川東北地區表面健康人群抗線粒體M2抗體參考范圍調查

摘要：目的 建立適合川東北地區表面健康人群抗線粒體M2抗體（AMA-M2）的參考范圍。方法 體格檢查和相關的實驗室檢查均無異常的表面健康人群共420例，按性別和年齡分組，采用Alegria全自動酶聯免疫分析儀和配套的檢測試劑以及檢測參數檢測血清AMA-M2濃度。結果 AMA-M2檢測系統的批內和天間的檢測精密度良好，其他性能參數符合臨床使用要求。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70～4.50）IU/mL，明顯高于男性組的1.85（1.60-2.70）IU/mL（Z=-2.804，P=0.005）；而<50歲年齡組和≥50歲年齡組血清AMA-M2檢測結果之間無統計學差異（Z=-0.317，P=0.751）。血清AMA-M2參考范圍在女性組為0～4.45IU/mL，男性組為0～2.50IU/mL。結論 AMA-M2參考范圍應按性別分別設定，建立一個適合本地區人群的AMA-M2參考范圍具有重要的臨床應用價值。

關鍵詞：抗線粒體M2抗體；參考范圍；表面健康人群

原發性膽汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis，PBC）是一種以肝內膽小管進行性非化膿性炎癥為特征的慢性膽汁淤積性肝臟疾病，隨著疾病的進程逐漸出現肝臟纖維化，并最終導致肝硬化和肝衰竭[1，2]。目前，在全球，PBC的總體發病率為6.7～400/100萬，主要好發于中年女性，其男女發病比例約為1：9[3，4]?？咕€粒體M2抗體（AMA-M2）被認為是PBC診斷的最特異的標志物，存在于90%以上的PBC患者血清中[2]。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1參加健康體檢者共420例，年齡23～73歲，平均年齡45歲；其中男性246例，女性174例。經檢查，均無明顯心血管、肝、腎疾病，無結締組織病病史的健康人群。實驗室檢測結果：AST<40 U/L，ALT<40 U/L，ALP<110 U/L，γ-GT<50 U/L。

1.1.2標本采集 符合上述要求的人員安靜狀態下空腹采集靜脈血3mL，2h內以離心速度3800rpm/min離心5min后分離得血清。

1.2儀器和試劑 檢測儀器為德國Orgentec公司生產的Alegria全自動酶聯免疫分析儀，所有配套AMA-M2檢測試劑盒均購自德國Orgentec公司。

1.3方法

1.3.1用含0.2%吐溫20的PBS對采集的標本進行40稀釋后，采用間接免疫熒光法對稀釋標本進行檢測。

1.3.2血清AMA-M2檢測 按儀器SOP對待檢標本上機檢測。各項檢測參數均符合生產廠商要求。

1.3.3不精密度實驗 ①選擇低中高三個不同濃度血清在1天內分別連續測定20次，了解批內不精密度，用變異系數（CV）表示；②選擇不同濃度血清5份，各將其分為20份，并置于-80℃低溫冰箱中。每天各取1份置于室溫中，待完全溶解后上機檢測，連續檢測20d，了解天間不精密度，并粗略估計該檢測系統CV為10%時的AMA-M2最低檢測限。

1.4統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件對數據進行分析。由于數據呈偏態分布，所以采用中位數（范圍）表示；不同性別以及不同性別各年齡組織之間比較采用兩組獨立樣本非參數檢驗（Mann-Whitney U檢驗），P<0.05為差異有統計學意義。參考范圍的建立采用百分位數法。

2結果

2.1間接免疫熒光法檢測結果 420例標本運用間接免疫熒光法檢測，其結果均為1：40陰性。

2.2不精密度檢測

2.2.1批內不精密度 AMA-M2高濃度（125.90 IU/mL）、中濃度（22.30 IU/mL）和低濃度（4.70 IU/mL）的批內不精密度的CV分別為3.92%、4.86%和6.83%。

2.2.2天間不精密度 AMA-M2濃度分別為1.94 IU/mL、5.10 IU/mL、22.46 IU/mL、82.20 IU/mL和123.96 IU/mL時，天間不精密度的CV分別為11.87%、7.63%、4.99%、4.56%和4.41%（圖1）。由圖1可見，當天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯免疫分析儀在本實驗室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00IU/mL。

2.3不同性別表面健康人群血清AMA-M2水平 對246例男性和174例女性血清AMA-M2檢測數據進行正態性檢驗，表明兩組數據均呈偏態分布。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70-4.50）IU/mL，明顯高于男性組的1.85（1.60-2.70）IU/mL（Z=-2.804，P=0.005），見表1。

2.4不同年齡表面健康人群血清AMA-M2水平 對302例<50歲人群和118例≥50歲人群血清AMA-M2檢測數據進行正態性檢驗，表明兩組數據均呈偏態分布。表面健康人群<50歲年齡組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70～4.50）IU/mL，與≥50歲年齡組的1.90（1.60～2.10）IU/mL比較，差異無統計學意義（Z=-0.317，P=0.751），見表2。

2.5表面健康人群血清AMA-M2參考范圍 表面健康人群血清AMA-M2含量與性別相關，與年齡無關，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，其95%表面健康人群血清AMA-M2的參考范圍分別為男性：0～2.50 IU/mL，女性：0～4.45 IU/mL。

3討論

美國肝病學會（AASLD）和歐洲肝病學會（EASL）均將AMA-M2的存在作為PBC的3個診斷標準之一[5]。許多的研究也同時表明，AMA-M2能在PBC發病前10年的無癥狀個體中出現。Metcalf等對無癥狀的血清AMA-M2陽性個體進行11～24年的隨訪，發現有76%的人群最終出現了PBC的癥狀[6]。

在本次實驗中，我們首先對標本進行1：40稀釋后進行間接免疫熒光檢測，主要基于兩方面的考慮：①EASL明確提出AMA-M2的熒光強度>1：40是PBC的診斷標準之一；②血清AMA-M2可早于臨床癥狀出現。通過檢測420份標本，其間接免疫熒光結果均為1：40陰性，同時所有標本ALP均小于110 U/L，從而最大程度地排除了實驗對象中可能存在無癥狀PBC個體的可能性，保證了實驗對象的可靠性。

本次實驗檢測結果提示，血清AMA-M2含量與性別相關，與年齡無關，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，并且各組數據均呈偏態分布，同時對于血清AMA-M2含量來說，其升高才具有臨床意義，因此我們在進行參考范圍的建立時，采用第95百分位數作為95%表面健康人群的參考上限。對Alegria檢測系統進行批內和天間的精密度檢測，試驗結果表明，Alegria全自動酶聯免疫分析儀檢測血清AMA-M2具有良好的重復性，當天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯免疫分析儀在本實驗室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00 IU/mL，該結果均低于通過試驗得出的男性和女性的參考范圍上限，表明該檢測系統檢測血清AMA-M2具有較好的靈敏度，完全符合臨床應用要求。

綜上所述，AMA-M2對于PBC具有很高的診斷價值，進行血清AMA-M2檢測也有利于PBC的早期發現和干預。因此對體檢人群進行該項目的開展具有較高的應用價值。另外，不同實驗室由于實驗方法和實驗條件的差異，不同地區人群生活環境和生活習慣的差異，將有必要建立本實驗室本地區表面健康人群的參考范圍。

參考文獻：

[1]Saito H，Takahashi A，Abe K，et al.Autoantibodies by line immunoassay in patients with primary biliary cirrhosis[J].Fukushima J Med Sci，2012，58（2）：107-156.

[2]Mantaka A，Koulentaki M，Chlouverakis G，et al.Primary biliary cirrhosis in a genetically homogeneous population：disease associations and familial occurrence rates[J].BMC Gastroenterol，2012，12：110.

[3]Smyk DS，Bogdanos DP，Mytilinaiou MG，et al.Rheumatoid arthritis and primary biliary cirrhosis：cause，consequence，or coincidence[J].Arthritis，2012：391567.

[4]Smyk DS，Rigopoulou EI，Pares A，et al.Sex differences associated with primary biliary cirrhosis[J].Clin Dev Immunol，2012，2012：610504.

[5]Lindor KD，Gershwin ME，Poupon R，et al.American Association for study of Liver Disease.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology，2009，50：291-308.

[6]Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.Natural history of early primary biliary cirrhosis[J].Lancet，1996，348（9039）：1399-1402.

編輯/丁一