老年慢性乙型肝炎患者基因多態(tài)性與其耐藥變異的相關(guān)性

趙正斌 范文海

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院傳染科，甘肅 蘭州 730000)

老年慢性乙型肝炎患者基因多態(tài)性與其耐藥變異的相關(guān)性

趙正斌1范文海2

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院傳染科，甘肅 蘭州 730000)

目的 研究老年慢性乙型肝炎患者基因多態(tài)性與其耐藥變異的相關(guān)性。方法 選取接受抗病毒治療的老年慢性乙型肝炎患者188例。檢測(cè)患者在使用不同核苷類抗病毒藥物后血清樣本，進(jìn)行基因測(cè)序和分型。結(jié)果 C基因型占比顯著高于B基因型、D基因型；且B基因型占比高于D基因型(均P<0.05)。C基因型YIDD突變占比顯著高于B基因型(χ2=7.918，P=0.005)，而B基因型的YVDD突變高于C基因型(χ2=8.965,P=0.000)。B基因型與YVDD突變存在顯著正相關(guān)(r=0.783，P=0.000)，同樣C基因型與YIDD突變存在顯著正相關(guān)(r=0.819，P=0.000)。單一耐藥中阿德夫韋耐藥率顯著高于拉米夫定與恩替卡韋，在共同耐藥中拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定共同耐藥率顯著高于拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定+恩替卡韋、拉米夫定+阿德夫韋、拉米夫定+替米夫定以及拉米夫定+恩替卡韋。阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變顯著正相關(guān)(r=0.748，P=0.000；r=0.583，P=0.000；r=0.673，P=0.000；r=0.617，P=0.000)。結(jié)論 乙型肝炎病毒(HBV)基因型中B基因型與YVDD突變、C基因型與YIDD突變均正相關(guān)，阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變正相關(guān)。通過對(duì)HBV基因分型以及耐藥位點(diǎn)的檢測(cè)，對(duì)臨床及時(shí)調(diào)整用藥方案有一定幫助。

慢性乙型肝炎；基因多態(tài)性；耐藥變異

乙型肝炎病毒(HBV)是引發(fā)病毒性肝炎、肝硬化以及肝癌的主要因素〔1，2〕。目前臨床上應(yīng)用較為廣泛的抗HBV藥物包括拉米夫定、阿德夫韋以及恩替卡韋等。上述抗病毒藥物的應(yīng)用可有效降低HBV感染風(fēng)險(xiǎn)，但長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致耐藥性變異的產(chǎn)生，且耐藥后會(huì)導(dǎo)致患者HBV-DNA水平顯著升高，肝臟功能也會(huì)受到嚴(yán)重影響，甚至?xí)?dǎo)致患者肝衰竭，危及患者生命健康〔3～5〕。因此，明確基因型與耐藥性變異之間的相關(guān)性尤為重要。目前臨床上針對(duì)該問題研究報(bào)道較少。本文研究老年慢性乙型肝炎患者基因多態(tài)性與其耐藥變異的相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選取從2014年5月至2016年4月，在我院接受抗病毒治療的老年慢性乙型肝炎患者188例，在治療中出現(xiàn)病毒學(xué)反彈，男123例，女65例，年齡61～85〔平均(73.5±4.2)〕歲。納入標(biāo)準(zhǔn)〔5〕：所有患者均符合《乙型肝炎防治指南》所制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有抗丁型肝炎病毒(HDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HBV陽(yáng)性者；②合并肝臟疾病或HBV攜帶者；③此前接受免疫抑制劑治療者。其中B基因型患者42例，男28例，女14例，年齡63～84〔平均(72.9±4.0)〕歲。C基因型患者137例，男89例，女48例，年齡61～85〔平均(73.7±4.3)〕歲。D基因型患者9例，男6例，女3例，年齡63～84〔平均(73.4±4.3)〕歲。三組患者年齡、性別對(duì)比無顯著差異(P>0.05)。

1.2 研究方法 吸取所有患者血清100 μl，置入1.5 ml離心管，隨后加入100 μl DNA提取液Ⅰ液進(jìn)行混勻，室溫13 000 r/min離心10 min，棄上清液；然后加入25 μl DNA提取液Ⅱ液按照上述過程進(jìn)行操作，提取上清液，置于-20℃下保存待測(cè)。采用核酸擴(kuò)增技術(shù)聯(lián)合熒光標(biāo)記探針雜交方法進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)，如定量檢測(cè)中患者血清樣本中HBV-DNA高于5×103拷貝/ml，則取3 μl PCR產(chǎn)物與2 μl堿性磷酸酶進(jìn)行混勻、反應(yīng)。反應(yīng)條件分別為37℃60 min，80℃15 min，最后放置于4℃條件下保存。采用PCR純化試劑盒并按照操作規(guī)程進(jìn)行，使用ABI3100自動(dòng)測(cè)序儀行基因測(cè)序。對(duì)比MegAlign儀(美國(guó)DNASTAR公司)所測(cè)定的序列，將患者HBV進(jìn)行基因分型。

1.3 觀察指標(biāo) 患者HBV不同基因型分布情況(B、C、D基因型)、同基因型YMDD基因突變情況(包括YIDD、YVDD)以及者血清樣本HBV耐藥情況(拉米夫定、阿德夫韋、替米夫定、恩替卡韋)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 患者HBV不同基因型分布情況 C基因型占比(72.87%)顯著高于B基因型(22.34%，χ2=96.231，P=0.000)和D基因型(4.79%，χ2=183.454，P=0.000)；且B基因型占比高于D基因型(χ2=24.704，P=0.000)，說明HBV患者以C基因型為主，B基因型次之。

2.2 不同基因型YMDD基因突變情況及相關(guān)分析 C基因型YIDD突變占比顯著高于B基因型(χ2=7.918，P=0.005)，而B基因型的YVDD突變高于C基因型(χ2=8.965,P=0.000)。B基因型與YVDD突變存在顯著正相關(guān)(P=0.000)，同樣C基因型與YIDD突變存在顯著正相關(guān)(P=0.000)。見表1，表2。

表1 不同基因型YMDD基因突變情況〔n(%)〕

與B基因型比較:1)P<0.05

表2 不同基因型突變情況相關(guān)性分析

2.3 患者血清樣本HBV單一耐藥、共同耐藥情況 單一耐藥中阿德夫韋耐藥率(13.83%)顯著高于拉米夫定(1.06%)與恩替卡韋(0.53%)，在共同耐藥中拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定共同耐藥率(34.04%)顯著高于拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定+恩替卡韋(3.72%)、拉米夫定+阿德夫韋(1.60%)、拉米夫定+替米夫定(1.60%)以及拉米夫定+恩替卡韋(0.53%)(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變(r=0.747,P=0.000;r=0.673,P=0.000)、C基因型YVDD突變顯著正相關(guān)(r=0.583,P=0.000;r=0.617,P=0.000)。

3 討 論

拉米夫定等常用的核苷類似藥物作為臨床上應(yīng)用最廣泛的抗HBV藥物，其主要作用機(jī)制是通過對(duì)HBV多聚酶的逆轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行抑制，從而降低HBV的復(fù)制，進(jìn)一步促進(jìn)了乙型肝炎e抗原的血清學(xué)轉(zhuǎn)換，最終達(dá)到消除病毒，改善患者肝臟組織病理的作用〔6～8〕。由于慢性乙型肝炎患者的治療周期較長(zhǎng)，同時(shí)為了避免在病情沒有得到徹底緩解的情況下停藥易引發(fā)病毒耐藥的發(fā)生，導(dǎo)致病情加重，通常情況下在未得到醫(yī)師的同意前需長(zhǎng)期用藥〔9〕。但長(zhǎng)期不間斷用藥不可避免地會(huì)提高耐藥發(fā)生率，且HBV具有一定的突變率，而變異病毒株可通過改變免疫原性以及致病性，從而導(dǎo)致患者出現(xiàn)免疫應(yīng)答的相應(yīng)變化，最終使得患者病情加重〔10〕。

本研究發(fā)現(xiàn)，HBV基因型分布從高到低分別是C基因型、B基因型、D基因型。其中D基因型屬于我國(guó)北方地區(qū)較為少見的基因型，而B與C混合基因型則是沒有檢出，這可能是與地區(qū)性差異有關(guān)〔11〕。進(jìn)一步將YMDD基因突變率按照從高到低的順序進(jìn)行排列，依次是C基因型、B基因型、D基因型，其中YVDD突變顯著高于YIDD突變。其中C基因型在乙型肝炎患者中屬于優(yōu)勢(shì)基因型，這也導(dǎo)致了感染C基因型HBV的患者相比感染其他基因型HBV的患者病情更易進(jìn)展加劇。與此同時(shí)，B基因型與YVDD突變存在顯著正相關(guān)，而C基因型與YIDD突變存在顯著正相關(guān)。這表明了基因型突變與患者臨床病情發(fā)展存在一定相關(guān)性。臨床也有其他研究報(bào)道證實(shí)C基因型HBV與肝硬化、肝癌之間相關(guān)性最為顯著〔12〕。此外，本研究顯示阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變顯著正相關(guān)。究其原因，考慮這主要是由于不同基因型在病毒的結(jié)構(gòu)、復(fù)制能力、病毒的變異以及對(duì)藥物不同程度的敏感性存在差異而導(dǎo)致的。同時(shí)也表明了隨著抗病毒藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用，部分患者已經(jīng)出現(xiàn)較為嚴(yán)重的共同耐藥情況，從而使得臨床治療難度加大。而通過基因分型及耐藥位點(diǎn)的檢測(cè)有利于臨床治療中抗病毒藥物的更加合理使用，有效地避免了大量人力、物力、財(cái)力的浪費(fèi)，提高抗病毒藥物治療效果〔13～15〕。

1 謝巧靈,叢慶偉,吳凌虹，等.耐核苷(酸)類藥物慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清HBV基因型和P區(qū)耐藥突變位點(diǎn)分析〔J〕.實(shí)用肝臟病雜志，2016;19(1)：60-3.

2 艷 婷,鄭良達(dá),陳公英，等.對(duì)慢性乙型肝炎及肝硬化患者的核苷(酸)類藥物耐藥位點(diǎn)的分析〔J〕.醫(yī)學(xué)研究雜志,2014;43(4):83-6.

3 馮 亮,楊創(chuàng)國(guó),郭新林，等.夫定聯(lián)合阿德福韋酯治療高病毒載量慢性乙型肝炎初治患者的療效分析〔J〕.海南醫(yī)學(xué)，2016;27(2)：186-8.

4 楊國(guó)燦,茅國(guó)峰,沈少卿，等.耐拉米夫定乙型肝炎病毒聚合酶P區(qū)變異與基因分型〔J〕.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2014;26(6):544-7.

5 趙 帥,孫靜娜,白雪梅，等.LAM 單獨(dú)及與 ECV 聯(lián)合治療 CHB 對(duì)不同基因型HBV耐藥突變的影響〔J〕.山東醫(yī)藥,2015;55(45):5-7.

6 黃德旺,陸愛英,磨慶福，等.梧州區(qū)域乙型肝炎病毒基因型分布及耐藥基因自然變異調(diào)查〔J〕.現(xiàn)代消化及介入診療,2014;19(2):100-2.

7 張景皓,王家路,趙 虎，等.新疆漢族與維吾爾族 HBV 耐藥變異類型與基因型研究〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014;29(10):1041-4.

8 劉臘香,林 巧,鐘紅劍，等.核苷(酸)類似物治療慢性乙型肝炎多位點(diǎn)耐藥基因的檢測(cè)〔J〕.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2014;14(4):458-9.

9 李延武,李卓成,劉秀卿，等.阿德福韋酯治療老年慢性乙型肝炎產(chǎn)生耐藥變異與基因突變的關(guān)系〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014;24(12):2940-2.

10 丹 紅,趙年豐,潘紅英，等.替諾福韋酯挽救治療核苷(酸)類藥物多重耐藥慢性乙型肝炎患者的療效觀察〔J〕.中華肝臟病雜志,2015;23(1):75-6.

11 張小曼,肖子鴻,張純瑜，等.核苷(酸)類藥物引起HBV基因突變的危險(xiǎn)因素與模式分析〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版),2015;9(5):665-9.

12 王 欣,石 銘,韓 博，等.慢性乙型肝炎患者阿德福韋酯耐藥的變異檢測(cè)〔J〕.標(biāo)記免疫分析與臨床,2015;22(9):903-5.

13 B?rekci G,Aras N,Kandemir ?,etal.Investigation of the association between chronic hepatitis B and C infections and TNF-α(-308)gene polymorphism〔J〕.Mikrobiyol Bul,2016;50(2):236-44.

14 Mathew S,Abdel-Hafiz H,Raza A,etal.Host nucleotide polymorphism in hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma〔J〕.World J Hepatol,2016;8(10):485-98.

15 Lao X,Wang X,Liu Y,etal.Association of paraoxonase 1 gene polymorphisms with the risk of hepatitis B virus-related liver diseases in a Guangxi population:a case-control study〔J〕.Medicine (Baltimore),2015;94(48):2179-80.

〔2016-05-13修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)

趙正斌(1974-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事肝病及傳染病臨床研究。

R512.6+2

A

1005-9202(2017)02-0417-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.071

1 蘭州大學(xué)第一醫(yī)院東崗院區(qū)傳染科 2 蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院