二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的保護作用及機制研究

吳曉玲 張貴鋒 劉其禮保澤慶

肇慶醫學高等專科學校，廣東肇慶 526020

二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的保護作用及機制研究

吳曉玲 張貴鋒 劉其禮▲保澤慶

肇慶醫學高等專科學校，廣東肇慶 526020

目的探討二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的保護作用及機制研究。方法健康新西蘭白兔60只隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組、二苯乙烯苷低劑量組（低劑量組）、二苯乙烯苷中劑量組（中劑量組）、二苯乙烯苷高劑量組（高劑量組），每組家兔各10只。正常對照組和模型組給予同體積蒸餾水，陽性對照組給予普羅布考250mg/（kg·d），低劑量組給予30mg/（kg·d），中劑量組給予60mg/（kg·d），高劑量組給予120mg/（kg·d）。觀察各組家兔病理組織變化，檢測各組血脂指標水平及血漿apoA1/apoB100比值。結果與正常對照組比較，其余各組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均明顯下降（P＜0.05）；與陽性對照組比較，高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯下降（P＜0.05）；與低劑量和中劑量組比較，高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯下降（P＜0.05）；與正常對照組比較，其余各組血漿apoA1/apoB100比值明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（P＜0.05）；與陽性對照組比較，高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（P＜0.05）；與低劑量和中劑量組比較，高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（P＜0.05）。結論二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的具有一定保護作用，其機制可能與其調節血脂，以及提高血漿apoA1/apoB100比值相關。

二苯乙烯苷；氟中毒；動脈粥樣硬化；保護作用；機制研究

氟是人體必需的微量元素之一，其缺乏或過量均會人體產生不利影響。臨床研究報道顯示，攝入過量的氟會致使出現氟中毒，對機體各系統非骨骼組織也會導致炎癥損傷[1]。研究報道顯示，氟可能引發血管動脈硬化改變，以及促進動脈粥樣硬化的發生[2]。動脈粥樣硬化使心肌梗死、腦卒中等缺血性心腦血管疾病主要病理學基礎，其發病機制較為復雜[3]。二苯乙烯苷是中藥何首烏的主要有效成分，研究報道顯示二苯乙烯苷對動脈粥樣硬化具有一定的防治作用，具有降脂、抗氧化等作用[4]。本研究旨在探討二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的保護作用及機制研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

健康新西蘭白兔60只，雄性，體重（2.0±0.5）g，自由飲水，控制溫度為23～25℃，相對濕度為70%。

1.2 實驗葒物及實驗分組

二苯乙烯苷（上海士鋒生物科技有限公司，J20030014），普羅布考（承德頸康藥業集團有限公司，H10960054，規格：0.25g）

將60只家兔隨機分為6組，包括正常對照組、模型組、陽性對照組、二苯乙烯苷低劑量組（低劑量組）、二苯乙烯苷中劑量組（中劑量組）、二苯乙烯苷高劑量組（高劑量組），每組家兔各10只。

1.3 氟中毒所致動脈粥樣硬化家兔模型制備及給葒方法

模型制備：模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、該劑量組均加氟離子水（含氟100mg/L）致家兔氟中毒。動脈粥樣硬化模型制備：模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、該劑量組均給予高脂飼料喂飼，且一次性腹腔注射VitD 370U/kg劑量，連續注射3次，隔天注射1次，造模成功參照文獻標準[5]，均造模成功。

給藥方法：正常對照組和模型組給予同體積蒸餾水，陽性對照組給予普羅布考250mg/（kg·d），低劑量組給予30mg/（kg·d），中劑量組給予60mg/（kg·d），高劑量組給予120mg/（kg·d），所有動物均給藥8周。

1.4 觀察指標

（1）觀察各組家兔病理組織變化，處死各組動物后，取出主動脈，將其縱行切開，10%福爾馬林固定，蘇丹Ⅲ染色，按主動脈內膜病變分級標準，肉眼對主動脈內膜硬化斑定級，病變級別數據用統計學處理。然后石醋包埋組織切片，HE染色，顯微鏡觀察組織結構變化；（2）觀察各組家兔血脂指標水平變化，包括膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），各組家兔從耳緣靜脈取血分離血清，按試劑盒標準操作，試劑盒購于（江蘇澤雨生物科技有限公司）；（3）觀察各組血漿中載脂蛋白A1和載脂蛋白B100（apoA1/apoB100）比值，各組家兔從耳緣靜脈取血分離血漿，按試劑盒標準操作，試劑盒購于（上海鈺博生物科技有限公司）。

1.5 統計學處理

應用SPSS22.0統計學軟件處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠一般活動情況

正常對照組動物食欲較好，毛發光澤度好，精神狀態良好；模型組動物毛色暗淡、精神萎靡、反應遲鈍、消瘦等癥狀，陽性對照組、二苯乙烯苷各劑量組動物毛色、精神狀態均較模型組明顯改善。

2.2 各組病理組織變化

正常對照組動脈血管壁結構清晰，以及內皮細胞連續完整無脫落；模型組內膜下見大量膽固醇結晶及脂質沉積；陽性對照組內膜結構基本完整，未見明顯膽固醇結晶及脂質沉積；各劑量組血管壁增厚，內膜光滑，以及中膜未見明顯增生（圖1）。

圖1 各組病理組織變化（HE×400）

2.3 各組血脂指標水平比較

與正常對照組比較，其余各組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均明顯下降（TC：t值分別為：3.799、2.171、3.634、5.772，TC：t值分別為：4.157、2.041、4.199、5.064，LDL-C ：t值 分 別 為：4.234、2.083、3.775、7.952，HDL-C：t值 分 別 為：4.929、6.692、4.548、2.079，P＜0.05）；與陽性對照組比較，高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯下降（t值分別為：2.281、2.052、4.172、3.136，P＜0.05）；與低劑量和中劑量組比較，高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯下降（TC：t值分別為：3.919、2.304，TC：t值分別為：5.690、1.350，LDL-C：t值分別為：8.852、3.893，HDL-C：t值分別為：4.983、2.666，P＜0.05）。見表1。

表1 各組血脂指標水平比較（，mmol/L）

表1 各組血脂指標水平比較（，mmol/L）

注：與正常對照組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽性對照組比較，③P＜0.05；與低劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05

組別 n TC TG LDL-C HDL-C正常對照組 6 2.73±0.47 0.75±0.18 1.24±0.30 1.60±0.12模型組 6 15.32±3.52① 2.31±0.65① 12.68±2.49① 0.91±0.10①陽性對照組 6 8.79±2.31①② 1.14±0.23①② 7.39±1.78①② 1.24±0.13①②低劑量組 6 11.34±2.79①② 1.71±0.31①② 10.23±1.45①② 1.38±0.14①②中劑量組 6 8.94±2.47①②④ 1.09±0.29①② 7.63±2.13①② 1.20±0.12①②高劑量組 6 6.13±1.68①②③④⑤ 0.91±0.15①②③ 3.79±1.14①②③ 1.03±0.10①②③

2.4 各組血漿apoA1/apoB100比值變化

與正常對照組比較，其余各組血漿apoA1/ apoB100比值明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（t值分別為2.855、2.195、4.154、7.967，P＜0.05）；與陽性對照組比較，高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（t值=2.617，P＜0.05）；與低劑量和中劑量組比較，高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升（t值分別為5.018、2.425，P＜0.05）。見表2。

表2 各組血漿apoA1/apoB100比值變化（

表2 各組血漿apoA1/apoB100比值變化（

組別 n apoA1/apoB100正常對照組 6 0.95±0.07模型組 6 0.63±0.05陽性對照組 6 0.75±0.09低劑量組 6 0.70±0.06中劑量組 6 0.79±0.05高劑量組 6 0.86±0.05

3 討論

流行病學調查研究發現，飲水中氟的濃度與心血管疾病發生具有一定的關系，且氟中毒患者體內脂類代謝會出現紊亂[6]。此外，還有研究報道顯示，氟可能引發血管動脈硬化改變，進一步促進動脈粥樣硬化的發生[7]。二苯乙烯苷屬多羥基芪類化合物，具有多種生理活性，包括降血脂、抗衰老以及抑制腫瘤等[8]。二苯乙烯苷抗動脈粥樣硬化及降血脂作用機制可能與以下幾方面相關[9-13]：（1）二苯乙烯苷可抑制TG和TC經腸道時的吸收；（2）二苯乙烯苷能夠抑制血小板源生長因子誘導的小血管平滑肌細胞的增生；（3）二苯乙烯苷能夠抑制5-脂氧化酶產物羥二十碳四烯酸、抑制血栓烷以及環氧化酶產物的作用；（4）二苯乙烯苷能夠明顯抑制血管細胞粘附分子-1的表達。本研究結果表明，與正常對照組比較，其余各組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯增加；與模型組比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均明顯下降；與陽性對照組比較，高劑量組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯下降。筆者認為二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化作用機制主要可能是由于何首烏提取物可有效抑制脂蛋白氧化，其二苯乙烯苷主要成分是一種多羥基酚類化合物，其調節脂類代謝可能機制與抑制脂肪酶的活性有關，可使脂肪分解與吸收減少，降低游離脂肪酸的水平，促進脂肪排泄與轉化，來抑制cAMP形成，進一步使甘油三酯酶活性降低，降低TG生成減少，水解相應增加。載脂蛋白（APO）是脂蛋白顆粒外層的蛋白質成分，其功能主要是維持脂蛋白結構和脂類的運輸，以及調控脂代謝有關酶的活力及作為細胞表面脂蛋白受體的配件而參與脂蛋白代謝[14-15]。研究報道顯示，apoA1和apoB100與動脈粥樣硬化關系密切[16]。本研究結果表明，與正常對照組比較，其余各組血漿apoA1/apoB100比值明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽性對照組、各劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升，與陽性對照組比較，高劑量組血漿apoA1/apoB100比值明顯上升，故而說明二苯乙烯苷可明顯提高血漿apoA1/ apoB100比值。

綜上所述，二苯乙烯苷對氟中毒所致動脈粥樣硬化的具有一定保護作用，其機制可能與其調節血脂，以及提高血漿apoA1/apoB100比值相關。

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Protective effect of two styrene glycosides to atherosclerosis due to fluorosis and its mechanism

WU Xiaoling ZHANG Guifeng LIU Qili BAO Zeqing
Zhaoqing Medical College,Zhaoqing 526020,China

ObjectiveTo explore the protective effect of two styrene glycosides to atherosclerosis due to fluorosis and its mechanism.Methods60 healthy New Zealand white rabbits were randomly divided into normal control group, model group, positive control group,two styrene glycosides low dose group (low dose group),two styrene glycosides middle dose group (middle dose group),two styrene glycosides high dose group(high dose group) with 10 rabbits in each group.Rabbits in normal control group and model group were givedn the same volume distilled water, rabbits in positive control group were given probucol 250mg/ (kg·d),rabbits in low dose group were given probucol 30mg/(kg·d),rabbits in middle dose group were given probucol 60mg/ (kg·d),and rabbits in high dose group were given probucol 120mg/(kg·d).Pathological change of the rabbits in each group were observed, and serum lipid levels and plasma apoA1/apoB100 ratio of each group were detected.ResultsCompared with the normal control group,the TC,TG,LDL-C,HDL-C level of other group were significantly decreased (P＜0.05). Compared with the model group,the TC,TG,LDL-C,HDL-C level of positive control group, low dose group, middle dose group, high dose group were significantly decreases (P＜0.05).Compared with the positive control group,the TC,TG,LDL-C,HDL-C level of high dose group were significantly decreases (P＜0.05).Compared with the normal control group, the plasma ratio apoA1/apoB100 of other group were significantly decreased (P＜ 0.05).Compared with the model group, the plasma ratio apoA1/apoB100 of positive control group, low dose group, middle dose group, high dose group were significantly increases (P＜0.05).Compared with the positive control group, the plasma ratio apoA1/apoB100 of high dose group were significantly increases (P＜0.05).Compared with the low dose group and middle dose group, the plasma ratio apoA1/apoB100 of high dose group were significantly increases (P＜0.05).ConclusionTwo styrene glycosides to atherosclerosis due to fluorosis has a certain protective effect. The mechanism may be related to the regulation of serum lipids and the increase of apoA1/apoB100 ratio in plasma.

Two styrene glycosides;Fluorosis;Atherosclerosis;Protective effect;Mechanism study

R543.3

A

2095-0616（2016）19-44-04

2016-08-02）

廣東省肇慶市科技創新計劃項目（2016040301-50）。

▲通訊作者