.03%。HbA2>3.5%的115例α缺失型、中國人常見的三種α突變和中國人常見的17種β-地中海貧血基因診斷，檢測出98例β-地貧，16例α并β復(fù)合地貧，符合率為99.13%。結(jié)論 采用毛細(xì)管電泳技術(shù)的血紅蛋白分析與基因分析有良好的符合性， 可用于地中海貧血診斷的篩查。

關(guān)鍵詞：毛細(xì)管血紅蛋白電泳； 地中海貧血； 基因診斷

Abstract：Objective In order to access the application value of Automated Capillary zone Hemoglobin Electrophoresis in Thalassemia screening.Methods Implement the automated capillary Hb electrophoresis apparatus to do Hemoglobin analysis for 2177 specimens in our hospital， which patient age range is from one year old to adult. Besides， implement the single-tube multiplex PCR and RDB/PCR technical to detect and diagnose αβThalassemia genetic respectively in these specimens.Results In 2177 specimens， there are 653 cases of HbA2<2.5%， the proportion is 30%； and the HbA2>3.5% is 230 cases， proportion is 10.56%. Select 116 case of HbA2<2.5% and 115 cased of HbA2>3.5% to αβThalassemia genetic diagnosis. For 116 case of HbA2<2.5%， conduct Thalassemia genetic analysis and detection which is including αdeletion type， three common αnon-deletion types in Chinese， and seventeen types of common βThalassemia in Chinese. And detect out 94 cases of α- Thalassemia， coincidence rate is 81.03%. For 115 cases of HbA2>3.5%， also conduct the same types Thalassemia genetic analysis and detection. The detect result is 98 cases β- Thalassemia and 16 cases αβcomposite Thalassemia， coincidence rate is 99.13%.Conclusion The Hemoglobin analysis and Genetic detect analysis have good coincidence by capillary electrophoresis technique， which can be implement for Thalassemia screening.

Key words：Capillary electrophoresis； Mediterranean anemia；Gene diagnosis

地中海貧血是由于編碼珠蛋白的α或β類珠蛋白基因發(fā)生缺失或點(diǎn)突變，使α或β類珠蛋白鏈缺如或不足所致的貧血，我國南方地區(qū)高發(fā)[1]。目前尚無有效的治療方法，對(duì)攜者做出診斷及產(chǎn)前進(jìn)行篩查，是防止地貧患兒出生，減少本病發(fā)生的唯一有效措施。本研究通過對(duì)比血紅蛋白分析與基因分析檢測結(jié)果，評(píng)估采用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳法血紅蛋白分析對(duì)地中海貧血的診斷應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料 受檢對(duì)象年齡1歲～48歲，其中男871例，女1306例，全部為2012年6 月～2013年7月在本院住院或門診就診患者共2177例，進(jìn)行毛細(xì)管血紅蛋白電泳，對(duì)其中HbA2<2.5%的116例、HbA2>3.5%的115例進(jìn)行α缺失型、中國人常見的三種α非缺失型和中國人常見的17種β-地中海貧血基因診斷。

1.2儀器和試劑 ①血紅蛋白分析：2907全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀及配套試劑、校標(biāo)品、質(zhì)控品（Sebia 公司提供）；②基因分析：地貧基因診斷試劑盒（深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供）。

1.3方法

1.3.1血紅蛋白分析 將EDTA -K2 抗凝靜脈血混勻后直接上機(jī)， 按2907全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀的要求定標(biāo)、質(zhì)控并完成檢測。

1.3.2基因分析 α珠蛋白基因的檢測：采用單管多重PCR（gap-PCR）法檢測東南亞缺失（--SEA）、右缺失（-α3.7） 和左缺失（-α4.2）3 種缺失型[2]。β-地貧基因的檢測：采用 RDB /PCR技術(shù)檢測17種突變類型。

1.3.3評(píng)估內(nèi)容 以基因診斷作為參考方法，評(píng)估血紅蛋白分析在特定閾值下對(duì)地中海貧血診斷的靈敏度與特異度，分析血紅蛋白含量變化與突變類型的相關(guān)性。

2結(jié)果

對(duì)2177例進(jìn)行全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳，見表1。對(duì)其中HbA2<2.5%的116例、HbA2>3.5%的115例進(jìn)行α，β地中海貧血基因診斷，HbA2<2.5%的116例檢出α-地貧94例，符合率為81.03%。HbA2>3.5%的115例檢出β-地貧98例，α并β復(fù)合地貧16例，符合率為99.13%，見表2。

3討論

地中海貧血是華南地區(qū)高發(fā)的單基因遺傳性溶血性疾病，人群攜帶率高，1999年廣西柳州α地貧檢出率為11.19%，β地貧檢出率為6.78%[3]。地貧的實(shí)驗(yàn)室診斷以往主要采用MCV、紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)等方法進(jìn)行篩查，影響因素較多，敏感度和特異性均較低，且部分地貧患（特別是α地貧）MCV和（或）紅細(xì)胞脆性可以正常，是造成地貧基因攜帶者漏診的主要原因， 漏診率達(dá)13.23%[4]。基因分析是地中海貧血診斷的金標(biāo)準(zhǔn)， RDB-PCR 技術(shù)可檢測17種β-地貧基因突變和三種α-非缺失型，采用單管多重PCR（gap-PCR）法檢測東南亞缺失（--SEA）、右缺失（-α3.7）和左缺失（-α4.2）3 種α-缺失型。但檢測條件要求較高， 價(jià)格昂貴， 耗時(shí)繁瑣， 不適用于常規(guī)篩查。而毛細(xì)管電泳技術(shù)是診斷和分離異常血紅蛋白的有效方法，是臨床診斷血紅蛋白分子病，特別是地中海貧血不可缺少的手段[5]。全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳技術(shù)綜合了經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離技術(shù)兩者的優(yōu)點(diǎn)，具有快速、簡便、高效、通量大和自動(dòng)化的特點(diǎn)[5，6]。應(yīng)用全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行血紅蛋白電泳， 發(fā)現(xiàn)其對(duì)HbA2和HbF 分辨率較高。本法既能直接用肉眼觀察比較，得出HbA2是否增高的判斷，又能掃描出HbA2含量，電泳區(qū)帶清晰，掃描定量準(zhǔn)確，可以為地中海貧血的診斷提供重要依據(jù)[7]。

本研究中，以地貧基因診斷作為參考方法，評(píng)價(jià)毛細(xì)管血紅蛋白電泳對(duì)地中海貧血的診斷價(jià)值。臨床上α-地中海貧血常表現(xiàn)為HbA2 含量偏低或正常，輕型β-地中海貧血表現(xiàn)為HbA2 增高、HbF 含量正常， 中間型及重型β-地中海貧血表現(xiàn)為HbF 明顯增高、HbA 2正?；蛟龈遊8]。因此本實(shí)驗(yàn)選取毛細(xì)管血紅蛋白電泳后HbA2<2.5%的116例標(biāo)本作地貧基因診斷檢測出94例α-地貧，符合率為81.03%。HbA2>3.5%的115例測出98例β-地貧，16例α并β復(fù)合地貧，符合率為99.13%，具有較高的符合率。

綜上所述，應(yīng)用全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳技術(shù)是一種靈敏度、特異性高、重復(fù)好的分析工具，具有操作簡便，通量大的優(yōu)點(diǎn)。全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳分析系統(tǒng)的引進(jìn)將為我國地中海貧血診斷提供更精確的篩查。

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