TGF-β1在人腦星形膠質(zhì)細胞瘤中的表達

王 濤 李 文

河南平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科 平頂山 467000

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TGF-β1在人腦星形膠質(zhì)細胞瘤中的表達

王 濤 李 文

河南平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科 平頂山 467000

目的 檢測轉(zhuǎn)換生長因子β1蛋白(TGF-β1)在人腦膠質(zhì)細胞瘤組織中的表達，探討其作用。方法 選擇人腦膠質(zhì)細胞瘤組織，采用免疫組化檢測TGF-β1的表達水平。結(jié)果 TGF-β1在人腦膠質(zhì)細胞瘤組織中的陽性表達率比正常腦組織明顯增高，TGF-β1的表達量隨著膠質(zhì)細胞的惡變有所增加。結(jié)論 TGF-β1的陽性表達率與瘤細胞含量有關(guān)，與臨床病理特征無關(guān)。

人腦膠質(zhì)細胞瘤；TGF-β1；免疫組化；病理特征

轉(zhuǎn)換生長因子β1蛋白(TGF-β1)于30多年前被發(fā)現(xiàn)。該蛋白幾乎在所有細胞中都有表達。TGF-β1與多種蛋白結(jié)合成復(fù)合體被分泌到細胞外基質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1影響細胞的增殖、分化、遷移、黏附、凋亡以及胚胎發(fā)育，甚至參與人類多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，包括心血管、纖維化、生殖、受傷和腫瘤[1]。

1 資料與方法

1．1 研究對象 選擇2009-01—2014-12平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科經(jīng)手術(shù)切除的15例星形膠質(zhì)細胞瘤手術(shù)標(biāo)本(腫瘤組)，均有病理檢查支持，其中男9例，女6例；年齡34～69歲。所有病例術(shù)前均未經(jīng)治療。病理診斷及分級參照2007年WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)：15例病例中Ⅱ級8例，Ⅲ級4例，Ⅳ級3例。另選取15例經(jīng)手術(shù)切除的正常腦組織的患者為對照(正常組)，男11例，女4例；年齡33～49歲。標(biāo)本切除離體后，6 h內(nèi)放入-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 常規(guī)HE染色：按下面步驟依次進行：二甲苯15 min，二甲苯15 min；無水乙醇5 min，無水乙醇5 min，95%乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，80%乙醇5 min，水洗，蘇木精染核 5 min，流水稍洗1～3 s，1%鹽酸酒精分化，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5 min，95%乙醇5 min，無水乙醇 5 min，95%乙醇5min，二甲苯5 min，二甲苯5 min，中性樹膠封片。

1．2．2 免疫組織化學(xué)染色：組織切片進行脫蠟、水化處理，抗原修復(fù)，封閉，置于PBS中10 min，一抗(兔IgG)4 ℃過夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB顯色，蒸餾水漂洗，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。1．2．3 判定免疫組化的結(jié)果：組織切片在光學(xué)顯微鏡下觀察，由本院2位病理科醫(yī)師進行雙盲閱片，每張切片隨機取6個高倍視野(×400)。對視野內(nèi)陽性細胞計數(shù)，表達陽性細胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)：完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽性范圍：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；最終判定結(jié)果為二者相加分數(shù)：陰性(-)<2分，弱陽性(+)2～3分，中度陽性(++)4～5分，強陽性(+++)6～7分。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 對所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 18.0軟件進行。采用Wilcoxon符號秩檢驗比較配對設(shè)計的等級資料。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 TGF-β1表達的檢測結(jié)果 根據(jù)免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示，細胞染色定位于胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色，彌漫狀分布為TGF-β1表達陽性。腦膠質(zhì)瘤組織中TGF-β1總陽性表達率和強陽性表達率分別為100.00%(15/15)、40.0%(6/15)；正常腦組織為 33.3%(5/15)、0。腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中TGF-β1的表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 15例患者TGF-β1表達情況

注：與正常組比較，#P<0.05

2．2 TGF-β1的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系 不同的腫瘤生長部位、分化程度、腫瘤的體積、腫瘤周圍衛(wèi)星瘤個數(shù)等對TGF-β1的表達均未顯示顯著性差異(P>0.05)。

3 討論

腦膠質(zhì)細胞瘤是人類最常見的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，目前膠質(zhì)細胞瘤的治療是以手術(shù)為主的綜合性治療，包括術(shù)后放化療、靶向治療、生物治療等。臨床上大多數(shù)手術(shù)切除的患者為中晚期患者，治療效果不理想，預(yù)后不良，5 a生存率在確診患者中占50%左右。

研究發(fā)現(xiàn)，幾乎在所有細胞中都有TGF-β1及其異構(gòu)體的表達，TGF-β1可以與多種蛋白結(jié)合成復(fù)合體被分泌到細胞外基質(zhì)。目前并不十分清楚TGF-β的具體作用機制，但知道TGF-β配體通過與細胞表面受體結(jié)合調(diào)節(jié)細胞生命過程[2]。具體過程大致如下：Ⅱ型TGF-β受體(TGF-βRII)與Ⅰ型TGF-β受體(TGF-βRI)組裝成異二聚體受體復(fù)合體。TGF-βRII磷酸化TGF-βRI后再依次磷酸化R-Smads。磷酸化的Smad2和Smad3與Smad4形成一個復(fù)合體轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，在細胞核內(nèi)該復(fù)合體結(jié)合轉(zhuǎn)錄活化因子或轉(zhuǎn)錄抑制因子進一步調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄[3]。TGF-β1 信號通路可以刺激T98G 細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[4-5]。

膠質(zhì)細胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的一種腫瘤，目前仍缺乏特異且敏感的分子標(biāo)志物。尋找精確的分子腫瘤標(biāo)志物對膠質(zhì)細胞瘤的診斷、治療以及預(yù)后判斷具有重要的理論意義。本研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1在人腦星形膠質(zhì)細胞瘤組織中的陽性表達率比正常腦組織明顯增高。TGF-β1的陽性表達率與瘤細胞的含量有關(guān)，與臨床病理特征無關(guān)。這對以后TGF-β1與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后的研究具有重要的指導(dǎo)意義。

[1] Drabsch Y，ten Dijke P．TGF-β signalling and its role in cancer progression and metastasis[J]．Cancer Metastasis Rev，2012，31(3/4)：553-568．

[2] Elliott RL，Blobe GC．Role of transforming growth factor beta in human cancer[J]．J Clin Oncol，2005，23(9)：2 078-2 093．

[3] Kang JS，Liu C，Derynck R．New regulatory mechanisms of TGF-β receptor function[J]．Trends Cell Biol，2009，19(8)：385-394．

[4] Wesolowska A，Kwiatkowska A，Slomnicki L，et al．Microglia-derived TGF-beta as an important regulator of glioblastoma invasion--an inhibition of TGF-beta-dependent effects by shRNA against human TGF-beta type Ⅱ receptor[J]．Oncogene，2008，27(7)：918-930．

[5] Lu Y，Jiang F，Zheng X，et al．TGF-β1 promotes motility and invasiveness of glioma cells through activation of ADAM17[J]．Oncol Rep，2011，25(5)：1 329-1 335．

(收稿2016-04-25)

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1673-5110(2016)24-0120-02