痰標本涂片鏡檢與細菌培養結果符合性的分析

汪林嬌易 薇趙曙剛

1.云南省德宏州人民醫院檢驗科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民醫院藥劑科，云南芒市 678400

痰標本涂片鏡檢與細菌培養結果符合性的分析

汪林嬌1易 薇1趙曙剛2

1.云南省德宏州人民醫院檢驗科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民醫院藥劑科，云南芒市 678400

目的比較痰標本涂片革蘭染色鏡檢結果與細菌培養結果之間的符合性，了解痰涂片鏡檢的臨床價值。方法選取我院2015年9月1日～11月30日住院及門診患者的865例痰標本。將臨床送檢的865例痰標本進行培養前的涂片鏡檢，根據涂片鏡檢結果，將痰標本分為A、B、C三大類。同時對痰標本進行培養鑒定，分析涂片鏡檢結果與細菌檢出率之間的關系。結果865例痰標本中，涂片合格標本695例，占80.3%；不合格標本170例，占19.7%。在涂片合格的標本中，有525例檢出627株細菌，細菌檢出率為75.5%。合格痰標本涂片結果與細菌培養結果的符合率為82.4%。在170例涂片不合格的標本中，43例痰標本檢出60株細菌，細菌檢出率為25.3%。結論痰涂片能較早作出預測性報告，作為診治呼吸道感染的初步依據，指導臨床合理用藥。

痰涂片；培養；痰標本；分析

下呼吸道感染患者標本采集臨床通常采取自然咳痰法采集痰標本，痰標本容易受口腔正常菌群的污染，從而導致病原菌的檢出率降低，同時也會使細菌培養結果和臨床癥狀不符合的情況出現。隨著醫療水平的不斷發展，痰涂片鏡檢在臨床上得到了廣泛地應用，可有效保障標本質量，提升培養結果的準確性與科學性，幫助臨床醫師了解患者病情變化，并指導臨床用藥[1]。本研究選取我院所收集的865例痰標本，在細菌培養前先進行涂片革蘭染色鏡檢，并和細菌培養結果做對照分析。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2015年9月1日～11月30日間我院住院及門診患者的痰標本。門診患者痰標本主要選取懷疑有下呼吸道感染疾病患者的痰標本，住院患者痰標本主要選取存在肺炎、慢性支氣管炎、支氣管擴張等下呼吸道感染的患者的痰標本。

1.2 儀器和試劑

VITEK2－Compact全自動微生物鑒定儀。珠海貝索公司生產的快速革蘭氏染色液，由法國生物梅里埃公司生產的巧克力瓊脂培養基、哥倫比亞血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板。

1.3 方法

1.3.1 痰標本的預處理 痰標本培養前的處理含有大量膿液或者血液和黏稠的痰，先用無菌生理鹽水將痰洗滌3次，再將痰標本加入等量的胰酶溶液（PH=7.6），放置于35℃培養箱90min待痰標本液化后再進行接種。外觀正常的標本可直接接種。

1.3.2 痰標本涂片鏡檢 痰標本直接涂片檢查將痰標本含有膿或者帶有血液的部分，涂成薄片待干，用快速革蘭染液染色鏡檢。痰標本直接涂片鏡檢標準分類按《全國臨床檢驗操作規程》第二版相關內容、《實用臨床微生物診斷學》（蔡文誠相關章節）[2-3]結合本室的實際工作，將痰涂片結果分為ABC三類：A類低倍鏡視野下白細胞不低于25，鱗狀上皮細胞不超過10，屬于較理想標本；B類低倍鏡下白細胞不低25，鱗狀上皮細胞大于10但不超過25，細菌種類不低于3種，屬于可接受標本；C組低倍視野下鱗狀上皮細胞不低于25，屬于不合格痰標本。A、B屬于合格痰標本，適合做細菌培養，C為不合格痰標本，不適合做細菌培養。

1.3.3 細菌培養 普通細菌培養將標本前處理好的痰標本接種于巧克力瓊脂平板、哥倫比亞血平板、麥康凱瓊脂平板，放置5%二氧化碳培養箱，35℃培養18～24h，直接涂片革蘭染色鏡檢如檢出真菌孢子或菌絲者應加種沙保羅瓊脂培養基，觀察菌落特征對主要的病原菌和致病菌或優勢生長細菌，經梅里埃公司VITEK2-Compact微生物鑒定儀鑒定到種并進行體外藥物敏感性實驗。

1.4 統計學方法

采用SPSS16.0統計軟件進行數據處理及統計學分析，計數資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 痰培養標本的合格率

根據痰標本涂片鏡檢三分類標準，涂片鏡檢合格的痰標本695例，合格率為80.3%，其中A類痰標本365例，占總數的42.2%，B類痰標本330例，占總數38.2%，涂片鏡檢不合格痰標本C類170例，占總數的19.7%。

2.2 痰標本涂片鏡檢ABC三類與細菌的檢出率的關系

865例痰標本中有568例標本檢出致病菌或優勢生長菌，陽性檢出率為65.7%，涂片鏡檢合格痰標本有695例，涂片鏡檢合格的痰標本檢出細菌數為525例，檢出率為75.5%（525/695），涂片不合格痰標本有170例，檢出細菌43例，檢出率為25.3%（43/170）。經χ2檢驗，A、B、C三類標本細菌檢出率存在顯著差異（χ2=162.460，P＜0.01），經χ2分割AB兩類涂片合格標本的細菌檢出率與C類涂片不合格標本的細菌檢出率有顯著差異（χ2=152.946，P＜0.01），A類標本細菌檢出率與C類標本細菌檢出率有顯著差異（χ2=153.721，P＜0.01），B類標本細菌檢出率與C類標本細菌檢出率有顯著差異（χ2=89.24，P＜0.01），見表1。

表1 痰標本涂片分類和細菌檢出率

2.3 合格痰標本涂片鏡檢結果與細菌培養的符合率

695例合格痰標本共檢出致病菌627株，涂片鏡檢合格痰標本涂片與細菌培養結果總符合率為82.4%。在627株陽性標本中檢出革蘭陰性菌395株（占63.0%)，革蘭陽性菌158株（25.2%）檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌及糞腸球菌；真菌74株（11.8%）,包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養出致病菌的占10.5%，以鏈球菌屬（28.5%）、腸桿菌科細菌（20.8%）、白念珠菌（18.5%）和非發酵菌(15.8%)為主，涂片檢出細菌而細菌培養未培養出致病菌的為9.5%，其痰涂片鏡檢結果與細菌培養結果比較，見表2。

表2 695例合格痰標本涂片鏡檢與細菌培養的結果比較

3 討論

痰標本的直接涂片染色鏡檢，可以通過鏡檢結果判斷痰標本是否合格，可以通過鏡檢結果來作為細菌培養的依據。痰標本的質量是確保痰培養結果準確性的首要前提，只有在痰標本合格基礎上培養的結果，才可能準確[4]。在865例臨床痰標本中，痰涂片鏡檢695例合格，合格率為80.3%，其合格率稍高于楊小琴[5]的報道，培養陽性檢出率為75.5%（525/695），不合格標本170例，培養陽性檢出率為25.3%（43/170），兩者比較差異有顯著性（χ2=152.946，P＜0.01）。因此可見，在痰涂片鏡檢合格的標本，培養陽性率最高，痰標本涂片鏡檢對痰標本的質量進行了嚴格控制，提高了痰標本的培養陽性檢出率。對于涂片不合格的痰標本，可以聯系臨床要求重新留取痰標本，提高痰培養的檢出率。影響痰標本涂片的合格率主要由以下幾點原因造成：臨床醫護人員對痰標本的采集沒有引起重視，沒有對患者給予說明和指導，從而導致患者沒有留取清晨深部的痰液，留取的是隨機的唾液。患者采集標本后沒有及時送檢或檢驗人員沒有立即處理接種標本，痰液受到上呼吸道正常菌群的污染。微生物室檢驗人員由于工作責任心和技術差異沒有挑取痰標本的膿性或帶血的部分，涂片厚薄程度、涂片染色時間等因素。

695例合格痰標本中涂片與細菌培養結果的總符合率為82.4%與Pagano等[6-8]報道符合率74.2%～80.2%基本一致，但較賀靖冬等[9]報道符合率的65.6%結果偏高。證明了合格痰標本涂片與培養結果的符合率有較高的一致性，具有預先判斷的輔助價值。695例合格痰標本共檢出627株致病菌，檢出的菌種與臨床主要病原菌一致，真菌檢出率為11.8%，主要為ICU、呼吸科和感染科。因酵母（樣）菌生長緩慢，而臨床對培養的需要又急迫，故可通過涂片檢查陽性者初報臨床，并有意識地將標本培養延長觀察，以免漏檢[10]。

痰涂片的鏡檢結果與痰培養結果不符的原因分析 涂片檢出細菌而培養未檢出致病菌主要的原因可能是患者在留取標本前已使用了抗菌藥物，抑制了致病菌的生長；另一原因可能為實驗室的條件有限或培養時間不足達不到苛養菌或真菌的生長條件。涂片未見細菌而培養出致病菌，其中檢出的致病菌主要是革蘭陰性桿菌和真菌，主要原因可能為標本含菌量少，涂片時只能選取極少一部分標本，沒有取到含有細菌的部分；當痰標本黏稠時，細菌被黏液和膿細胞包裹，鏡檢無法清晰地看到其形態，造成漏檢[11]。

綜上所述，痰涂片革蘭染色可以篩選出合格的痰標本，提高痰培養的細菌檢出率。痰標本的細菌學檢查對下呼吸道感染的診斷有重要意義，痰標本的直接涂片鏡檢可提高下呼吸道感染病原學診斷的特異性和敏感性[12]。可以較快的作出預測性報告，及時指導臨床合理用藥。

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Analysis on the compliance of sputum smears microscopy and bacterial culture results

WANG Linjiao1YI Wei1ZHAO Shugang2
1.Clinical Laboratory,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China；2.Department of Pharmacy,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China

ObjectiveTo compare the compliance of sputum specimens from gram staining and bacterial culture,and to evaluate the clinical value of sputum smear.Methods865 sputum specimens of inpatients and outpatients in Dehong People's Hospital from September 1st to December 30th 2015 were selected as the study objects.These 865 sputum specimens for clinical inspection were examined by gram staining and sputum smear before bacterial culture,and they were divided into three groups according to smear results.Meanwhile sputum specimens were cultured and identified.The correlation between sputum smear and bacterial culture on the bacterial detection rate was analyzed.ResultsThe qualified rate of sputum smear from 865 specimens was 80.3% (695/865),and unqualified rate was 19.7% (170/865).627 strains of bacteria were detected in 525 out of 695 qualified smears specimens.The detection rate was 75.5%.The coincidences rate of qualified sputum smear and culture was 82.4%.60 strains of bacteria were detected in 43 sputum specimens from 170 unqualified specimens.ConclusionSputum smear can provide early preliminary evidence for diagnosis of respiratory tract infections and guide rational drug use in the clinic.

Sputum smear;Culture;Sputum specimen;Analysis

R446.5

B

2095-0616（2016）19-139-03

2016-07-16）