無創DNA檢測在產前篩查唐氏綜合征中的準確性

張紅利

鄭州大學第二附屬醫院 鄭州 450014

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無創DNA檢測在產前篩查唐氏綜合征中的準確性

張紅利

鄭州大學第二附屬醫院 鄭州 450014

目的 探討無創產前檢測(non-invasiveprenatal testing，NIPT)在孕婦產前篩查唐氏綜合征(Downsyndrome，DS)中的普及應用。方法 通過采集孕婦外周血，提取胎兒游離DNA，結合生物信息進行比對分析，最終得出胎兒染色體異常的風險率，DS高危的孕婦再行羊膜腔穿刺術進行胎兒染色體核型分析。結果 1 648例孕婦中共檢測出8例DS高風險胎兒，陽性率占0.485%(8/1648)，經羊水染色體核型分析證實8例為DS，NIPT用于孕婦檢測DS胎兒的敏感性為100% ，特異性100% 。NIPT還檢測出5例18-三體染色體高風險，2例性染色體異常(1例45，X0；1例47，×××)均行羊水穿刺術，7例全部確診胎兒染色體核型異常。NIPT應用于1648例孕婦產前檢測，其中共有15例進行有創性產前診斷，穿刺率為0.91%。結論 NIPT用于孕婦檢測DS胎兒具有高敏感性和特異性。

無創產前檢測：唐氏綜合征：胎兒游離DNA：

無創DNA檢測(non-invasive prenatal testing，NIPT)是通過采集孕婦的外周血，從外周血中提取胎兒游離DNA，結合生物信息進行比對分析，最終得出胎兒染色體異常的風險率。最合適的檢測時間是在懷孕12～22+6孕周。本研究將無創DNA用于孕婦的唐氏綜合征(Downsyndrome，DS)胎兒產前篩查，如得到的結果為高風險，雖然基本上可確定胎兒患有三體疾病，但為了排除極小幾率的胎盤嵌合情況，會建議孕婦再進行有創的羊水穿刺，結合染色體核型分析結果，做出最終的診斷報告。本研究主要探討無創DNA檢測技術在產前診斷DS胎兒中的準確性。

1 對象與方法

1．1 研究對象 選取2015-01—2015-12于本院產科門診咨詢的單胎妊娠的孕婦1 648例，預產年齡19～44歲，其中<35歲888例，≥35歲760例；孕周12～23 周。研究對象均知情同意。

1．2 方法 1 648例孕婦均采集外周靜脈血5～10 mL，4 ℃ 1 600 g/min離心10 min，分離血漿，后于4 ℃ 16 000 g/min離心 10 min，去除殘余細胞，抽取血漿 3～5 mL，置EP管內-80 ℃干冰保存，送往武漢華大基因臨床檢驗中心進行檢測。對檢測結果高風險者應用羊水穿刺介入性產前診斷方法進行確診。

2 結果

1 648例孕婦中NIPT共檢出DS高風險8例，陽性率0.485%，檢測出18三體5例，45，X0 1例；47，XXX 1例共7例其他染色體非整倍體高風險，在有產前診斷資質的醫院進行介入性產前診斷分析，并均已確診。1 648例孕婦中，共有15例進行有創性產前診斷，穿刺率0.91%(15/1 648)。其中<35歲7例，≥35歲8例。15例確診的孕婦通過我院門診咨詢或電話隨訪最終均選擇終止妊娠，其他孕婦進行妊娠結局隨訪，均未發現有錯檢和漏檢的DS患兒，NIPT檢測孕婦DS胎兒的敏感性為100%(8/8)，特異性為100%(1 648/1 648)。1 648例無創DNA檢測結果見表1。

表1 1 648例無創DNA檢測結果 (n)

3 討論

唐氏綜合征即21-三體綜合征，又稱先天愚型，是由染色體異常而導致的疾病。60%患兒在胎兒早期即流產，存活者有明顯的智能落后、特殊面容、生長發育障礙和多發畸形[1]。由于人體第21號染色體為人體最小染色體，在受精卵減數分裂和有絲分裂過程中最易發生三倍體的突變，故21-三體是胎兒非整倍體異常的最常見類型，每年的發病率為1/800～1/600[2]，避免患兒出生的最好辦法就是產前篩查與診斷，該類型疾病也是產前篩查的重中之重。

對35歲以下單胎妊娠孕婦目前我院采用孕11～14周通過超聲NT(軟指標)測量，再于孕14～20+6周通過檢測孕婦血清β-HCG、AFP的濃度行孕中期唐氏綜合征篩查，但其準確率只有70%～85%[3]，假陽性高。對篩查高風險者再進行侵入性產前診斷檢出率較低[4]，且為有創檢查，存在流產、感染等風險[5]。隨著國家二胎政策的放開，高齡孕婦的人數急劇增多。對于高齡孕婦的該項疾病篩查，目前臨床上主要靠羊水穿刺進行有創診斷，但由于孕婦及家屬對于有創操作的擔心、恐懼，致使一部分孕婦不愿檢查，以致造成漏診，給家庭和社會帶來巨大負擔。如何采取有效的方法來降低假陽性率并減少不必要的有創操作，成為臨床上努力研究的方向，而無創DNA基因篩查的出現正好彌補了醫學領域在該方面的空缺，NIPT能夠在不同年齡人群替代傳統三體綜合征篩查方法。

本研究在1 648例孕婦行無創DNA檢測中，發現DS高風險8例(18三體5例，45，XO 1例，47，XXX 1例)7例其他染色體非整倍體高風險，共有15例進行有創性產前診斷，穿刺率為0.91%，因此無創DNA檢測應用于孕婦的產前篩查可大大降低穿刺率 。15例染色體非整倍體高風險孕婦經羊水產前診斷確診15例，無假陽性率。在本研究中NIPT檢測孕婦DS胎兒的敏感性為100%(8/8)，特異性為100%(1 648/1 648)。華大基因在國內進行的一項大規模多個地區多中心臨床研究結果顯示該技術準確率達到 99.96%[6]。本研究也證實了該技術的高度敏感性和特異性。

該技術幾乎為零創傷，準確度高，操作簡單易行，但也存在一定的局限性：(1)如該方法不適宜檢測：染色體中的嵌合體型、易位型、微缺失、微重復等結構性異常(無創DNA基因篩查無法檢測微小的片段缺失、重復)；懷有多胞胎的孕婦(無創NDA基因篩查目前僅適于單胎或雙胎不合并其他任何異常的孕婦)；孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者(夫妻雙方任何一方染色體異常均無法做無創NDA基因篩查)；孕婦1 a之內接受過異體輸血、4周內接受過引入外源DNA的免疫治療、移植手術、干細胞治療等(這些情況均會造成孕婦體內殘留第三者的DNA片段，從而造成無創NDA基因篩查結果準確性不高，易錯篩)。(2)鑒于當前醫學檢測技術水平的限制和孕婦個體差異等不同原因，有可能出現假陽性或假陰性。(3)對于極少數血漿中胎兒游離DNA濃度過低的孕婦，存在失敗可能性 ，需再次抽血取樣，檢測周期延長。(4)該檢查和血清學唐篩比較費用較高，相差10倍左右，一部分孕婦和家屬難以接受。所以在行無創基因檢測前，應和孕婦及其家屬做到充分、細致、詳細的溝通，解釋目前無創性 DNA 產前診斷的局限性和相應的風險，由孕婦知情選擇。

普通的血清學唐氏篩查因準確性只有60%～70%，極易錯篩漏篩，對于錯篩的可以進一步用無創NDA基因篩查或者羊水穿刺的核型分析來進一步檢查胎兒是否存在三體的疾病，但對于漏篩卻極易造成智力有問題的嬰兒出生。因為21-三體、18-三體、13-三體這三種疾病是在正常孕婦人群中發病率最高的，智力的影響也很大，故建議懷孕的孕婦盡量都做無創NDA基因篩查，以免有癡呆兒的出生。羊水穿刺的核型分析目前還是我國醫學產前診斷的金標準，但有創穿刺可能會造成胎兒的一些不必要傷害，如早產，宮內感染和小幾率的流產幾率，所以建議一些珍貴兒的孕婦盡量先做無創NDA基因篩查，若有問題再做羊水穿刺，減少人為性對胎兒的傷害。對于高齡孕婦來說，不能做普通唐氏篩查進行檢測，羊水穿刺風險太高，無創NDA基因篩查是一個最好的選擇。

綜上所述，孕婦進行產前無創DNA基因產前篩查唐氏綜合征，可降低侵入性產前診斷的風險，是醫學發展的趨勢。就目前研究來看，結果可靠，技術方法可行，可緩解絕大部分孕婦的焦慮[7]。隨著技術的發展，成本的降低，費用的下降，無創DNA檢測取代傳統血清唐氏綜合征的篩查是發展的必然趨勢，值得大力推廣和普及，從而提高我國出生人口素質。

致謝：深圳華大基因武漢分公司提供部分數據及資料，對此致以深切感謝!

[1] 段嫦麗，潘麗，閔香．珠海市 21 三體綜合征診斷情況分析[J]．廣東醫學，2012，33(16)：2 449-2 451．

[2] Driscoll DA，Gross S．Clinical practice prenatal screening for aneu-ploidy[J]．N Engl J Med，2009，360(24)：2 556-2 562．

[3] 梁麗笙，呂麗吟．妊娠中期唐氏綜合征產前篩查分析[J]．中國醫學創新，2012，9(7)：153-154．

[4] 柳愛華，宋奉俠，郝明革，等．母血清篩查21-三體、18-三體高風險病例的產前診斷[J]．中國產前診斷雜志：電子版，2012，4(2)：8-10．

[5] Tabor A，Vestergaard CH，Lidegaard ?．Lost rate after chorionic villus sampling and amniocentesis：an 11-year national registry study[J]．Ultrasound Obstet Gynecol，2009，34(1)：19-24．

[6] Dans S，Wang W，Ren J，et al．Clinical application of massively parallel sequencing-based prenatal noninvasive fetal trisomy test for trisomies 21 and 18 in 11，105 pregnancies with mixed risk factors[J]．Prenat Diagn ，2012，32(13)：1 225-1 232．

[7] 張磊，王威．無創產前診斷基因檢測胎兒染色體非整倍體技術應用進展[J]．中國產前診斷雜志：電子版，2012，4(3)：32．

(收稿2016-07-15)

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1673-5110(2016)24-0108-03