肉雞大腸桿菌病的診斷與治療研究

鄧瑞強(qiáng)

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院遠(yuǎn)景學(xué)院，山西 太谷 030800）

肉雞大腸桿菌病的診斷與治療研究

鄧瑞強(qiáng)

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院遠(yuǎn)景學(xué)院，山西 太谷 030800）

采取疑似患大腸桿菌病的病死肉雞為病料，患病的雞群為治療對(duì)象，利用臨床癥狀、病理剖解變化，結(jié)合細(xì)菌分離培養(yǎng)以及生化試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行確診，對(duì)分離細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)合敏感藥物對(duì)大腸桿菌病進(jìn)行治療研究。分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明該病原菌對(duì)新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮、恩諾沙星、氯霉素、阿米卡星高敏；對(duì)卡那霉素、慶大霉素中敏；對(duì)青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏。采用高敏藥物對(duì)該大腸桿菌病治療效果顯著。

肉雞；大腸桿菌；診斷；細(xì)菌分離；藥敏試驗(yàn)

1 肉雞大腸桿菌病的臨床診斷

1.1 雞大腸桿菌病的總體流行特點(diǎn)

各種品種以及不同日齡的雞都可感染發(fā)病，該病給養(yǎng)雞業(yè)造成的損失通常與致病菌的血清型及菌株的致病力、并發(fā)或繼發(fā)感染、發(fā)病后采取的措施等因素有關(guān)，本病的發(fā)病率和死亡率有較大差異。大腸桿菌在自然環(huán)境中，飼料、飲水、雞的體表、孵化場(chǎng)、孵化器等各處普遍存在，該菌在種蛋表面、雞蛋內(nèi)、孵化過(guò)程中的死胚及毛液中分離率較高。

本病在雛雞階段、育成期和成年產(chǎn)蛋雞均可發(fā)生，雛雞呈急性敗血癥，多數(shù)情況下因受各種應(yīng)激因素和其他疾病的影響，本病感染更為嚴(yán)重。成年產(chǎn)蛋雞往往在開(kāi)產(chǎn)階段發(fā)生，死淘率增多，影響產(chǎn)蛋，生產(chǎn)性能不能充分發(fā)揮。種雞場(chǎng)發(fā)生，直接影響到種蛋孵化率、出雛率，造成孵化過(guò)程中死胚和毛蛋增多，健雛率低。

1.2 肉雞大腸桿菌病的臨床觀察

整體觀察病雞的外觀、精神狀況。羽毛是否整齊，精神是否正常，沉郁還是興奮，是否離群呆立，進(jìn)食是否正常。再觀察雞的皮膚是否發(fā)紅、水腫，糞便情況等。考慮是否伴發(fā)其他疾病。

1.3 肉雞大腸桿菌病的病理變化

打開(kāi)腹腔聞其是否有特異性氣味，是否有積液。心包膜及氣囊是否增厚變渾濁、肝臟是否覆蓋滲出物、腎臟是否正常，腺胃、肌胃、腸道、盲腸扁桃體及腸黏膜是否出血、壞死。

2 肉雞大腸桿菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 材料準(zhǔn)備

2.1.1 病料來(lái)源 小京莊養(yǎng)殖場(chǎng)雞群收集的患典型大腸桿菌病的病死肉雞病料。死亡時(shí)間不超過(guò)12 h。

2.1.2 儀器 光學(xué)顯微鏡、解剖剪、解剖盤(pán)、鑷子、載玻片、蓋玻片、染液、一次性手套、消毒液。

2.1.3 培養(yǎng)基及試劑 麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、腸桿菌科細(xì)菌微量生化鑒定管。

2.1.4 藥敏紙片 先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮、氨芐青霉素、氯霉素、阿米卡星、卡那霉素、慶大霉素、新霉素、恩諾沙星、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素14種抗生素圓形藥敏紙片。

2.2 診斷方法

2.2.1 顯微鏡檢查 將病死雞肝臟做觸片，革蘭氏染色，鏡檢。看是否為革蘭氏陰性，兩端鈍圓并散在的中等大小的桿菌。

2.2.2 分離培養(yǎng) 無(wú)菌取典型病雞、死雞的心血、肝、氣囊等病料，劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，再挑取典型菌落劃線接種于普通培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)；取純培養(yǎng)菌接種于普通瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)20 h，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3 生化試驗(yàn) 將分離的單個(gè)典型菌落分別接種于乳糖、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、枸櫞酸鹽、吲哚、MR、H2S的生化鑒定管中，置于37℃的環(huán)境條件下培養(yǎng)2～3 d，嚴(yán)格遵守試驗(yàn)要求，按照試驗(yàn)的章程操作，判定結(jié)果按照生化試驗(yàn)的方法對(duì)所分離的株進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)的測(cè)定。

2.2.4 藥敏試驗(yàn) 將保存的菌株按紙片法用接種棒挑取單個(gè)菌落均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上，間隔一定距離貼上各種抗生素藥敏試紙，于37℃溫度條件培養(yǎng)24 h，觀察各種抗生素抑菌情況。判斷標(biāo)準(zhǔn)為抑菌圈直徑大于15 mm的為高敏；直徑在10～14 mm的為中敏；直徑小于10 mm的為低敏。

2.2.5 藥物治療 根據(jù)藥敏結(jié)果再結(jié)合雞場(chǎng)歷來(lái)用藥情況，采用合適的藥物，嚴(yán)格按照用藥規(guī)定進(jìn)行治療。

3 結(jié)果與分析

3.1 臨床診斷結(jié)果

3.1.1 臨床觀察結(jié)果 臨床表現(xiàn)為精神沉郁，離群呆立，羽毛松亂，少吃或不吃，腹部大，嗦囊內(nèi)充滿食物，臍孔及其周圍皮膚發(fā)紅、呼吸困難等。雛雞精神不振，閉眼嗜睡，個(gè)別雞扇動(dòng)翅膀，尖叫不安，有的雞張口呼吸，排稀便或水樣便，呈灰白色、黃色，多數(shù)腿干燥、脫水。若肉仔雞繼發(fā)感染傳染性支氣管炎、霉形體病時(shí)，死亡率更高。

圖1 肉雞大腸桿菌病的解剖特征(附肝臟)

3.1.2 病理剖檢結(jié)果 多數(shù)病例其胸肌和腿肌無(wú)變化。打開(kāi)腹腔有一種特異性惡臭味，腹腔有淺黃色積液，肝臟覆蓋一層黃白色的滲出物(見(jiàn)圖1)，腎臟腫大，法氏囊充滿黏液，腸道出血，盲腸扁桃體出血、壞死，氣管環(huán)狀出血，腺胃、肌胃無(wú)明顯變化。少數(shù)病例還可見(jiàn)氣囊和心包膜嚴(yán)重渾濁，且心包膜上披覆黃白色滲出物，心冠脂肪有針尖大的出血點(diǎn)，腸黏膜出血。根據(jù)大腸桿菌病的臨床病理變化特征，結(jié)合發(fā)病特點(diǎn)初診該病為雞大腸桿菌病。

3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果

3.2.1 病原體的形態(tài) 對(duì)所采集的病料肝臟組織涂片進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢可以看到紅色、短小、兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌，多數(shù)為單個(gè)散在，有的成對(duì)出現(xiàn)，且無(wú)芽胞，符合大腸桿菌的典型形態(tài)特征。

圖2 大腸桿菌分離培養(yǎng)結(jié)果

3.2.2 分離菌培養(yǎng)結(jié)果 在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成中等大小、圓形、稍隆起表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、紅色小菌落（見(jiàn)圖2）。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色帶金屬光澤的菌落。將分離菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)24 h后，形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、半透明、灰白色菌落，直徑約2～3 mm；分離菌的培養(yǎng)結(jié)果符合典型大腸桿菌的培養(yǎng)特性。

3.2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果 將典型菌落分別接種不同的生化鑒定管進(jìn)行生化試驗(yàn)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后反應(yīng)情況如表1。試驗(yàn)結(jié)果與大腸桿菌相應(yīng)的生化特性一致，因此將分離的菌判定為大腸桿菌。

表1 生化鑒定結(jié)果

3.2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 將分離的菌株劃線接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，并使藥敏試紙均勻分布于培養(yǎng)基表面。結(jié)果發(fā)現(xiàn)本菌對(duì)新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢哌酮、氯霉素、阿米卡星高敏；對(duì)卡那霉素、慶大霉素中敏；對(duì)青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏（見(jiàn)表2)。

表2 大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3.3 藥物治療結(jié)果

雛雞藥物預(yù)防，一般可在雛雞出殼后開(kāi)食時(shí)，在飲水中投0.02%～0.03%氯霉素或0.03%～0.04%慶大霉素。早期投藥可控制早期感染的病雞，促使痊愈，同時(shí)可防止新發(fā)病例的出現(xiàn)；在大腸桿菌病發(fā)病后期，若出現(xiàn)了氣囊炎、肝周炎、卵黃性腹膜炎等較為嚴(yán)重的病理變化時(shí)，使用抗生素療效往往不顯著甚至沒(méi)有效果。

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感的藥物，并結(jié)合該雞場(chǎng)以前曾經(jīng)長(zhǎng)期應(yīng)用過(guò)氨芐青霉素的用藥史，采用了氟苯尼考和黃芪多糖聯(lián)合用藥。氟苯尼考是針對(duì)大腸桿菌，而黃芪多糖能提高機(jī)體的免疫力。用藥1 d后雞群死亡率下降，采食量逐漸增加，腹瀉逐漸減輕，羽毛恢復(fù)光澤，3 d后基本恢復(fù)正常。

3.4 分析

臨床診斷方法對(duì)于病情嚴(yán)重的雞能快速確診，但是對(duì)于發(fā)病初期臨床癥狀還不明顯的雞來(lái)確診就存在一定困難性，因此只依靠臨床方法是不利于早期的預(yù)防和治療。而利用實(shí)驗(yàn)室方法則能準(zhǔn)確確診，對(duì)治療方案能給予正確指導(dǎo)，但實(shí)驗(yàn)室方法也有其弊端就是診斷所需時(shí)間長(zhǎng)且費(fèi)用高。

4 討論

4.1 導(dǎo)致大腸桿菌病發(fā)生的原因

不能全進(jìn)全出：養(yǎng)雞場(chǎng)剛剛新建，一次可接雛20 000～50 000羽，但孵化場(chǎng)沒(méi)有能力一次供足如此大量的雛雞，使綜合防制措施中的全進(jìn)全出的措施得不到落實(shí)，影響了免疫程序的實(shí)施，同時(shí)不同日齡的雞成了雞病傳播的易感動(dòng)物，構(gòu)成了多重性的傳播。

種雞質(zhì)量不保證：在防病滅病中，對(duì)種雞場(chǎng)的控制是關(guān)鍵，但現(xiàn)在種雞場(chǎng)和孵化場(chǎng)沒(méi)有采取嚴(yán)格的綜合管理，種雞場(chǎng)一般管理較差，通過(guò)種蛋污染大腸桿菌，加上有些孵化場(chǎng)消毒不嚴(yán)，使出殼雛雞感染，導(dǎo)致雛雞大量死亡，生長(zhǎng)緩慢。

病死雞的環(huán)境污染：部分病死雞由走村串戶的小販來(lái)收購(gòu)，這種形式也是導(dǎo)致細(xì)菌性疾病四處傳播的重要途徑。

飼料：飼料原料和成品都不能進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，動(dòng)物性飼料成為雞感染大腸桿菌病的重要途徑。

投藥方式：每當(dāng)雞群發(fā)病后，經(jīng)常習(xí)慣使用大量抗生素，并且連續(xù)投服幾個(gè)療程。大量投藥易造成雞體內(nèi)正常菌群失調(diào)、免疫機(jī)能下降，易導(dǎo)致條件性致病菌如大腸桿菌的感染發(fā)病[1]。另外，長(zhǎng)時(shí)間使用抗生素，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使投藥效果不佳。

飼養(yǎng)管理不善:在養(yǎng)雞業(yè)的飼養(yǎng)管理中，由于忽視轉(zhuǎn)舍、擴(kuò)欄、飼料改變、溫度變化等多種應(yīng)激后，使雞的機(jī)體抵抗力降低，使之成為多種疾病的易感雞。

其他病的影響：由于新城疫、傳支等病毒病的發(fā)生，使雞群的抗病能力減弱，對(duì)細(xì)菌特別是大腸桿菌的易感性提高。

4.2 對(duì)大腸桿菌病的防治

4.2.1 提高雞體免疫力和抗病力 疫苗免疫：由于本病發(fā)生普遍，各種年齡的雞均可發(fā)病，藥物預(yù)防和治療效果逐漸降低而且又增加了養(yǎng)雞的成本。近年來(lái)已試制成功了大腸桿菌死疫苗（大腸桿菌多價(jià)氫氧化鋁苗和多價(jià)油佐劑苗），但由于大腸桿菌血清型較多，制苗菌株應(yīng)該采自本地區(qū)發(fā)病雞群的多個(gè)毒株或本場(chǎng)分離菌株聯(lián)合制苗，效果最好。

4.2.2 微生態(tài)學(xué)防制 和其他動(dòng)物一樣，雞腸道中大腸桿菌的數(shù)量是相對(duì)穩(wěn)定，與其他需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌處于微生物平衡狀態(tài)。若機(jī)體受到外界刺激或?yàn)E用抗生素，則這種平衡狀態(tài)被破壞，并有利于致病菌入侵而引起疾病。因此，保護(hù)雞腸道的微生態(tài)平衡，對(duì)預(yù)防大腸桿菌病至關(guān)重要，為了控制大腸桿菌的過(guò)度生長(zhǎng)，可用促酶生、調(diào)痢生等微生態(tài)制劑以促進(jìn)擬桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等厭氧菌的生長(zhǎng)，間接抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。同時(shí)可采用在飼料中加入乳糖和有機(jī)酸的辦法，抑制致病菌或其他優(yōu)勢(shì)菌。

4.2.3 藥物預(yù)防 同時(shí)期分離到的大腸桿菌菌株，對(duì)同一種藥物的耐藥性差異很大。診斷出雞群發(fā)生大腸桿菌弊病后，最好先做藥敏試驗(yàn)，選出最經(jīng)濟(jì)有效的藥物治療預(yù)防，憑經(jīng)驗(yàn)用藥效果是不會(huì)理想的。由于大腸桿菌易對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，這給臨床治療帶來(lái)了很大的困難，因此必須通過(guò)藥敏試驗(yàn)，篩選敏感藥物進(jìn)行治療，才能達(dá)到較好效果。如果養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖專業(yè)戶有時(shí)不具備做藥敏試驗(yàn)的條件，當(dāng)通過(guò)臨床癥狀和剖檢變化懷疑是大腸桿菌病時(shí)，可選用過(guò)去很少用過(guò)的高敏感藥物進(jìn)行全群治療，并交替用藥，防止產(chǎn)生耐藥性，一般也可有效控制疫情，使雞痊愈。

大腸桿菌對(duì)藥物敏感性不盡相同，以致同一藥物同一方法而在不同場(chǎng)合不同時(shí)間的使用效果不一樣。不同肉雞場(chǎng)分離的菌株對(duì)同一種抗生素的敏感性有較大的差異，甚至在同一肉雞場(chǎng)的分離株對(duì)藥物的敏感性也參差不一，因此，在實(shí)際應(yīng)用中，必須經(jīng)常進(jìn)行細(xì)菌分離和藥敏試驗(yàn)，篩選有效藥物進(jìn)行防治，方能做到“藥到病除”，以免藥物浪費(fèi)，造成不必要的損失。藥敏試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，特別適宜于大中型集約化雞場(chǎng)應(yīng)推廣應(yīng)用。

5 結(jié)論

根據(jù)臨診癥狀和剖檢變化以及生化試驗(yàn)可以確診該病為大腸桿菌病，藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，肉雞大腸桿菌病對(duì)新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢哌酮、氯霉素、阿米卡星高敏；對(duì)卡那霉素、慶大霉素中敏；對(duì)青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏。

肉雞大腸桿菌病的臨床癥狀明顯，利用臨診癥狀和剖檢變化基本可以確診。由于藥物的長(zhǎng)期使用，產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性，再加上大腸桿菌的血清型眾多，增加了治療的難度。因此在應(yīng)用藥物治療時(shí)結(jié)合藥敏試驗(yàn)，并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感性高的藥物進(jìn)行治療。

[1]孫艷明,趙德明.雞大腸桿菌病的診斷與防治[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2006,(33).

（編輯：晏兵兵）

S858.31

B

1006-799X(2016)21-0096-04

鄧瑞強(qiáng)(1983-)，男，山西榆次人，主要從事獸醫(yī)流行病學(xué)相關(guān)研究工作。