冠心病患者外周血miR-21的表達及與冠狀動脈病變程度的關系

管文娟 牛鎖成

(濮陽市人民醫(yī)院心內二科，河南 濮陽 457000)

冠心病患者外周血miR-21的表達及與冠狀動脈病變程度的關系

管文娟 牛鎖成

(濮陽市人民醫(yī)院心內二科，河南 濮陽 457000)

目的 探討冠心病(CHD)患者外周血miR-21的表達及與冠狀動脈病變嚴重程度的相關性。方法 行冠脈造影的患者145例中CHD患者77例，其中心絞痛(AP)45例(AP組)及急性心肌梗死(AMI)32例(AMI組)，另外無冠脈病變68例為對照組。采用Gensni評分評價冠脈狹窄程度，應用熒光實時定量(qRT-PCR)方法檢測外周血miR-21表達。結果 三組血漿中miR-21表達水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度差異顯著(P<0.05)，其中AMI組、AP組血漿中miR-21表達水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度顯著高于對照組，AMI組亦顯著高于AP組(P<0.05)；Spearman線性相關分析顯示，CHD患者miR-21表達水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度呈正相關性(r=0.895、0.888，均P<0.05)。結論 CHD患者外周血miR-21高表達，且與冠脈病變的嚴重程度具有正相關性，為CHD臨床診治及預后提供了理論依據(jù)。

冠心??；miR-21表達；冠狀動脈病變；Gensini評分

微小RNAs(miRNAs)在心血管疾病的作用早被確認，其通過降解靶基因mRNA和抑制靶基因mRNA降解來完成對靶基因表達的調控〔1〕，影響細胞分化、增殖和凋亡、心臟發(fā)育、肥大、心肌重塑、血管生成等幾乎所有生物學過程,表現(xiàn)為疾病過程中出現(xiàn)異常的miRNAs〔2〕。miR-21是目前在心血管疾病研究較多的miRNA家族成員之一〔3〕，蘇迎等〔4〕報道，腫瘤和心臟應激后miR-21的表達上調，且miR-21可影響心臟重塑，若沉默其表達會使心臟損傷惡化；王珺曉等〔5〕發(fā)現(xiàn)冠心病(CHD)患者血漿miR-21較健康人群升高，甚至認為miR-21可能成為CHD臨床診斷的生物標記物。本研究主要探討CHD患者外周血中miR-21的表達及其與冠狀動脈病變嚴重程度之間相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年1月至2014年1月我院行冠脈造影的患者145例中CHD 77例，納入標準：①年齡≥50歲；②符合2007年美國心臟病學會(ACC)/美國心臟協(xié)會(AHA)制定的CHD診斷標準〔6〕：經冠狀動脈造影術得知3支主要血管中的1支或主要分支管腔冠脈狹窄≥50%者。排除標準:急/慢性感染性疾病、合并瓣膜性心臟病、血液系統(tǒng)疾病、周圍血管病變、嚴重肝/腎功能不全、心律失常、全身免疫性疾病、腫瘤、慢性阻塞性肺疾病等疾病者；此前接受過CHD介入、搭橋、靜脈溶栓等治療者；認知障礙者。其中男40例，女37例，平均年齡(60.23±0.72)歲，參考2004年美國心臟病學會(ACS)的診斷標準及中華醫(yī)學會心血管病學分會標準〔7〕，依據(jù)患者的典型臨床表現(xiàn)、血清心肌標志物水平、特征性心電圖改變及冠脈造影結果心絞痛(AP)組45例及急性心肌梗死(AMI)組32例，剩下68例無冠脈病變的患者為對照組。本研究已經醫(yī)院倫理協(xié)會批準，患者或家屬簽署知情同意書。三組性別、年齡、藥物治療、危險因素未見統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 診斷標準〔8〕采用Judkins方法常規(guī)體位投照，選擇右冠狀動脈、左主干、左前降支、左回旋支為主要觀察血管，每支血管選3個體位做冠狀動脈造影，若造影結果有1支以上(包括1支)血管直徑狹窄≥50%管直徑者診斷為CHD。

1.3 Gensini評分〔9〕按AHA規(guī)定的冠脈血管圖像記錄分段評價標準對冠脈病變程度進行定量評分，記錄Gensini評分及冠脈的狹窄程度。

1.4 miR-21表達水平檢測 研究對象空腹12 h，經左肘靜脈抽取血液樣本2 ml，轉到肝素鈉抗凝管。按照Trizol LS試劑盒、RNA反轉錄試劑盒、聚合酶鏈反應(PCR)試劑盒(美國Invitrogen公司)說明書提取總RNA并進行逆轉錄反應，逆轉錄引物為：5'-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACA-GTG-3'，miRNA-21引物為:上游5'-ACACTCCAGCTGGGTAGCTTATCAGACTGAT-3'，下游5'ACTGGTGTCGTGGAGTCG-3'，內參基因U6 RNA：上游5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'，下游5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。設置反應條件為：95℃，15 s，60℃，30 s，共40個循環(huán)，各樣本每次實驗設3個復孔，重復3次，miR-21表達相對定量采用軟件分析，將內參基因和目的基因擴增效率及測得的Ct值輸入GenEx軟件中按照說明操作得到結果〔10〕。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行單因素方差分析、t檢驗、χ2檢驗及Spearman線性相關分析。

2 結 果

2.1 Gensini評分及冠脈狹窄程度比較 AMI組、AP組血漿中miR-21表達水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度顯著高于對照組，AMI組亦顯著高于AP組(P<0.05)，見表2。

2.2 外周血中miR-21表達水平與冠脈病變程度的關系 CHD患者外周血中miR-21表達水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度呈正相關性(r=0.895、0.888，P=0.000、0.000)，見圖1。

表2 3組外周血miR-21水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度±s)

與對照組相比：1)P<0.05，與AP組相比：2)P<0.05

圖1 miR-21表達水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度相關性

3 討 論

目前人們越來越關注miRNA在心血管疾病的診斷與防治中的價值〔11〕，它是一種內源性不編碼蛋白質單鏈RNA，經結合于靶基因mRNA的3'端非翻譯區(qū)介導其降解或抑制其翻譯，發(fā)揮轉錄后調節(jié)基因表達的作用，在心血管系統(tǒng)組織細胞的分化、發(fā)育及凋亡過程中均扮演重要角色〔12〕，在不同組織和疾病表達譜不盡相同。Olivieri等〔13〕發(fā)現(xiàn)，伴有CHD的老年非ST段抬高型心肌梗死患者循環(huán)中miR-499-5p升高80倍之多，miR-1、miR-21、miR-133a、miR-208a升高3～10倍，Rong等〔14〕發(fā)現(xiàn)漢族2型糖尿病患者血漿中miR-146a的表達較健康人群顯著增高。李韶南等〔15,16〕認為血漿miR-21表達增加可通過調控基質金屬蛋白酶(MMP)-9，參與動脈硬化、破壞斑塊穩(wěn)定性，預示CHD患者心血管事件風險高。但肖靜等〔17〕體外實驗證實，氧化應激可促進心臟干細胞(CPCs)分泌外泌體(exosomes)增加miR-21的表達并被心肌細胞攝取，再靶向結合程序性細胞死亡因子(PDCD)4抑制心肌細胞凋亡。本實驗與現(xiàn)有報道結果相符〔18〕，氧化應激是動脈粥樣硬化(AS)、CHD、AMI、心力衰竭、高血壓等心血管疾病的重要機制，活性氧簇可導致血管內膜增厚、血管損傷、缺血/再灌注損傷、血管重塑，并參與AS形成及斑塊不穩(wěn)定，因為CHD患者的冠狀動脈供血異常，導致心肌缺血性損傷并誘發(fā)心肌細胞凋亡，嚴重時發(fā)生不可逆性損傷，當心肌細胞受損后，可能會因為氧化應激激活下游信號通路引起心肌特異性高表達的miR-21便會釋放到血液中〔19〕。

Gensini評分是從冠狀動脈狹窄發(fā)生部位及狹窄程度對冠脈病變予以不同的量化權重，并對血管及其嚴重程度進行評分，在預測臨床預后中起重要作用，評分越高則冠狀動脈病變越嚴重，該方法被廣泛用于CHD的臨床診療〔20〕。臨床上大多數(shù)冠脈病變患者因為冠脈斑塊不穩(wěn)定發(fā)生AMI，miR-21參與AS過程，與炎癥相關的miRNAs通過調控炎癥細胞和炎癥細胞因子而啟動并影響著炎癥反應，并可能通過調控人可溶性CD配體(SCD40L)等一些炎癥遞質影響冠脈內斑塊穩(wěn)定性〔15〕。Gensini評分相關系數(shù)越高，說明miR-21與其具有越高相關性〔21〕。隨著CHD疾病程度增加，Gensini評分增加，miR-21表達增加，其機制可能與miR-21發(fā)揮其抗損傷、抗凋亡、保護心肌的作用相關，因為CHD患者的冠狀動脈供血異常，導致心肌缺血性損傷并誘發(fā)心肌梗死，miR-21表達增加可以通過調控內皮一氧化氮合成酶(NOS)、熱休克蛋白(HSP)轉錄因子(HSF)-1、HSP等靶基因來減輕缺血-再灌注損傷從而減少梗死面積〔22〕；另外，表達增加的miR-21通過磷酸酶-張力蛋白同源物(PTEN)途徑和PDCD4途徑使抗凋亡基因表達增加，減少心肌細胞凋亡，使缺血-再灌注損傷后梗死面積減少，保護心臟〔23〕。

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〔2015-03-19修回〕

(編輯 杜 娟)

管文娟(1975-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事心血管病研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)02-0376-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.050