化學發光酶免疫分析法及ELISA用于丙型肝炎抗體檢測的效果對比觀察

周華強

廣東省仁化縣人民醫院檢驗科，廣東仁化 512300

化學發光酶免疫分析法及ELISA用于丙型肝炎抗體檢測的效果對比觀察

周華強

廣東省仁化縣人民醫院檢驗科，廣東仁化 512300

目的探討化學發光酶免疫分析法和ELISA在丙型肝炎抗體中的檢測效果。方法選取我院2014年12月～2015年11月接收的丙型肝炎患者332例，隨機分為對照組和觀察組患者各166例，抽取患者血液，檢測其丙型肝炎抗體。其中，對照組患者采用ELISA法的檢測其陽性檢出率，觀察組患者則采用化學發光酶免疫分析法檢測其陽性檢出率。結果化學發光酶免疫分析法對該抗體為97.6%陽性檢出率，顯著高于ELISA法的92.8%，具有統計學差異（P＜0.05）。此外，化學發光酶免疫分析法檢出抗AMA-M2抗體的概率是78.3%，明顯高于ELISA法的陽性檢出率12.7%；化學發光酶免疫分析法對于抗3 E抗體的陽性檢出率為72.9%，明顯高于ELISA法的陽性檢出率13.3%；化學發光酶免疫分析法檢出陽性抗SP100抗體概率是38.0%，明顯高于ELISA 法的陽性檢出率14.5%；化學發光酶免疫分析法檢出陽性抗PML抗體概率為56.0%，高于ELISA法的11.4%；化學發光酶免疫分析法檢出陽性抗GP210抗體的概率為48.2%，明顯高于ELISA法的陽性檢出率6.0%，具有統計學差異（P＜0.05）。結論化學發光酶免疫分析法在丙型肝炎抗體檢測中陽性檢出率明顯的好于ELISA法檢測，可以推廣于丙型肝炎抗體的檢驗。

化學發光酶免疫法；ELISA；丙型肝炎抗體

化學發光免疫分析是聯合化學發光檢測和免疫反應，檢測各種體內多種物質的方法[1]。化學發光免疫分析法按照不同的標記方法分為化學發光標記免疫分析法和化學發光酶免疫分析法[2]。酶聯免疫吸附試驗，是利用抗原抗體共價鍵合[3]。底物溶液加入之后，底物所含的供氫體可在酶的存在下使底物由無色還原型變為有色氧化型[4]。所以，免疫反應是否發生可經是否變化來確定。丙型肝炎的傳播會通過針刺以及吸毒和輸血，勞累、飲酒等會對丙型肝炎病情有不良影響[5]。

表2 兩種方法檢測后相關丙型肝炎抗體檢出率比較[n（%）]

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2014年12月～2015年11月接收的丙型肝炎患者332例，隨機分為對照組和觀察組患者各166例，對照組患者采用ELISA法的檢測其陽性檢出率，觀察組患者則采用化學發光酶免疫分析法檢測其陽性檢出率。納入標準為：首先病理確診為丙型肝炎；年齡20～80歲；沒有嚴重的心腎并發癥；有完整的臨床資料；其次，所有患者的血清標本采集均符合要求；最后，所有患者都簽署知情書。其中，對照組患者有男89例，女77例；年齡23～78歲，平均（53.8±3.2）歲；觀察組患者有男87例，女79例；年齡24～77歲，平均（54.1±3.0）歲，兩組患者的一般資料相比較無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

觀察組患者采用化學發光酶免疫分析法。化學發光酶免疫分析是根據血清通過化學發光酶免疫分析進行判定陽性率，即首先發光微孔板的包被采用經基因重組的HCV特異性抗原，隨后加入觀察組患者的血清樣本，則固相抗原與觀察組患者血清樣本中HCV抗體結合為復合物，之后和HRP酶標記的抗人IgG抗體作用，這樣酶標抗原抗體復合物得以形成，洗滌，加入魯米諾，一種化學發光底物，其在雙氧水堿性緩沖液的環境中，通過氧化和HRP酶的催化，最終成為激發態中間體，激發態的中間體回到基態時發出光子，利用發光信號儀測定其發光值，HCV陽性抗體的含量即可被間接算出。對照組患者采取ELISA法，首先采集對照組患者的空腹靜脈血，在4h內低溫離心分離血清，監測血清的相關指標。在微孔條預包被基因表達HCV抗體，與血清中的抗HCV抗體反應，然后加入HRP標記羊抗人-IgG的酶標記抗體與之結合，之后用TMB作用顯色。結果若S/CO值不小于1為陽性，S/CO值小于1為陰性，其中，ELISA試劑盒由森貝伽生物科技有限公司生產，由鄭州安圖生物工程有限公司生產的LUMO半自動分析儀作為化學發光酶免疫分析法的檢測儀器。

1.3 觀察指標

對所有檢測人員的丙型肝炎抗體的陽性檢出率及其對抗AMA-M2抗體、抗3E抗體、抗SP100抗體、抗PML抗體的檢出率做出詳細的記錄和評估。

1.4 統計學分析

處理數據采用的是用SPSS18.0統計學軟件，計數資料選擇χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 所有患者經兩種方法檢測后丙型肝炎抗體的陽性檢出率的比較

兩種方法檢測后，166例丙型肝炎患者化學發光酶免疫分析法監測出丙型肝炎抗體162例（97.6%），顯著高于ELISA法的92.8%，兩組數據有統計學差異（P＜0.05）。具體見表1。

表1 兩種方法檢測后丙型肝炎抗體的陽性檢出率的比較[n（%）]

2.2 兩種方法檢測后相關丙型肝炎抗體檢出率比較

化學發光酶免疫分析法檢出陽性抗AMAM2抗體、抗3 E抗體、抗SP100抗體、抗PML抗體以及抗GP210抗體概率為78.3%、72.9%、38.0%、56.0%以及48.2%，明顯高于ELISA法的陽性檢出率12.7%、13.3%、14.5%、11.4%以及6.0%，兩組數據有統計學差異（P＜0.05）。見表2。

3 討論

丙型肝炎病毒的慢性感染會引發壞死和纖維化的肝臟慢性炎癥，有些患者甚至會出現肝硬化和肝細胞癌，嚴重危機患者的身心健康和生命安全[6]。丙型肝炎的傳播會通過輸血以及注射、性傳播、母嬰傳播等途徑，也會進入人體經皮膚破損處或黏膜[7]，此類傳播是一種很廣泛的傳播方式[8]，比如非一次性注射器的使用、消毒不嚴格的牙用器械的使用、剃須刀以及牙刷等的公用等[9]。丙肝病毒的復制能力以及病毒多肽的免疫原性和基因型等病毒因素與人體的體液以及細胞和先天性免疫反應等宿主因素[10]，此外，飲酒、勞累和免疫抑制劑因素也會給丙型肝炎帶來不良影響[11]。該病的臨床表現有急性丙型病毒性肝炎、慢性丙型病毒性肝炎和肝硬化[12]。其中急性丙型病毒性肝炎急性丙型肝炎病情對于成年人來說病情較輕，急性無黃疸型肝炎居多，谷丙轉氨酶ALT升高為主[13]。兒童則有近一半可自發性的清除丙型肝炎病毒。

免疫球蛋白抗體是受到刺激的人體免疫細胞和抗原的結合形成的。抗AMA抗體是無種屬以及器官特異性的自身抗體，靶抗原是抗AMA抗體的線粒體，作為抗AMA亞型抗體，靶抗原的2-酮酸脫氫酶復合物在M2抗體線粒體內膜上，自體免疫性肝病的診斷率會得以很大的提高。抗PML抗體和抗SP100抗體均為核點型熒光染色模型，該模型的聯合檢測能夠顯著提高對肝炎的診斷率。除此之外，對肝病診斷有很高的特異性的還有抗GP210抗體，該抗體對肝病診斷的特異性高于95%以上。

丙型肝炎陽性抗體患者的血液中含有有傳染性丙型肝炎病毒[14]。患者在大約60d的病毒潛伏期后，僅約四分之一的患者有食欲不振以及勞累和黃疸等病癥，多數患者仍然沒有發病的感覺，肝硬化的出現會在丙型肝炎病毒感染后約二十年后。故而，多數人不會察覺到被病毒感染。丙型肝炎患者在急性感染后，病毒RNA會出現在血清中，因此，早期診斷可以通過檢查病毒RNA[15]。丙型肝炎病毒在體內潛藏兩個月后，可在患者血液中檢出丙型肝炎抗體。然而，丙型肝炎抗體不能消除入侵病毒，即沒有保護作用[16]。本研究表明，化學發光酶免疫分析法檢出陽性抗體概率高于ELISA法。

綜上可知，化學發光酶免疫分析法在丙型肝炎抗體檢測中陽性檢出率明顯的好于ELISA法檢測，可以推廣于丙型肝炎抗體的檢驗。

[1] 盧香云，程江，包建玲，等.ELISA法檢測丙型肝炎病毒抗體最佳臨界值及其可疑區間[J].現代預防醫學，2015，42（10）：1841-1844.

[2] 楊清梅，黃志偉，賈偉建，等.丙肝病毒核心抗原與丙肝抗體聯合檢測在丙型肝炎診斷中的應用[J].實用醫學雜志，2015，31（9）：1470-1471.

[3] 張慧麗，于斐，張靜，等.化學發光酶免疫分析法快速測定牛奶中恩諾沙星的含量[J].中國食品衛生雜志，2011，23（5）：398-401.

[4] 馬玲，韋建興，陸忠礎，等.磺胺二甲嘧啶間接競爭化學發光酶免疫分析法的建立及應用[J].中國食品衛生雜志，2014，26（5）：455-460.

[5] 王江南，陳秀榮，李健，等.ELISA法檢測抗-HCV-IgG抗體以及FQ-PCR檢測血清HCV-RNA在丙型肝炎診斷中的應用價值[J].廣東醫學，2015，36（24）：3797-3801.

[6] 廖峭，許茹，王敏，等.廣州無償獻血人群中丙型肝炎抗體陽性者HCV基因型與病毒載量的關系[J].中國免疫學雜志，2012，28（3）：242-245.

[7] 徐成軍，張翠萍，王曉宏，等.生存質量分析在干擾素治療慢性丙型肝炎療效評價中的應用[J].中國全科醫學，2015，18（31）：3837-3841.

[8] 劉曉宇，章曉聯.丙型肝炎病毒感染人肝細胞系對多種唾液酸轉移酶和半乳糖基轉移酶表達的影響[J].中國生化藥物雜志，2015，35（10）：5-10.

[9] 李士紅，佟青，張麗坤，等.三種方法檢測丙型肝炎病毒抗體結果一致性比較[J].中國消毒學雜志，2015，32（7）：736-737.

[10] 沈紅元，陳玉蓉，沈建林，等.乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒重疊感染患者生化免疫指標變化與臨床意義[J].中華醫院感染學雜志，2015，25（13）：2889-2890，2893.

[11] 范艷，孟瑋，朱立鑫，等.化學發光酶聯免疫法檢測蘇丹紅Ⅰ[J].食品科學，2015，36（12）：209-212.

[12] 孫翠明，聞穎.丙型肝炎患者外周血單核細胞中IFNAR2 mRNA表達的研究[J].中國醫科大學學報，2013，42（11）：1016-1018，1035.

[13] 李新建.酶聯免疫法檢測血清丙肝抗體的測量不確定度的評估[J].中國輸血雜志，2013，26（7）：630-632. [14] 夏勇，李齊光，唐希才，等.間接免疫熒光法與酶聯免疫吸附試驗檢測抗核抗體對比分析[J].實用醫學雜志，2011，27（13）：2449-2451.

[15] 邵維杰，肖艷群，陳慧英，等.酶聯免疫吸附試驗定性檢測乙肝表面抗原測量不確定度評定的探討[J].檢驗醫學，2009，24（7）：545-547.

[16] 王琳琳，楊娜，袁悅，等.人葉酸受體自身抗體IgG酶聯免疫吸附試驗檢測方法的建立及評價[J].北京大學學報（醫學版），2014，46（3）：483-487.

Effect contrast observation of chemiluminescence enzyme immunoassay and ELISA for hepatitis C antibody detection

ZHOU Huaqiang
Clinical Laboratory, Renhua County People's Hospital, Guangdong, Renhua 512300, China

ObjectiveTo study the effect of chemiluminescence enzyme immunoassay and ELISA for the testing of hepatitis C antibody.Methods332 cases of hepatitis C patients cured in our hospital from December 2014 to November 2015 were randomly divided into control group and observation group with 166 cases in each. The blood of patient was extracted, and the hepatitis C antibody of patient was detected. In the control group, the positive detection rate was detected by ELISA method, and the positive detection rate of the patients in the observation group was detected by the chemiluminescence enzyme immunoassay method.ResultsThe positive detection rate of hepatitis C antibody was 97.6%, which was significantly higher than that of ELISA method. The positive rate of hepatitis C antibody was 93.4%, and the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Furthermore, the CLEIA for anti AMA-M2 antibody positive rate was 78.3%, the positive rate was significantly higher than that of ELISA method with12.7%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti 3E antibody positive rate was 72.9%, the positive rate was significantly higher than that of ELISA method with13.3%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti SP100 antibody positive rate was 38%, which was higher than that of ELISA method with 14.5%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti PML antibody positive rate was 56%, which was higher than that of ELISA 11.4%. Chemical analysis method for anti GP210 antibody positive rate was 48.2% luminescence enzyme immunoassay, the positive rate was significantly higher than that of ELISA with 6%.ConclusionThe CLEIA in hepatitis C antibody test is significantly better than that of ELISA method. It can be extended to hepatitis C antibody test.

Chemiluminescence enzyme immunoassay; Enzyme linked immunosorbent assay; Hepatitis C antibody

R446.6

B

2095-0616（2016）19-125-03

2016-06-14）