從神經肽類相關物質中的實驗研究探究臟腑相關的理論內涵

溫 蕾

(北京中醫藥大學,北京,100029)

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從神經肽類相關物質中的實驗研究探究臟腑相關的理論內涵

溫 蕾

(北京中醫藥大學,北京,100029)

目的:以中醫臟腑相關理論為指導思想,通過建立肺病動物模型與腸病動物的模型,分別選取2個不同時間點(8 d、16 d)觀察12類不同的組織中相關活性物質SP、VIP、iNOS、CGRP的表達與關聯,探求臟腑相關的病理實質。方法:本實驗采用2批健康雌性SD大鼠,每只大鼠體重在110～120 g之間,每批35只。隨機將每批的35只大鼠分為5組,均為正常組、限食組、限水組、高氧組和低氧組,測定肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結腸、直腸中CGRP、iNOS、SP和VIP等物質的含量的變化來觀察各個臟腑在神經肽相關物質的相關聯系。結果:在CGRP這個指標有關聯的組織有:肺和心臟(8 d)、肺和空腸(16 d)、腎和膀胱(8 d)、脾與肝(16 d)、心與回腸(16 d);在iNOS這個指標有關聯的組織有:肺與膀胱(16 d)、心與直腸(16 d);在SP這個指標有關聯的組織有:肺與肝(8 d和16 d)、肺與回腸、結腸(8 d)、脾與胃(8 d)、心臟和回腸(8 d);在VIP這個指標有關聯的組織有:肺和肝(8 d)、心臟和結腸(8 d和16 d)。結論:通過論證肺與大腸、肝臟、膀胱、心臟的關系,豐富了“肺與大腸相表里”的觀點,對臨床治療有指導意義。此外,通過CGRP、SP、iNOS、VIP等指標發現心臟與腸道之間也有密切聯系。

神經肽類物質;臟腑相關

人體是一個由臟腑、經絡和形體官竅共同組成的整體,各臟腑、經絡和形體官竅在生理上是相互制約、依存和相互為用,臟腑間通過經絡聯系、氣機升降和氣血互助保持聯系,使得各個臟腑構成了一個和諧統一的整體,這也體現了中醫學的整體觀和辨證論治的特的特色,體現了中醫學的優勢和特色[1-2]。在一些比較難治愈的疾病中,根據臟腑相關理論及臟腑傳變的規律制定不同的治療方案比單純治療病變的部位效果更佳顯著,而且更具有“治未病”的前瞻性。與現代醫學相比,中醫運用臟腑相關理論指導臨床治療疾病具有不可替代的優勢。

本實驗選取了肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結腸、直腸12類臟器包括了大部分人體的五臟六腑,而且包含了消化系統、呼吸系統、泌尿系統和循環系統等幾大人體系統,分析這些臟器之間的關系,從更全面更深層次的角度進行研究分析。針對于研究比較深入且應用于臨床較多的“肺與大腸相表里”理論,本課題為了探究肺與大腸關系的特殊性,故在本次實驗設計里將分析肺與各個臟器的關系以便詮釋為什么只是肺與大腸相表里而不是肺與別的臟器相表里。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雌性SD大鼠,體重在110～120 g之間,共45只,由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,動物許可證編號:SCXK(京)2012～0001。

1.2 設備試劑 主設計的代謝籠式可變氧飼養箱,由凌云博際(北京)科技有限公司代為加工生產);測氧儀(北京精微恒氧技術開發中心);實驗用瓶裝氧氣與氮氣氣體由北京朝紅平氣體有限公司提供;LIBROREB-280型電子天平(日本Shimadzu公司);低溫高速離心機(美國BECKMAN公司);ELISA試劑盒(酶聯免疫試劑盒,北京瑞格博科技發展有限公司提供);10%水合氯醛,0.90%生理鹽水,明膠海綿等。

1.3 實驗方法

1.3.1 造模前準備 所有大鼠均統一飼養,自由飲水和進食,飼養7 d后熟悉實驗室環境后開始造模。

1.3.2 造模方法 隨機將2批健康雌性SD大鼠按體重分為若干區組,然后再分別將2批中每個體重范圍的大鼠隨機分為5組。分別為限食組、限水組、高氧組、低氧組、正常組,每組7只。1)正常組大鼠不做任何處理,正常飲水和進食,放置在代謝籠中單籠飼養。7 d后取材。2)高氧組大鼠的制作：隨機抓取9只雌性SD大鼠放置在自主設計的可變氧飼養箱中飼養,飼養箱的兩側各留一個進氣孔和一個排氣孔,用數字式測氧儀檢測箱內氧濃度,以10 L/min輸入氧氣,當氧氣濃度達到40%后,持續輸入氮氣1～2 L/min使氧濃度維持在(40%±3%)。給予8 h/d高氧刺激。大鼠不限食水,溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。3)低氧組大鼠的制作：隨機抓取9只雌性SD大鼠大鼠放置在自主設計的可變氧飼養箱中飼養,飼養箱的兩側各留一個進氣孔和一個排氣孔,用數字式測氧儀檢測箱內氧濃度,以10 L/min輸入氧氣,當氧氣濃度達到10%后,持續輸入氮氣1～2 L/min,使氧濃度維持在(10%±1%)。給予8 h/d低氧刺激。大鼠不限食水。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。4)限食組大鼠的制作：隨機抓取9只雌性SD大鼠放置在代謝籠中單籠飼養,連續7 d測量其各自正常的進食量,之后按照每日平均進食量的一半給予飼料,飲水量不限。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。5)限水組大鼠的制作：隨機抓取9只雌性SD大鼠放置在代謝籠中單籠飼養,連續7 d測量其各自正常的飲水量,之后按照每日平均飲水量的一半給予飲水,進食量不變。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。

1.3.3 動物取材 大鼠經過16 d后2次造模取材:整個大鼠取材均在無菌紗布上進行,醫用剪子鑷子均經過蒸汽高溫消毒,腹腔麻醉大鼠,每100 g體重注射3 mL麻藥(10%水合氯醛),鼠尾疼痛反射消失后,將大鼠仰臥位固定于鼠板上,打開腹部,腹主動脈取血后,迅速剪取鼠板上,打開腹部,腹主動脈取血后,迅速打開胸部剪取肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結腸、直腸組織,生理鹽水洗滌后,置于液氮罐中,后放置到經過生理鹽水洗滌后,置于液氮罐中后放置-40 ℃冰箱保存。CGRP、iNOS、SP和VIP等物質均用ELISA試劑盒(酶聯免疫試劑盒)進行檢測。

1.4 統計學方法 采用直線相關分析,計算相關系數r,研究不同部位指標的相關性。以P<0.05有統計學意義。

表1 肺與其他組織之間的CGRP相關性分析表

2 結果

2.1 CGRP指標相關性分析 結果證明了在CGRP這個指標上,肺和心臟在8 d相關、肺和空腸在16 d相關。見表1。腎和膀胱在8 d相關、脾與肝在16 d相關、心與回腸在16 d相關。見表2。

表2 其他組織之間的CGRP相關性分析表

2.2 iNOS指標相關性分析 結果證明在iNOS這個指標上肺與膀胱在16 d相關。見表3。心與直腸在16 d相關。見表4。

2.3 SP指標相關性分析 結果表明在SP這個指標上肺與肝在8 d和16 d都有關、肺與回腸、結腸在8 d都有關。見表5。脾與胃在8 d相關、心臟和回腸在8 d相關。見表6。

表3 肺與其他組織之間的iNOS相關性分析表

表4 其他組織之間的iNOS相關性分析表

2.4 VIP指標相關性分析 結果表明在VIP這個指標上肺和肝在8 d相關。見表7。心臟和結腸在8 d和16 d相關。見表8。

表5 肺與其他組織之間的SP相關性分析表

表6 其他組織之間的SP相關性分析表

表7 肺與其他組織之間的VIP相關性分析表

表8 其他組織之間的VIP相關性分析表

3 討論

臟腑間的關系有臟與臟之間的關系、六腑之間的關系和五臟六腑之間的關系;臟腑之間的傳病有臟與臟之間的傳變、臟與腑之間的傳病以及腑與腑之間的[3]。臟與臟之間的傳變包含了母子傳變和乘侮傳變:母子傳變又叫做“間臟傳”,包括“母病及子”和“子病及母”,如腎屬水,肝屬木,水能生木,腎為母臟,肝為子臟。腎病及肝,就是“母病及子”。臨床上的“水不涵木”,因為腎水不足不能涵養肝木,從而引起肝陽上亢的癥狀[4]。肝屬木,心屬火,木能生火,所以肝為母臟,心為子臟,心病及肝即是“子病及母”。臨床上的肝血虛和肝火旺之證皆由心血虛或是心火旺而導致肝也出現相應的癥狀。乘侮傳病又叫做“不間臟”傳變,包括“相乘”與“相侮”,如肝木太旺克伐脾土太過或是脾土太弱不能耐受肝木相乘,出現“木旺乘土”或是“土虛木乘”2種情況即為“相乘”;肺金克制肝木,如肝火亢盛肺金無力制約,反遭肝火反克稱為“木火刑金”[5]。臟與腑之間的關系包括:肺和大腸、心和小腸、脾和胃、腎與膀胱、肝和膽互為表里。腑與腑的傳變是指六腑(膽、胃、大腸、小腸、三焦和膀胱)它們都共同參與了飲食物的消化代謝和津液代謝過程,如果其中的一腑發生病變,肯定會影響別的腑出現功能失常,例如大腸如果傳導功能失調,腑氣不通將會引起胃氣上逆[6]。

本實驗選取了神經肽物質作為相關指標,是因為神經肽是存在于神經組織而且參與神經系統功能的內源性活性物質,是一類特殊的信息物質。特點為含量低、活性高、作用廣泛復雜,調節體內的多種生理功能。研究發現腸道神經肽超過50多種,其中胃腸神經肽研究比較多的有血管活性腸肽(VIP)、降鈣素基因相關肽(CGRP)、P物質(SP)、胃泌素釋放肽(GRP)和蛙皮素(BBS)等物質,研究證明SP、VIP參與炎性反應的釋放過程,并且神經肽能影響上皮細胞的增殖、細胞因子的分泌以及營養物質的吸收,而對胃腸道作用影響明顯的神經肽物質為VIP、SP、CGRP。現代研究表明,除腎上腺素能和膽堿能神經系統之外,另外還有非腎上腺素能、非膽堿能神經系統(Non-adrenergic,Non-cholinergic,NANC),在人體的呼吸系統中起著關鍵作用。NANC神經包括非腎上腺素能抑制性神經和非膽堿能興奮性神經[7]。e-NANC神經釋放的SP、CGRP等神經肽物質主要通過使氣道平滑肌收縮以及促使炎性反應遞質釋放等作用參與呼吸系統的病理生理過程。

一氧化氮合成酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)可使機體產生大量NO,對組織細胞具有損傷作用,參與許多疾病的發病過程。iNOS生成的NO可使組織受損和氣道發生炎性反應[8];iNOS廣泛分布于胃腸道黏膜、黏膜下層、肌層等。在NO的合成過程中,NOS是唯一的酶,NO在平滑肌舒張過程中起著重要作用,可以保護胃腸道黏膜并調節胃腸道和胰腺等臟器的分泌功能,說明了iNOS這類神經肽物質在呼吸系統和消化系統中都起著重要的作用[9]。

通過相關分析法分析不同組織的相關性得出:在CGRP這個指標有關聯的組織有:肺和心臟(8 d)、肺和空腸(16 d)、腎和膀胱(8 d)、脾與肝(16 d)、心與回腸(16 d)。心和肺的關系主要是心主血和肺主氣、心主行血和肺主呼吸的關系。所以肺心之間的關系主要是氣血互相為用的關系。肺主宣發肅降和朝百脈可以使心行血,而只有心主血脈的功能正常,血液循環正常,才能維持肺的正常呼吸功能。因肝屬木,脾屬土,木能克土;肝木旺盛,則克脾土,肝脾兩臟在生理和病理上緊密相連。肝失疏泄,則脾胃升降失常,形成肝脾不調,肝胃不和等[10]。葉天士曰:“補脾必以疏肝,疏肝即以補脾。”《金匱要略》指出:“見肝之病,知肝傳脾,當先實脾”,故肝病“實脾”謂之上工之舉,指導后世醫家的肝病治療[11]。

《黃帝內經》有云“腎開竅于二陰”,是指腎與膀胱相表里:腎是作強之官,腎精充盈則體健身強;膀胱是州都之官,有貯存水液和排小便的功能,本實驗論證了該理論;而本實驗為了驗證“心與小腸相表里”中的“小腸”相當于西醫中哪個腸段,特意將心臟和空腸、回腸、結腸、直腸分別作了比較,得出心與回腸有關聯,而肺與空腸有關聯。

在iNOS這個指標有關聯的組織有:肺與膀胱(16 d)、心與直腸(16 d);“肺與膀胱相通”出自明代李梴《醫學入門·臟腑總論》,書中引《臟腑疏鑿論》“肺與膀胱相通,肺病宜清利膀胱水,后用分清利濁,膀胱病宜清肺氣為主,兼用吐法。”何仲皋在《臟腑通》提到:“太陽與肺合表,分明水氣連天,相傳下達州都官,儼若江河淮漢。”說明了肺與膀胱相通的關系。太陽主一身之表,膀胱為足太陽之腑,為水臟。加之肺主衛氣也主表皮,通過肺的宣發肅降功能將水液下輸至膀胱達到“水精四布,五經并行”的目的。肺與膀胱通是臟腑間氣化相通的一種形式,和肺與大腸的表里相合的關系還是有所不同的,在臨床上“肺病治膀胱”或者“膀胱病治肺”對臨床具有重要的指導意義[12]。目前針對心與直腸的研究并不多,有待更進一步的研究。

在SP這個指標有關聯的組織有:肺與肝(8 d和16 d)、肺與回腸、結腸(8 d)、脾與胃(8 d)、心臟和回腸(8 d);肺與回腸、結腸有關聯這個結論與劉聲博士《在論文中提到的關于“肺”與“大腸”相表里中的“大腸”應定位于“回腸、結腸”的結論是一致的。關于心臟和回腸相關的理論研究和實驗研究均比較少,有待進一步的研究發現。

在肺的水液代謝過程中,除了依賴肺、脾、腎三臟的綜合作用,還依賴于肝的疏泄。肝主疏泄,主氣機調暢,氣行則津行,促進津液輸布環流。如果肝氣郁滯,血行不暢,血液瘀滯,可導致津液輸布障礙,飲邪聚集,聚而為痰,或溢于肌膚,成為水腫。趙獻可《醫貫·喘論》提到:“七情內,郁而生痰”[13]。而《類證治裁·郁證》亦云:“七情內起之郁,始則傷氣,繼降及血”[14]。氣機郁滯可造成痰滯和血瘀,使肺氣升降出入的功能受阻造成哮喘。《金匱要略·水氣病》對氣滯血瘀導致津液輸布失常引起水腫也有論述,“肝水者,其腹大,不能自轉側,脅下腹痛,時時津液微生,小便續通”,強調了氣、血、水在生理上的聯系,氣行則血行津散;在病理上也相互影響,氣滯則血結水停。脾與胃通過經脈相互絡屬而形成表里關系,他們之間的表里關系是“脾為胃行其津液”[15]。本實驗也證實了這個觀點。在VIP這個指標有關聯的組織有:肺和肝(8 d)、心臟和結腸(8 d和16 d)。肺臟在SP指標中是和回腸、結腸有關聯,在CGRP這個指標上是和空腸有關聯,在iNOS指標上是和膀胱有關聯的。

本實驗不但論證了肺與大腸的關系,而且論證了肺與肝臟以及肺與膀胱、肺與心臟的關系,豐富了“肺與大腸相表里”這個觀點,在以后的臨床治療上有著指導意義。在CGRP和SP這2個指標中,都得出了心與回腸有關聯的結論,而iNOS指標下發現心與直腸有關、VIP指標下發現心與結腸有關聯,由此可見心臟與腸道之間的聯系還是很密切的,這也是今后研究的一個方向。

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(2015-05-24收稿 責任編輯：王明)

An Experimental Study of “Interconnection of Zang-fu Viscera” Theory: Based on Neuropeptide Correlative Substances

Wen Lei

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029，China)

Objective:To explore the pathology of “interconnection of zang-fu viscera” theory with the guide of it, building pulmonary disease animal models and intestinal disease ones and observing the expression and correlation of SP, VIP, iNOS and CGRP in 12 different types of tissue at 12 various chosen time (8 d, 16 d).Methods:Two suites of healthy female SD rats were adopted, 35 rates per suite, and the body weight of each rat is between 110 to 120 g. Every suite was randomized into 5 groups: normal group, food restriction group, water limiting group, high oxygen group and low oxygen group, and the content of CGRP, iNOS, SP and VIP in the lung, spleen, liver, bladder, kidney, serum, stomach, heart, jejunum, ileum, colon, rectum were tested.Results:The tissues related to CGRP were: the lung and the heart(8 d),the lung and the jejunum(16 d), the kidney and the the bladder (8 d), the spleen and the liver (16 d), the heart and the ileum (16 d); The tissues related to iNOS were: the lung and the bladder (16 d), the heart and the rectum (16 d); The tissues related to SP were: the lung and the liver (8 d and 16 d), the lung, the colon and the ileum(8 d), the spleen and the stomach (8 d), the heart and the ileum (8 d); The tissues related to VIP were: the lung and the liver (8 d), the heart and the colon (8 d and 16 d).Conclusion:By illustrating the relationship between the lung and the large intestine, liver, bladder and heart, the theory “the lung and the large intestine being interior-exteriorly related” were enriched, which had great guiding significance to clinical treatment. In addition, CGRP, SP, iNOS, VIP and other indicators showed a close relationship between the heart and the intestine.

“Interconnection of zang-fu viscera”； Neuropeptide correlative substances

溫蕾(1983.09—),女,碩士,研究方向:中醫基礎理論四時五臟陰陽,E-mail:nature960186@163.com

R223.1

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10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.050