膠質瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表達及意義

王新偉

河南河南平頂山市第一人民醫院神經外二科 平頂山 437000

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膠質瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表達及意義

王新偉

河南河南平頂山市第一人民醫院神經外二科 平頂山 437000

目的 探討p57/Kip2 和細胞周期素cyclinD1在人腦膠質瘤中的表達及意義。方法 收集54例膠質瘤和 12例正常腦組織標本，應用免疫組化方法檢測膠質瘤組織及其正常腦組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表達水平。結果 免疫組化方法結果顯示膠質瘤組織中cyclinD1 蛋白水平顯著高于正常腦組織，而p57/Kip2的表達水平顯著低于正常腦組織，且Pearson相關系數檢驗提示，膠質瘤組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表達水平呈負相關(P<0.01)。結論 p57/Kip2膠質瘤組織中表達顯著下調，cyclinD1 蛋白在膠質瘤組織中異常高表達，且二者表達水平呈顯著負相關(r=-0.782，P<0.01)。

膠質瘤；p57/Kip2；cyclinD1

與其他腫瘤一樣，膠質瘤的發生和發展與基因的異常表達密切相關。p57/Kip2基因具有抑制細胞增殖與細胞的、分化誘導細胞凋亡以及與基因組印記有關[1]。cyclinD1表達異常可導致細胞異常增殖，目前已被證實與多種惡性腫瘤的發生及發展相關[2]。p57/Kip2 和cyclinD1 在膠質瘤組織中的表達及相關性研究報道不多。本研究通過檢測p57/Kip2 和cyclinD1在膠質瘤組織中的表達，探討p57/Kip2 和cyclinD1 在膠質瘤發病機制中的作用。

1 資料與方法

1．1 研究對象 選擇2007-01—2013-10平頂山市第一人民醫院神經外科手術切除的54例膠質細胞瘤手術標本(腫瘤組)，54例均有病理檢查支持，男31例，女23例；年齡32～77歲。入組病例均屬新診斷病例。病理診斷及分級參照WHO神經系統腫瘤分類標準(2007年版)：Ⅱ級28例。Ⅲ級18例，Ⅳ級8例。另選取12例經手術切除的正常腦組織的患者(正常組)，男7例，女5例；年齡38～57歲。標本切除后，置-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 HE染色：具體操作步驟：二甲苯15 min(分別操作2次)，無水乙醇5 min(分別操作2次)，95%乙醇 5 min(分別操作2次)，80%乙醇 5 min，水洗，蘇木精染色 5 min，流水沖洗1～3 s，1%鹽酸酒精分化1 s，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5min(分別操作2次)，無水乙醇 5 min，95%乙醇5min，二甲苯5 min(分別操作2次)，中性樹膠封片。

1．2．2 免疫組織化學染色：所有組織切片進行常規免疫組織化學染色，包括以下步驟：脫蠟，水化，抗原修復，封閉，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育4 ℃過夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB顯色，蒸餾水漂洗，1%鹽酸酒精分化，蘇木素復染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。

1．2．3 免疫組化結果判定：在光學顯微鏡下對組織切片進行觀察，閱片采取2位病理科醫師雙盲閱片，每張切片取6個高倍視野(×400)。對視野內陽性細胞計數。陽性表達細胞的判斷標準：①完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽性范圍：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；二者相加分數為判定結果：陰性(-)<2分，弱陽性(+)2～3分，中度陽性(++)4～5分，強陽性(+++)6～7分。

1．3 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件進行處理。采用Wilcoxon符號秩檢驗比較配對設計的等級資料。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 2組p57/Kip2表達檢測結果比較 細胞染色定位于細胞核，胞核呈棕黃色為表達陽性。腦膠質瘤組織中p57/Kip2總陽性表達率和強陽性表達率分別為14.8%(8/54)、0(0/54)；正常腦組織為 75%(9/12)、25%(3/12)。根據Wilcoxon秩檢驗結果看出，腦膠質瘤及正常腦組織中p57/Kip2的表達差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組p57/Kip2蛋白表達情況比較 (n)

注：與正常組比較，#P<0.05

2．2 2組cyclinD1表達的檢測結果比較 細胞染色定位于細胞核和胞漿，細胞呈彌漫棕黃色為表達陽性。腦膠質瘤組織中cyclinD1總陽性表達率和強陽性表達率分別為72.2%(39/54)、42.6%(23/54)；正常腦組織為 16.7%(2/12)、0。根據Wilcoxon秩檢驗結果看出，腦膠質瘤及正常腦組織中cyclinD1的表達差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組cyclinD1蛋白表達情況比較 (n)

注：與正常組比較，#P<0.05

2．3 p57/Kip2和cyclinD1蛋白在膠質瘤組織中的表達具有相關性 采用Pearson相關分析，結果提示，膠質瘤組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白表達水平呈負相關(r=-0.782，P<0.01)。

3 討論

膠質瘤是中樞神經系統最常見的惡性腫瘤，預后差，準確的病理診斷是臨床有效治療的前提。研究癌基因和抑癌基因在膠質瘤中的表達情況已成為探索膠質瘤發生、發展和預后的重要手段[3]。目前臨床上利用免疫組織化學技術檢測某些相關因子輔助病理學診斷，為準確地評估腫瘤的惡性程度提供客觀依據。

p57/Kip2 基因屬于INK4家族。p57/Kip2是Matsuoka等[4]于1995年發現、定位于人染色體11p15.5、作用于細胞周期的的抑癌基因。許多腫瘤組織中存在p57m2基因變異率低而蛋白表達下降或失活率高的現象，這與p57/Kip2蛋白表達水平除取決于基因外還要受轉錄、翻譯、翻譯后修飾等多個環節的影響有關[5]。

在細胞周期的調控中cyclinD1蛋白扮演了重要的角色。在細胞周期過程中，cyclinD1的表達受到嚴格的調控：cyclinD1的合成始于細胞 G0 期，并在G1 期達高峰，當細胞進入 S期后cyclinD1開始降解，在隨后的細胞周期中持續低水平表達。cyclinD1的異常表達能加快細胞周期進程，并促進細胞增殖，最終導致腫瘤發生[2]。

Cyclin、CDK和CKI共同控制真核細胞周期。CDK是細胞周期調控的核心裝置，激發G1～S期、G2～M期的轉換。Cyclin是CDK的正性調控因子，CKI是CDK的負性調控因子，p57/Kip2屬于CKI家族。本研究發現，p57/Kip2在膠質瘤組織中的表達水平顯著下調，cyclinD1 在膠質瘤組織中的表達水平顯著上調，提示二者在膠質瘤的發生發展中起了相反的作用。

[1] Tsugu A，Sakai K，Dirks PB，et al．Expression of p57 potently blocks the growth of human astrocytomas and induces cell senescence[J]．Am J Pathol，2000，159(3)：919-932．

[2] Casimiro MC，Velasco M，Aguirre C，et al．Overview of cyclinD1 function in cancer and the CDK inhibitor landscap：past and present[J]．Expert Opin Investing Drugs，2014，23(3)：295-304．

[3] 劉承基．細胞分子神經外科-神經外科的新領域[J]．中華神經外科雜志，2004，20(1)：1-5．

[4] Matsuoka S，Edwards MC，Bal C，et al．p57/Kip2 a structurally distinct member of the p21ClPl CDK inhibitor family，is a candidate tumor suppressor gene[J]．Genes Dev，1995，9(6)：650-662．

[5] Ito Y，Takeda T，Sakon M，et al．Expression of p57/Kip2 protein in hepatocellular carcinoma[J]．Oneology，2001，61(3)：221-225．

(收稿2016-02-10)

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1673-5110(2016)24-0096-02