雄激素受體在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系

陳其玖 丁婷婷 鄭錚 王國棟 劉奇龍 鄭洪

(1.遵義醫(yī)學院2012級大學生創(chuàng)新團隊，貴州 遵義 563000；2.四川大學口腔醫(yī)學院2012級本科生，四川 成都 610000；3.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563000)

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雄激素受體在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系

陳其玖1丁婷婷1鄭錚2王國棟1劉奇龍1鄭洪3△

(1.遵義醫(yī)學院2012級大學生創(chuàng)新團隊，貴州 遵義 563000；2.四川大學口腔醫(yī)學院2012級本科生，四川 成都 610000；3.遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563000)

目的 探討乳腺浸潤性導管癌(IDC)中雄激素受體(AR)的表達狀態(tài)與臨床病理參數(shù)及預后的關系。方法應用免疫組織化學EnVision法和圖像分析技術檢測乳腺 IDC組織芯片共 134例中 AR的表達情況和平均光密度值，并分析其與發(fā)病年齡、腫瘤大小、病理組織學分級、淋巴結轉移、TNM分期的相關性。結合隨訪情況用 Kaplan-Meier生存曲線分析 AR和生存期的關系。結果(1)在乳腺IDC中 AR陽性的表達率為 61.94%(83/134)，組織學分級Ⅰ級為 100%(3/3)、Ⅱ級為 71.76%(61/85)、Ⅲ級為 38.10%(16/42)，其 MOD值分別為 0.38、0.26和 0.12。AR的表達與組織學分級呈負相關(P<0.05)，即 AR表達量越高，組織學分級越低；與年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移及 TNM分期無相關性(P>0.05)。(2)Kaplan-Meier生存曲線示乳腺 IDC中 AR陽性患者生存期較 AR陰性患者生存期長(P<0.05)。結論(1)AR表達可反映乳腺 IDC的分級，AR表達越高，其組織學分級越低。(2)乳腺 IDC AR陽性者生存期長，預后好。

乳腺浸潤性導管癌； 雄激素受體； 免疫組織化學； 臨床病理特征； 預后

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，乳腺癌患者雌激素受體(ER)與孕激素受體(PR)水平的檢測已成為常規(guī)檢測項目，結合乳腺癌的臨床病理指標可評估乳腺癌的生物學行為和預后且可選擇適當?shù)膬确置谥委煼绞剑瑥亩岣吲R床治療效果，延長患者的生存期。事實上，乳腺癌具有異質性的特點，很難應用傳統(tǒng)的組織學特點及 ER、PR表達狀態(tài)來評估所有的乳腺癌，因此一些新的生物學標記受到關注，雄激素受體(AR)就是其中之一[1-2]。臨床上雄激素受體檢測相對運用較少，本文采用臨床病理指標、隨訪資料齊全且組織樣本實驗條件完全一致的乳腺浸潤性導管癌(IDC)組織芯片，應用免疫組織化學 EnVision染色方法檢測 AR的表達情況，進一步探討雄激素受體與乳腺癌發(fā)生發(fā)展及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 134例IDC組織芯片，購于上海芯超生物科技有限公司，編號HBre-Duc140Sur-02，隨訪 5.6～9.9年。未經(jīng)過放療、化療。試劑濃縮型鼠抗人雄激素受體(AR)單克隆抗體購自廣州深達生物制品技術有限公司，工作濃度 1∶100。

1.2 方法 將134例浸潤性導管癌組織芯片進行免疫組化EnVision二步法染色。具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行，DAB顯色，蘇木精復染，脫水，透明封固，鏡下觀察。

1.3 結果判定 采用半定量分析法并按標準進行結果判定[3]。(1)乳腺癌 AR陽性的標準：蛋白表達定位于細胞核，無著色或<1%著色為陰性、≥1%著色為陽性。(2)AR的平均光密度值評定：將每例組織的染色結果在鏡下分為4個視野并依次截取圖像，應用美國 Media Cybemetics公司開發(fā)的 Image-Pro Plus Version 6.0(IPP6.0)分析圖像平均光密度值(MOD)。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，各組間AR表達的比較采用χ2檢驗，關聯(lián)分析采用Spearman相關分析；AR與生存期的關系采用Kaplan-Meier生存曲線，用LogRank(Mantel-Cox)和Breslow兩種檢驗方法進行統(tǒng)計學處理。

2 結 果

2.1 AR在乳腺癌組織中的表達 AR陽性信號呈淺棕色至深棕色或棕黃色顆粒位于細胞核(圖 1～3)。134例 IDC中 AR陽性表達率為 61.94%(83/134)，病理組織學分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級的 AR陽性表達率分別為 100%、71.76%、38.10%，經(jīng)統(tǒng)計分析，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。由此可看出，隨著癌組織分化程度降低，AR的表達率逐漸降低。AR的表達強度在組織學分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中的 MOD值分別為 0.38、0.26和 0.12，經(jīng)統(tǒng)計分析，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。由此可見，隨著組織學分級升高，AR的表達含量逐漸減弱，即腫瘤分化程度越高，其 AR的表達含量越高。

2.2 乳腺IDC中AR的陽性表達率與臨床病理特征的關系 乳腺IDC患者年齡 33～88歲，平均 59歲，其中≤50歲 AR陽性率為 56.41%(22/39)，>50歲 AR陽性率為 64.21(61/95)，經(jīng)χ2檢驗，二者無差異(P>0.05)。MOD值分別為 0.21和 0.22，經(jīng)相關性分析，AR表達含量與年齡無相關性(P>0.05)。腫瘤直徑≤2 cm的患者AR陽性率為 72.97%(27/37)，直徑2～5 cm AR陽性率為 57.89%(44/76)，直徑≥5 cm AR陽性率為63.16%(12/19)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MOD值分別為 0.25、0.21和0.23，經(jīng)相關性分析，AR表達含量與腫瘤大小無相關性(P>0.05)。

134例乳腺 IDC中，有 129例有淋巴結轉移與否的資料，其中發(fā)生淋巴結轉移患者的 AR陽性率為 60.94%(39/64)，未發(fā)生淋巴結轉移患者的 AR陽性率為 63.08%(41/65)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MOD值分別為0.22和 0.22，經(jīng)相關性分析，AR表達含量與淋巴結轉移率無相關性(P>0.05)。TNM分期為Ⅰ期的AR陽性率為78.26%(18/23)，Ⅱ期的AR陽性率為61.33%(46/75)，Ⅲ期的 AR陽性率為 57.58%(19/33)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MOD值分別為 0.26、0.22和0.22，經(jīng)相關性分析，AR表達含量與 TNM分期無相關性(P>0.05)。見表1。

表1 AR表達及其與IDC臨床病理特征的關系

2.3 134例乳腺IDC中AR陽性表達和AR陰性表達的生存期 134例IDC中，死亡40例，其中19例呈AR陽性表達，21例呈AR陰性表達。存活94例，其中64例呈AR陽性表達，30例呈AR陰性表達。5年生存率為74.63%,其中AR陽性的5年生存率為81.93%,而 AR陰性的為62.75%，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明AR陽性的乳腺IDC患者的5年生存率高于其AR陰性者。根據(jù)Kaplan-Meier生存曲線，結果顯示在134例IDC中，AR表達陽性患者的生存期與其 AR表達陰性患者間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖4，說明乳腺浸潤性導管癌中 AR表達陽性的患者較AR表達陰性的患者生存期長，預后好。在 88例 IDCⅠ～Ⅱ級中，AR表達陽性患者的生存期與其AR表達陰性患者間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖5；而在42例IDCⅢ級中，AR表達陽性患者的生存期與其AR表達陰性患者間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見圖6。

3 討 論

近年采用免疫組織化學證實，人乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中均存在AR異常分布，AR陽性表達率約為40%～80%，與ER、PR表達相當甚至更高。Hu等[4]研究顯示乳腺癌中 AR陽性表達率為77%，ER陰性乳腺癌中為65%，而在三陰性乳腺癌中則超過 50%。Yu等[5]研究表明，335例乳腺癌患者的AR陽性表達率為 72.5%，其中激素受體陰性者為 53.2%。由此可見上述結果不盡一致，其原因可能是檢查方法、技術條件及陽性判斷標準不一致所致。盡管如此，在乳腺IDC中AR表達是一個常見的特征。本研究通過乳腺癌組織芯片資料顯示，在 134例 IDC中，AR陽性率為 61.94%;隨著 IDC分級的增高，AR陽性表達率逐漸下降，表達強度也逐漸下降。說明分化高、惡性程度低的 IDC，其 AR表達高；分化差、惡性程度高的 IDC，其 AR表達低或缺失。Gasparini等[6]結果顯示，與ER陽性的乳腺癌患者比較，三陰性乳腺癌患者AR表達更低，同時AR的表達與腫瘤分級呈負相關。可見 AR的表達可反映 IDC的分化程度和惡性程度，可作為臨床判斷預后的又一指標。

研究[7]表明，AR表達陽性率越高，組織學分級越低，腫瘤直徑越小，淋巴結受累數(shù)目越少，且與 ER、PR陽性表達呈正相關，而大部分研究未發(fā)現(xiàn) AR表達與年齡、臨床分期等臨床病理特征有關。本研究表明，在乳腺 IDC中 AR的表達與年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移及 TNM分期無關，而與 IDC的組織學分級有關。有研究顯示 AR的表達與年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級以及 HER-2無關，而與ER和PR有關[5]；而Ogawa等[8]應用免疫組化法檢測227例原發(fā)性乳腺癌中 AR的表達，發(fā)現(xiàn)越小的腫瘤AR陽性率越高。部分研究結果的不一致，如AR表達是否與 IDC的腫瘤大小、淋巴結轉移及 TNM分期有關，有待多中心性、大樣本量的進一步研究。

雖然AR在乳腺癌組織中有較高的表達，但其在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用一直存在爭議。有流行病學研究[9]認為，雄激素是乳腺癌發(fā)病的相關因素，在參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展中，雄激素一方面能直接與雌激素協(xié)同刺激乳腺癌細胞的生長和增生；另一方面在 ER/PR陰性的乳腺癌中則通過間接地轉化為雌激素的途徑而發(fā)揮其作用[10]。Loibl等[11]研究顯示AR陽性患者的無病生存期(DFS)及總生存期(OS)比AR陰性的乳腺癌患者更長，在三陰性乳腺癌患者中尤為明顯。Castellano等[12]發(fā)現(xiàn)在938例ER免疫組化陽性的乳腺癌患者中，AR陽性者的復發(fā)時間(TTR)及疾病特異性生存期(DSS)更長。因此認為AR的表達與乳腺癌預后相關，AR陽性的乳腺癌患者預后更好,如DFS及OS。因此，AR可作為乳腺癌預后的指標之一。

一項分析AR表達與488例乳腺癌患者預后關系的研究發(fā)現(xiàn)，AR陽性患者5年生存率較高(71.7% )，其無癥狀生存期約 4.08年，均優(yōu)于 AR陰性患者的50.7%和 3.02年;局部復發(fā)率為22.6%，亦低于AR陰性者的 52.2%[13]。我們的研究結果顯示，乳腺IDC的5年生存率為74.63%,其中AR陽性的5年生存率為81.93%,而AR陰性的為62.75%，AR陽性的乳腺 IDC患者的5年生存率高于AR陰性者。根據(jù) Kaplan-Meier生存曲線可得出乳腺IDC中 AR表達陽性的患者較AR表達陰性的患者生存期長，預后好。進一步分析發(fā)現(xiàn)在 IDCⅠ～Ⅱ級中，AR表達陽性的患者較 AR表達陰性的患者生存期長；而在 IDCⅢ級中，AR表達陽性的患者與 AR表達陰性的患者生存期無差別。這可能的原因是乳腺 IDCⅢ級分化差、惡性程度高、AR表達低所致。Peters等[14]認為 AR是一個獨立的預后因素，低水平的 AR使癌癥相關死亡的風險增加 4.6倍。這可能機制是 AR通過結合部分的 ERE，可以防止激活靶基因介導的17B-雌二醇對乳腺癌細胞的刺激作用；同時雄激素對乳腺癌細胞的抑制作用不僅僅是通過雌激素水平及其作用的下降，有研究[15]顯示雄激素可通過 AR直接抑制腫瘤細胞的生長。因此AR的檢測將有助于細化乳腺癌的分子分型,并有可能成為新的治療靶點。

總之，目前研究提示乳腺癌 AR陽性表達通常與患者生存期有關；與臨床病理特征的關系有待進一步明確。AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用尚需深入研究；但 AR的測定對評估乳腺癌的生物學特性和預后判斷有重要意義。

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Relationship with the clinicopathologic characteristics and prognosis and its expression of androgen receptor in breast invasive ductal carcinoma

ChenQijiu1,DingTintin1,ZhengZheng2,WangGuodong1,LiuQilong1,ZhengHong3.

1.Grade2012CollegeStudentsInnovationTeamofZunyiMedicalCollege.Zunyi563000,Guizhou，China. 2.WestChinaCollegeofStomatology,SichuanUniversity.Chengdu610000,Sichuan,China. 3.DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege,Zunyi563000,Guizhou，China.

Objective To investigate the relationship with the clinicopathologic characteristics and prognosis and its expression of androgen receptor in breast invasive ductal carcinoma (IDC).Methods Immunohistochemical staining EnVision and image analysis were used to detect the expression and the average light density of AR in 134 cases of breast IDC tissuemicroarray. Clinicopathologic features and follow-up data were analyzed by Kaplan-Meier method and log-rank test. Results The positive rate of AR was 61.94% (83/134) in IDC. Among the histologic grade Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ, the positive expression rate of AR was respectively 100%, 71.76% and 38.10%, and MOD was respectively 0.38, 0.26 and 0.15. The expression of AR was negatively correlated with histologic grade (P<0.05), the higher the AR expression was the lower the histological grade was. But the expression of AR were not correlated with age, tumor size, lymph node and TNM stage (P>0.05). Kaplan-Meier survival curve showed that the overall survival of patients with AR positive breast IDC were longer than that of AR negative breast IDC patients which there were statistical significantly differences (P<0.05). Conclusion The higher the expression of AR is, the lower histological grade is in breast IDC patients. Breast IDC patients with AR positive expression has the better prognosis than that of AR negative expression.

Breast invasive ductal carcinoma； Androgen receptor； Immunohistochemistry； Clinicopathologic characteristics； Prognosis

貴州省科技廳聯(lián)合基金[黔科合 LH字(2015)7455號；貴州省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(2014)10661017

R737.9

A

1000-744X(2016)10-1015-04

2016-05-14)

△通信作者，E-mail:zhenghonghq@hotmail.com