熊果酸對糖尿病GK大鼠降糖程度分析

石亞靜+陳雪品+黃菡雪+呂志偉+韓淑英

摘要：文章探討了熊果酸（Ursolic acid，UA）對糖尿病GK大鼠的降糖作用，與模型組比較，UA組大鼠RBG、2hPBG及HbAlc升高百分率均顯著降低（P<0.01），其中對RBG和HbAlc的療效與陽性對照藥物相近，結(jié)論表明：熊果酸具有顯著降低糖尿病GK大鼠血糖及改善糖尿病糖代謝異常的作用。

關(guān)鍵詞：熊果酸；糖尿病；GK大鼠；降糖程度；糖代謝異常 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

中圖分類號：R961 文章編號：1009-2374（2016）35-0089-02 DOI：10.13535/j.cnki.11-4406/n.2016.35.043

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是由于體內(nèi)胰島素相對不足而引起的一種以高血糖為主要特征的代謝綜合征，占據(jù)糖尿病的95%以上。糖尿病可以伴發(fā)一系列并發(fā)癥，如酮癥酸中毒、肢體壞疽、多發(fā)性神經(jīng)炎、失明和腎功能衰竭，嚴(yán)重?fù)p害糖尿病病人的生活質(zhì)量，更是其致殘致死的重要原因。前期研究表明，熊果酸具有降糖、調(diào)脂、保肝的作用，因此本實(shí)驗(yàn)將GK大鼠（Goto-Kakizaki Rat）作為研究對象，探討熊果酸對2型糖尿病的降糖作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑。熊果酸（中國藥品生物制品檢定所，批號20140224）；羧甲基纖維素鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20140122）；糖化血紅蛋白檢測試劑盒（Axis-shield Poc AS，批號20141204）；羅氏血糖儀及試紙（瑞士羅氏診斷有限公司）。

1.1.2 動物。35只雄性SPF級GK大鼠，購自上海斯萊克斯實(shí)驗(yàn)動物責(zé)任有限公司，許可證號：SCXK（滬）2012-0002，10只同系正常Wistar大鼠，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK（京）2014-0004；于華北理工大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級屏障實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 GK大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)及糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)。將購買的35只13周GK大鼠在SPF級屏障實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行飼養(yǎng)，并喂養(yǎng)高脂飼料誘導(dǎo)1周，1周末，以連續(xù)3次GK大鼠口服葡萄糖兩小時(shí)血糖≥11.1mmol·L-1為造模成功標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 設(shè)計(jì)組別與藥物干預(yù)。篩選30只符合糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)的GK大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分成3組，每組10只，分別為模型組（MC）、GLY組和UA組，另取10只Wistar正常大鼠為正常對照組（NC），每日定期按設(shè)計(jì)灌胃給予相應(yīng)藥物，格列本脲和熊果酸應(yīng)用時(shí)應(yīng)以含5g·L-1羧甲基纖維素鈉的PBS溶液（pH=7.4）配制成濃度為2、20g·L-1的混懸液，模型對照組與正常對照組每天灌胃等容積含5g·L-1羧甲基纖維素鈉的PBS溶液（pH=7.4），持續(xù)6w。

1.2.3 指標(biāo)檢測。

第一，一般表征監(jiān)測。給藥期間密切觀察各組大鼠精神狀態(tài)、活動、毛色、體重及大小便等一般狀態(tài)。

第二，隨機(jī)血糖測定。分別于給藥第0、2、4、6周用血糖儀測定RBG（上午給藥后30min）1次，RBG升高百分率=（各組RBG-正常組RBG）/正常組RBG×100%。

第三，口服葡萄糖2h血糖及糖化血紅蛋白（HbAlc）測定。6周末，取尾靜脈全血測定口服葡萄糖2h血糖（2hPBG），并利用微粒色譜法檢測大鼠血液中HbAlc的含量。口服葡萄糖2h血糖（2hPBG）升高百分率=（各組2hPBG-正常組2hPBG）/正常組2hPBG×100%；HbAlc升高百分率=（各組HbAlc-正常組HbAlc）/正常組HbAlc×100%。

第四，統(tǒng)計(jì)分析方法。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用SPSS 13.0版軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間差異比較采用方差分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)監(jiān)測

正常組大鼠毛色白而有光澤，大便正常，并且活動自如，反應(yīng)機(jī)敏；糖尿病模型組大鼠隨著飼養(yǎng)時(shí)間加長，毛色日漸變黃無光澤，出現(xiàn)稀便現(xiàn)象，反應(yīng)愈發(fā)遲鈍，到后期常繼發(fā)各種感染；與模型組比較，藥物組大鼠反應(yīng)遲鈍現(xiàn)象減輕，毛色較模型組有光澤，大便成形，色澤正常。

2.2 隨機(jī)血糖（RBG）升高百分率計(jì)算

由表1結(jié)果顯示，給藥前模型組與藥物組RBG升高百分率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），給藥后藥物組RBG升高百分率明顯下降（P<0.01），但與正常組比較血糖依舊較高。

2.3 口服葡萄糖2h血糖（2hPBG）升高百分率計(jì)算

由表2看出，灌胃葡萄糖之前，各組GK大鼠血糖升高百分率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，給糖2h后，藥物組GK大鼠血糖升高百分率較模型組比較顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

意義（P=0.006）。

2.4 糖化血紅蛋白（HbAlc）升高百分率計(jì)算

由表3可知：與模型組比較，熊果酸和格列本脲組大鼠血清中的糖化血紅蛋白（HbAlc）升高百分率較模型組明顯下降（P=0.008），其中熊果酸降低大鼠HbAlc升高百分率效果接近陽性對照藥物格列苯脲。

3 討論

UA是一種五環(huán)三萜類化合物，廣泛存在于梔子、山楂、女貞子等多種天然藥用植物中，具有抗炎、降糖、調(diào)脂、保肝及抗腫瘤等多種藥理作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸可有效地抑制鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠飲水、進(jìn)食量，并可有效糾正體內(nèi)糖脂代謝紊亂，可能與其擬胰島素樣作用和對脂質(zhì)合成代謝相關(guān)基因調(diào)控有關(guān)。因此本實(shí)驗(yàn)將與人類糖尿病最相近的GK大鼠作為動物模型，分析熊果酸對2型糖尿病血糖降低程度及糖代謝異常的改善作用。

HbAlc是指血液中與葡萄糖不可逆結(jié)合的血紅蛋白，由于其不受運(yùn)動和食物的影響，其濃度只與紅細(xì)胞壽命和該時(shí)期平均血糖濃度有關(guān)，因此可以穩(wěn)定可靠地反映120天內(nèi)的平均血糖濃度。多項(xiàng)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HbAlc檢測對DM的診斷更準(zhǔn)確，對其血糖控制更客觀、穩(wěn)定，對控制DM并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展及DM的預(yù)后監(jiān)測均有重要臨床參考價(jià)值。國際糖尿病聯(lián)盟推出的新版的亞太糖尿病防治指南中明確規(guī)定HbAlc是糖尿病監(jiān)控的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察熊果酸對2型糖尿病降糖程度分析，結(jié)果顯示，熊果酸能顯著降低GK大鼠血糖，包括隨機(jī)血糖、口服葡萄糖2h血糖及糖化血紅蛋白，其中對隨機(jī)血糖和糖化血紅蛋白療效與陽性藥物格列苯脲相近，表明熊果酸可以改善糖尿病引起的糖代謝異常，具有良好的開發(fā)前景，其降糖具體機(jī)制待進(jìn)一步研究。

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基金項(xiàng)目：河北省自然科學(xué)基金（C2010001795）；河北省大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目（X2016041）。

作者簡介：石亞靜（1994-），女，華北理工大學(xué)本科在讀學(xué)生，研究方向：麻醉學(xué)；韓淑英，華北理工大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：糖尿病。

（責(zé)任編輯：蔣建華）