淺談藥品微生物檢驗用菌種保藏方法

韓映晨 崔鉉 安賢蘭 高杰

淺談藥品微生物檢驗用菌種保藏方法

韓映晨 崔鉉 安賢蘭 高杰

微生物檢驗用菌種具有變異快的特點，保藏的基本是降低微生物的活性，對不同菌種的保藏方法進行研究。隨著操作難度和技術難度的提升，菌種的保存期限也在不斷的延長。本文對微生物檢驗菌種保藏方法的保藏原理以及不同方法的優劣及其效果進行探究和分析。根據不同菌種的具體特征，選擇恰當的保藏方法，以確保保藏的效果，實現保藏的目的。選恰當的保藏方法進行保藏，充分保證菌種的活性以及純度，發揮菌種在微生物檢驗實驗中的價值，提高研究的準確性。

藥品微生物；檢驗用菌種；保藏方法

微生物檢驗用菌種作為一種輔助檢驗菌種，其對于檢驗藥物的原材料、輔助材料以及生產過程質量具有重要的價值。菌種的保藏是研究過程中的一項重要的工作，研究和選擇良好的保藏方法一直以來是一項重要的工作[1]。為了保證菌種在檢驗中的應用效果，保持菌種的活性、純度，控制菌種的變異具有重要的作用和價值[2]。

1 菌種保藏的目的和原理

菌種保藏的主要目的就是菌種能夠在保持原有活力和形狀的基礎上，更好完成微生物檢驗的作用。從這個目的出發，對菌種進行保藏的最終目標就是降低菌種的死亡、變異、污染，保持菌種的活性[3]。菌種保藏的主要原理就是選取優良的菌種，將其代謝水平降低到最低的活躍狀態或是保持在一種相對靜止的狀態。這樣能夠保證菌種不會發生變異，保持相應的活性。

菌種保藏方法的選用除了上述的保證菌種原有的優良性狀不變的考量因素，還應考慮到保藏方法本身的簡便和經濟，主要是操作成本、保存條件需求的苛刻度以及生產推廣使用的可行性[4]。

2 幾種菌種保藏方法的介紹

不同的菌種具有不同的遺傳特性，這導致不同菌種的保存方法也存在差異。良好的保藏方法不僅應該確保將菌種的活性保持在最佳的狀態，同時還應該保證方法的操作簡單，流程簡化，避免復雜的流程帶來污染等情況的發生。下面對幾種菌種保藏方法進行簡要介紹。

2.1 斜面低溫保藏法

該種方法是一種比較常用的保藏法，其主要從操作就是將菌種培養到斜面培養基中，等到菌種覆蓋整個斜面之后，將其放到溫度為4℃的冰箱中保藏[5]。一定時間之后對菌種按照相同的方法進行轉培養，通過這種不斷進行轉培養和保藏的方法進行菌種的保藏。這種方法的優勢就是適用于多種菌種的短期保藏，具有操作簡單、設備要求低、菌種存活率高的特點。但是這種方法的保存期間只有1～6個月，不適合需要長期保藏的菌種，溫度控制在4℃，菌種通常還具有一定的代謝水平，會降低菌種的活性。同時，對菌種進行反復多次的培養，容易導致菌種發生變異，誘發感染等[6]。

2.2 石蠟油封藏法

這種方法主要是將培養成熟的菌種斜面，采用已經進行無菌處理并且采用蒸發方式去掉水分的石蠟，將斜面封起來[7]。保證石蠟層的厚度高出培養斜面頂端大約1 cm，確保培養的菌種與空氣完全的隔絕。封存完畢之后，使用硅膠或者是固體石蠟，將口部封住，將其垂直擺放在溫度為4℃的冰箱中。這種方法的優點是同時考慮了低溫和阻斷氧氣，從兩個方面降低了培養菌種的活性，能夠延長菌種的保存時間。適合保存年限為1～2年的菌種。

2.3 定期移植法

定期移植法，顧名思義是通過不斷地傳代培養來實現保藏的目的，而培養方法包括斜面培養、穿刺培養、液體培養（主要針對厭氧菌）等，根據不同的菌種的生存特性選擇不同的培養方法，因此該種保藏方法具有普遍的適用性。將菌種接種于適宜的環境中進行培養，一般選擇最適條件培養，避免環境因素的改變誘發菌種遺傳物質的改變導致性狀改變，待生長充分后于4～6℃進行間隔一定時間的保存，再進行傳代培養，保藏時間根據不同菌種或微生物不同而不同。

此類保藏方法操作簡便，便于提取，但需要經常移種培養，且培養過程中微生物和菌種難免與外部環境接觸因此無法排除變異的可能，而如果需要長期保藏，該保藏方法的人力成本較高，因此如果僅僅出于實驗需要或其他特殊需求，短期內的保藏可以采取此方法。

3 小結

本文對幾種菌種保存方法進行了闡述，其中操作最為簡單和常用的方法為斜面低溫保藏法，保存難度和技術要求比較高的是冷凍真空干燥保藏方法。隨著操作難度和技術難度的提升，菌種的保存期限也在不斷的延長[8]。同時，每種方法都存在自身的優點和不足，在時間的應用過程中，應該針對不同的菌種保藏目的，選取恰當的方法。

已有的研究成果資料顯示，不同的菌種具有不同特性，在實際的保藏過程中，應該在充分分析菌種特點的基礎上，選取恰當的方法。比如，對于枯草芽孢桿菌而言，如果傳代培養次數過多，就會使它們變異成光滑型。這種類型會影響桿菌的抗生效果，不能夠滿足實驗的要求；對于真菌而言，由于其遺傳的穩定性，變異難度大，在保藏的過程中不用考慮特別的要求，沒有必要進行經常的傳代，可以采用中長期的方法進行保存。

綜上，在實際的保藏過程中應該充分的考慮菌種自身的特點、特性以及保存的目的，實驗室的保藏設備條件等。選恰當的保藏方法進行保藏，充分保證菌種的活性以及純度，發揮菌種在微生物檢驗實驗中的價值，提高研究的準確性和可靠性。

[1] 穆婷，封艷艷，宋珉，等． 藥品微生物檢驗用菌種保藏方法簡論[J]． 母嬰世界，2015，3（6）：361-362．

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[6] 宋文光，楊建勇，牛曉霞，等． 標準菌種在微生物檢查法中的應用 [J]． 機電信息，2017，17（8）：6-10．

[7] 王一昊． 微生物實驗室標準菌種的管理[J]． 醫藥衛生（文摘版），2016，12（6）：124．

[8] 于麗萍，王玉霞，甄濤，等． 黑龍江省微生物菌種保藏中心的現狀及展望[J]．黑龍江科學，2015，6（13）：17-19．

Discussion on Methods of Bacteria Preservation for Microbiological Examination of Drugs

HAN Yingchen CUI Xuan AN Xianlan GAO Jie Yanbian Institute for Food and Drug Detection, Yanbian Jilin 133000, China

Microbial strains used for microbiological testing have the characteristics of rapid variation, and the preservation is basically to reduce microbial activity and study the preservation methods of different strains. With the difficulty of operation and the increase of technical difficulty, the storage period of bacteria is extended constantly. In this paper, the principle of preservation of microorganisms, the advantages and disadvantages of different methods and their effects were investigated and analyzed. According to the specif i c characteristics of different strains,select the appropriate preservation methods to ensure the preservation effect and achieve the purpose of preservation. Select appropriate preservation methods for preservation, fully guarantee the activity and purity of bacteria,bring into play the value of bacteria in microbiological test, and improve theaccuracy of research.

pharmaceutical microorganism; test bacteria; preservation method

R97

A

1674-9316（2017）20-0104-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．20．054

吉林省延邊州食品藥品檢驗所，吉林 延邊 133000

崔鉉