HPLC測定益坤寧片中阿魏酸的含量

摘要：目的 建立益坤寧片中阿魏酸含量測定的方法。方法 采用高效液相色譜法， Phenomenex色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸（20∶80）；流速1.0 ml/min，柱溫30℃，檢測波長為322 nm。結果 阿魏酸在5.18～103.6 μg/ml范圍內，呈良好的線性關系（r=0.9993），回收率為97.6%，RSD為1.2%。結論 本方法快速、準確，方法的穩(wěn)定性、重復性良好，可作為益坤寧片質量分析控制方法。

關鍵詞：益坤寧片；阿魏酸；高效液相色譜法

Determination the Content of Ferulic Acid in Yikunning Tablets by HPLC

CHEN Mei-ling，LIU Qin，ZHANG Qian，ZHANG Juan，WU Cui，SUN Yan-li，GAO Xiao-yan

（Jiangsu Kanion Pharmaceutical Limited by Share Ltd，Lianyungang 222047，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To establish yi kun ning of ferulic acid content determination method . Methods Using high performance liquid chromatography （HPLC） method， Phenomenex chromatographic column （250 mm x 4.6 mm， 5μm）， mobile phase of acetonitrile - 0.1% phosphoric （20：80）， Flow rate 1.0 ml min - 1， column temperature 30 ℃， detection wavelength of 322 nm. Results Puerarin in sample quantity is 5.18 μg/ml～103.6μg/ml range ， Show a good linear relationship （r = 0.9993），The recovery was 97.6%， RSD was 1.2% . Conclusion This method is rapid and accurate. The stability of the method， good repeatability，and can be used for yi kun ning slice quality control are analyzed.

Key words：Yi kun ning tablets；Ferulic acid ；HPLC

益坤寧片由當歸、熟地黃、白芍、川芎、益母草、香附、延胡索、三棱、桂皮、橙皮十味中藥經提取精制而成，具有補氣養(yǎng)血、調經止痛的功效用于婦女血虛氣滯，月經不調，經前、經后腹痛腰痛，婦女更年期綜合癥等[1-2]。阿魏酸是當歸、川芎藥材中有效成分之一，也具有多方面的生物活性[3]，許多制劑常選阿魏酸作為其質量控制指標，所以為了更好的保證藥品質量，本文采用高效液相法對益坤寧片中阿魏酸含量進行研究。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100 高效液相色譜儀， G1314A VWD紫外檢測器，所用軟件為ChemStation色譜工作站。Milli-Q Advantage A10 超純水機，Satorius ME5電子分析天平，JKQ-250DC型數(shù)控超聲清洗器。

1.2試藥 益坤寧片（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格每片裝0.37 g，批號130801、131201、140501、150101）；阿魏酸對照品，購自中國食品藥品檢定研究院；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法學考察[4]與結果

2.1色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（250×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）[3]；流速：1.0 ml/min；檢測波長：322 nm；柱溫：30℃；進樣體積：10 μl。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品2.072 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得，濃度為20.72 μg/ml。

2.3供試品溶液的制備[5] 取本品20片，稱定重量，研細，精密稱定細粉0.5 g，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 KHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

3 線性關系考察

精密稱取阿魏酸對照品10.36 mg，制成濃度為103.6 μg/ml作為儲備液，將儲備液分別稀釋成濃度為5.18 μg/ml、10.36 μg/ml、25.90 μg/ml、31.08 μg/ml、36.26 μg/ml、51.8 μg/ml、103.6 μg/ml、的溶液，進樣10 μl，以進樣質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）繪制標準曲線，計算得回歸方程：Y=35.4757X+0.7569，r=0.9993，結果表明阿魏酸在5.18～103.6 μg/ml范圍內線性關系良好。

4 精密度試驗

取阿魏酸對照品溶液重復進樣6次，計算其峰面積RSD%為0.62%，結果表明精密度良好。

5 重復性試驗

取樣品，按2.3制備供試品溶液方法制備，平行制備6份，測定，結果阿魏酸的平均含量為0.39 mg/g，RSD=1.0%，試驗結果表明該方法重復性良好。

6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，室溫放置，按上述方法分別在第0、2、5、8、12、24 h測定6次，結果阿魏酸峰面積的RSD值為0.5%，表明該溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

7 回收率試驗

取已知含量的樣品（阿魏酸含量： 0.39mg/g）九份，每份0.5g，分別按80%、100%和120%加入對照品，按制備樣品溶液的方法制備，依法測定，計算加樣回收率

8 專屬性驗證

陰性溶液的制備：取按處方比例稱取除當歸、川芎外的其他藥材，按益坤寧片的制備工藝及供試品制備方法制成陰性對照溶液。取對照品溶液，陰性對照品溶液與供試品溶液共同進高效液相進行測定.

9 樣品測定

取4批樣品，按2.3制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算

10 討論

10.1檢測過程中通過參考文獻及對照品溶液的全波長掃描，對檢測波長進行了選擇，以溶劑為空白在200～400 nm范圍內繪制吸收光譜圖。實驗表明，阿魏酸在322 nm具最大吸收，且用322 nm為檢測波長時，阿魏酸檢測靈敏度高，雜質峰較少，基線較平穩(wěn)，雜質均不干擾測定，故選擇322 nm為其檢測波長。

10.2提取方法的考察 采用正交試驗法優(yōu)化提取方法，考察提取溶劑、提取時間、提取方法及溶劑用量，4個因素對提取結果的影響。最終確定提取方案為：25 ml的稀乙醇，超聲處理30 min[1]。

參考文獻：

[1]張秀麗.HPLC法測定川芎中阿魏酸的含量[J].中國藥事，2009，23（5）：469-470.

[2]林斯民，林翠勤，林裕平，等.HPLC法測定當歸片中阿魏酸的含量[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2009，7（2）：119-120.

[3]梁娜，孫少平，羅躍娥，等.阿魏酸的研究進展[J].黑龍江中醫(yī)藥，2009，（3）：39-40.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：40-41.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：133-134. 編輯/翟辰萬