原花青素對D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中IL-6和TNF-α水平的影響

宋 凌

商丘醫(yī)學高等專科學校 商丘 476100

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原花青素對D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中IL-6和TNF-α水平的影響

宋 凌

商丘醫(yī)學高等專科學校 商丘 476100

目的 探討原花青素(PC)對D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平的影響。方法 50只健康6月齡雄性Wistar大鼠隨機均分為陰性對照組、衰老模型組、維生素E(VE)組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組，每組10只，分別給予相應處理后，采用ELISA測定各組大鼠小腦組織中IL-6、TNF-α水平。結(jié)果 VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型組(P<0.05)；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(P<0.05)。結(jié)論 PC可能通過改善免疫功能而延緩大鼠小腦組織的衰老。

原花青素；衰老大鼠；小腦；白介素-6；腫瘤壞死因子-α

原花青素(proanthocyanidins，PC)是一種生物類黃酮，具有明顯的抗氧化、抗炎及抗腫瘤等作用[1-2]，但PC改變衰老大鼠小腦相關(guān)免疫反應指標的研究尚無報道。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定D-半乳糖至衰老大鼠小腦組織中白介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，觀察原花青素對衰老大鼠小腦免疫功能的改變作用。

1 材料與方法

1．1 實驗動物及分組 50只健康6月齡雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量309～347 g，購自河南省實驗動物中心，采用數(shù)字表法隨機均分為5組：陰性對照組、衰老模型組、VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組。

1．2 主要藥品、試劑及儀器 PC(安陽晶森天然產(chǎn)物有限公司，批號：12024129)；維生素E(vitamin E，VE)注射劑(上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號：120112)；IL-6、TNF-α ELISA試劑盒(批號分別為：20120820、20120902，美國Peprotech公司)；全自動酶聯(lián)免疫分析儀(北京中西遠大科技有限公司)。

1．3 給藥方法 陰性對照組：皮下注射3.0 mL/kg的0.85% NaCl溶液；衰老模型組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和0.85% NaCl溶液1.5 mL/kg；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和相應濃度的藥物1.5 mL/kg。1次/d，連用12周。

1．4 標本采集及指標測定 標本采集：各組大鼠于末次給藥1 h后，用1%戊巴比妥鈉(0.4 mL/kg)腹腔注射麻醉，快速常規(guī)取出小腦，4 ℃ 0.85% NaCl溶液沖洗，濾紙吸干，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。指標測定：取適量小腦組織，稱重，制勻漿，4 ℃、3 500 r/min離心10 min，取上清液，并按試劑盒說明書檢測TNF-α、IL-6水平。

2 結(jié)果

衰老模型組IL-6、TNF-α水平高于陰性對照組(P<0.001)；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型組(P<0.05)；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠小腦組織中IL-6、TNF-α 水平比較

注：與陰性對照組比較，1)P<0.05；與衰老模型組比較，2)P<0.05；與VE組比較，3)P<0.05；與PC 160 mg/kg組比較，4)P<0.05

3 討論

免疫反應已被證實廣泛存在于衰老這一病理生理過程中，且大量免疫因子在衰老的進展過程中發(fā)揮著重要作用[3]。隨著免疫學和衰老相關(guān)機制研究的進展，原來越多的研究認為，免疫功能隨著衰老的進展逐漸下降，而免疫功能的改變在衰老過程中具有重要地位，通過提高機體的免疫功能能夠延緩衰老的進展[3-4]。D-半乳糖是目前衰老機制研究中最常用的造衰老藥物，具有縮短實驗周期、造模成功率高、致衰老機制明確等優(yōu)點，因此，本實驗選擇該模型進行研究。IL-6是一種免疫調(diào)節(jié)因子，主要來自T、B淋巴細胞及單核巨噬細胞，正常機體內(nèi)有一定程度的表達，且在維持機體的正常免疫功能和神經(jīng)內(nèi)分泌功能等生物學行為中發(fā)揮作用，而異常高水平的IL-6則會導致機體免疫和神經(jīng)內(nèi)分泌功能的紊亂，已被證實其參與了機體的缺血再灌注損傷、衰老、心肌梗死等病理生理過程[5-6]。TNF-α是一種由T淋巴細胞和活化性巨噬細胞分泌的細胞因子，具有調(diào)節(jié)細胞免疫以及參與衰老、腫瘤進展等病理生理過程的多重作用。在機體衰老過程中，TNF-α能夠通過結(jié)合其受體而通過多條信號轉(zhuǎn)導途徑導致機體自由基過生、細胞凋亡增加等，從而造成機體的衰老[3，6]。本實驗結(jié)果顯示，衰老模型組IL-6、TNF-α水平高于陰性對照組(P<0.001)，提示D-半乳糖造模成功，IL-6、TNF-α參與了機體的衰老；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平低于衰老模型組，說明PC能夠增強衰老大鼠小腦組織的免疫功能；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平相近，說明一定量的PC能夠達到VE一樣的增強大鼠免疫功能作用；PC 80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平高于VE組、PC 160 mg/kg組，提示PC的作用可能具有一定的劑量依賴性，PC劑量越高，對免疫作用的增強越明顯。總之，PC可能通過改善免疫功能而延緩大鼠小腦組織的衰老；PC的抗衰老作用可能有一定的劑量依賴性。

[1] 宋強，羅蘭，楊拯，等．原花青素抗氧化應激效應對大鼠肢體缺血再灌注后腸黏膜的保護作用[J]．世界華人消化雜志，2015，23(9)：1 454-1 459．

[2] 鐘越，齊玲，任曠，等．越桔原花青素通過線粒體通路誘導膠質(zhì)瘤細胞凋亡的機制研究[J]．中國藥學雜志，2015，50(6)：507-511．

[3] 周先云，潘朝旺．九龍蟲對衰老小鼠免疫功能的影響[J]．中國老年學雜志，2015，35(5)：1 331-1 333．

[4] Bektas A，Zhang Y，Lehmann E，et al．Age-associated changes in basal NF-κB function in human CD4+ T lymphocytes via dysregulation of PI3 kinase[J]．Aging(Albany NY)，2014，6(11)：957-974．

[5] 楊東斌．原花青素對大鼠腦缺血再灌注腦損傷IL-6和ET-1的影響[J]．中國實用神經(jīng)疾病雜志，2013，16(9)：44-45．

[6] 鄭世鐸，楊世彰，段永強，等．抗衰益智膠囊對衰老大鼠腦組織三磷酸腺苷酶活性和血清白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21(7)：40-42．

(收稿2016-03-07)

Effects of proanthocyanidins on IL-6 and TNF-α in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose

SongLing

ShangqiuMedicalCollege，Shangqiu476100，China

Objective To investigate the effects of proanthocyanidins(PC)on the levels of interleukin-6(IL-6)and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose.Methods Fifty healthy male Wistar rats which were 6 months were divided into 5 groups at random：the negative control group，the aged model group，the vitamin E(VE)group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group，and each group had 10 rats.After the commensurate handling for rats in the five groups，ELISA method was used to detect the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats in the 5 groups.Results Compared with the aged model group，the levels of IL-6 and TNF-α were lower in the cerebellum of rats in the VE group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group(P<0.05).There was no significant difference in the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats between the PC 160 mg/kg group and the VE group(P>0.05).Compared with the PC 160 mg/kg group and the VE group，the levels of IL-6 and TNF-α were higher in the cerebellum of rats in the PC 80 mg/kg group(P<0.05).Conclusion PC can reduce the immune function，and delay the aging of cerebellum of rats．

Proanthocyanidins；Aged rats；Cerebellum；Interleukin-6；Tumor necrosis factor-α

R-332

A

1673-5110(2016)24-0041-02