家蠅幾丁質(zhì)酶基因MDCII重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)模式研究

楊尉錦國(guó)果吳沁怡李妍付萍張勇

（1. 貴州醫(yī)科大學(xué)，貴陽(yáng)550004；2. 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤生物治療中心，貴陽(yáng)550004）

家蠅幾丁質(zhì)酶基因MDCII重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)模式研究

楊尉錦1國(guó)果1吳沁怡2李妍1付萍1張勇1

（1. 貴州醫(yī)科大學(xué)，貴陽(yáng)550004；2. 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤生物治療中心，貴陽(yáng)550004）

從家蠅EST測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選獲得家蠅幾丁質(zhì)酶基因 MDCII，對(duì)該基因進(jìn)行克隆及分子特性分析，探討其在家蠅不同組織、不同發(fā)育時(shí)期及經(jīng)不同微生物誘導(dǎo)后的時(shí)空表達(dá)模式。利用EST測(cè)序技術(shù)從已構(gòu)建的家蠅幼蟲(chóng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)篩選出MDCII基因，運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析該基因序列及其編碼蛋白的理化特性，采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，構(gòu)建pEASY-E1-MDCII重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到Trans1-T1克隆感受態(tài)細(xì)胞中；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real Time PCR）技術(shù)，檢測(cè)MDCII基因在不同發(fā)育時(shí)期和不同組織部位的表達(dá)差異；采用注射法將不同微生物導(dǎo)入到家蠅3齡幼蟲(chóng)體內(nèi)，Real Time PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后不同時(shí)間點(diǎn)MDCII基因表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示，MDCII基因的ORF框全長(zhǎng)1 374 bp，編碼457個(gè)氨基酸，理論分子量51.6 kD，進(jìn)化樹(shù)分析比對(duì)與果蠅成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子的遺傳距離較近。構(gòu)建了具有正確基因序列的pEASY-E1-MDCII重組質(zhì)粒。MDCII基因在家蠅不同發(fā)育階段中均有不同程度的表達(dá)，在3齡幼蟲(chóng)中，以唾液腺和脂肪體中的表達(dá)水平較高；在白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌誘導(dǎo)后3 h，MDCII基因均出現(xiàn)明顯的表達(dá)上調(diào)。MDCII基因?qū)儆趲锥≠|(zhì)酶中成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子，參與了家蠅的生長(zhǎng)發(fā)育，在免疫防御過(guò)程中也發(fā)揮了一定作用。

家蠅；幾丁質(zhì)酶；克隆；表達(dá)模式

幾丁質(zhì)是由β-1，4糖苷鍵連接N-乙酰-D- 氨基葡萄糖構(gòu)成的直鏈多糖高聚物，廣泛存在于自然界中［1］。在昆蟲(chóng)體內(nèi)，它存在于外骨骼、圍食膜中，發(fā)揮骨架支撐等重要生理功能。幾丁質(zhì)的水解主要由幾丁質(zhì)降解酶來(lái)完成，幾丁質(zhì)酶是幾丁質(zhì)降解酶家族的關(guān)鍵酶，參與了昆蟲(chóng)蛻皮、圍食膜降解等多種重要生命活動(dòng)［2-4］。此外，幾丁質(zhì)酶也具有抑制病原微生物生長(zhǎng)等作用。鑒于幾丁質(zhì)酶的重要性，以幾丁質(zhì)為靶標(biāo)，通過(guò)阻斷幾丁質(zhì)酶的表達(dá)途徑，從而可阻止昆蟲(chóng)的蛻皮、羽化及圍食膜再生，達(dá)到防治有害昆蟲(chóng)目的［5］。由于幾丁質(zhì)及其聚合物在脊椎動(dòng)物等高等動(dòng)物中不存在，因此通過(guò)擾亂幾丁質(zhì)酶的正常調(diào)控進(jìn)而破壞幾丁質(zhì)的新陳代謝來(lái)防治害蟲(chóng)，對(duì)脊椎動(dòng)物和人類是相對(duì)安全并且有效的生物防治策略。

自1993 年Kramer［6］從煙草夜蛾中克隆出第一條完整的昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)酶基因cDNA序列后，現(xiàn)已從雙翅目（dipterans）［7］、鱗翅目（lepidopterans）［8，9］、鞘翅目（coleopterans）［10］、半翅目（hemipteransf）［11］和膜翅目（hymenopterans）等昆蟲(chóng)中鑒定到多個(gè)不同類型的幾丁質(zhì)酶基因，有多個(gè)學(xué)者證實(shí)了幾丁質(zhì)酶對(duì)小菜蛾、埃及伊蚊等有殺蟲(chóng)增效作用［12，13］。

家蠅是一種常見(jiàn)的衛(wèi)生昆蟲(chóng)，幾乎分布在世界的每一個(gè)地方，攜帶多種病原體和寄生蟲(chóng)，可傳播傷寒、霍亂、痢疾等多種傳染病。一直以來(lái)，人們主要依靠化學(xué)手段來(lái)防治家蠅，但長(zhǎng)期、大量地使用化學(xué)殺蟲(chóng)劑，不僅對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，同時(shí)使家蠅的抗藥性不斷增加，導(dǎo)致防治日益困難［14］。因此，尋求一種即可靠又安全的防治有害昆蟲(chóng)的方法具有重要的意義。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)家蠅的研究主要集中在先天性免疫活性因子的篩選及功能研究方面［15，16］，但對(duì)其在生長(zhǎng)發(fā)育及免疫防御中具有重要意義的幾丁質(zhì)降解酶家族卻鮮有報(bào)道。

本課題組前期對(duì)篩選到的家蠅幾丁質(zhì)酶Ⅰ（MDCI）進(jìn)行了克隆表達(dá)分析［17］，本研究對(duì)家蠅幾丁質(zhì)酶MDCII基因進(jìn)行克隆，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的技術(shù)，分析MDCII的時(shí)空表達(dá)模式，初步探討該基因在家蠅生長(zhǎng)發(fā)育及免疫防御過(guò)程中可能發(fā)揮的作用，旨在為有害昆蟲(chóng)的生物防治設(shè)計(jì)合理的控制措施提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 家蠅（貴州醫(yī)科大學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)教研室實(shí)驗(yàn)室傳代繁殖），飼養(yǎng)條件：溫度28±1℃，相對(duì)濕度50%-60%，光照黑暗各12 h交替。

1.1.2 主要試劑和儀器 RNAiso Reagent（Total RNA提 取 試 劑 ）；PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser，SYBR Premix Ex TaqTMII，焦碳酸二乙酯（DEPC），DNA標(biāo)志物DL2000，DNA凝膠回收試劑盒質(zhì)粒、DNA快速提取試劑盒（均購(gòu)自大連TaKaRa公司）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。PCR擴(kuò)增儀（德國(guó) Eppendorf 公司）；紫外分光光度計(jì)（美國(guó) GE 公司）；顯微解剖鏡（尼康）。

引物合成與DNA測(cè)序：引物由TAKARA公司合成；重組質(zhì)粒DNA測(cè)序工作由上海生工生物技術(shù)有限公司完成。

1.2 方法

1.2.1 家蠅幾丁質(zhì)酶基因MDCII的識(shí)別及序列測(cè)定 對(duì)測(cè)定得到的家蠅3齡幼蟲(chóng)EST序列進(jìn)行BLAXT分析，從中篩選獲得編碼家蠅幾丁質(zhì)酶基因的文庫(kù)質(zhì)粒（編號(hào)為005-H08），命名為MDCII。

1.2.2 MDCII基因的生物信息學(xué)分析 利用NCBI網(wǎng)站的BLAST工具進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)基因序列的相似性及同源性查找和比對(duì)，使用MEGA5.1軟件采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)（ExPASy）分析MDCII基因編碼蛋白的理化特性。

1.2.3 MDCII基 因 的cDNA克 隆 用DNAClub和Primer5.0設(shè) 計(jì) 引 物。 上 游 引 物 為：5'-CAGTACCGATCATCGATATCAATACC-3'，下游引物為：5'- TTAGTGCAACAAACGATATTTAATG-3'。以MDCII基因的cDNA文庫(kù)質(zhì)粒為模板，PCR循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性60 s；54℃退火60 s；72℃延伸60 s，35個(gè)循環(huán)；72℃總延伸10 min。PCR后產(chǎn)物行1.0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。將目的基因與pEASY-E1載體25℃連接20 min，冰浴5 min，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入Trans1-T1克隆感受態(tài)細(xì)胞中。挑選單菌落混于10 μL LB培養(yǎng)液中，用相同的引物、體系、循環(huán)參數(shù)分別使用目的基因的上下游引物、目的基因上游引物和T7下游引物、T7上游引物和目的基因下游引物及T7上下游引物進(jìn)行PCR鑒定；將PCR鑒定陽(yáng)性的菌液測(cè)序。

1.2.4 家蠅MDCII在不同發(fā)育時(shí)期、不同組織的表達(dá)分析 提取家蠅不同發(fā)育時(shí)期（卵、各齡期幼蟲(chóng)、蛹及雌雄成蟲(chóng)），以及3齡幼蟲(chóng)不同組織（體壁、氣管、唾液腺、脂肪體、馬氏管及中腸）的總RNA，每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)技術(shù)重復(fù)，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄后，以獲得總cDNA，根據(jù)擴(kuò)增得到的MDCII基因的cDNA序列在其保守序列區(qū)設(shè)計(jì)特異引物，上游引物序列為5'- ATGCAAATTTCATCAGTTTTCATCC-3'；下游引物序列為5'-GGATGAAAACTGATGAAATTTGCAT-3'。內(nèi) 參 根 據(jù) 家 蠅 GAPDH 序 列 設(shè)計(jì)，上游引物為5'-CATCATCTCCGCTCCATC-3'；下游引物為5'-AAGCCATACCAGTGAGTTTACC-3'， 進(jìn) 行qRTPCR檢測(cè)。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性5 s，60℃退火1 min，40個(gè)循環(huán)。

1.2.5 家蠅MDCII在不同微生物誘導(dǎo)后的表達(dá)分析 取大小均一的3齡家蠅幼蟲(chóng)，用顯微注射法分別將大腸埃希菌（Escherichia coli）和金黃色葡萄球（Staphylococcus aureus），白色念珠菌（Candida albicans），注入體內(nèi)。在細(xì)菌刺激后3、6、12、18、24、36和48 h取樣，各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)分別設(shè)置3組平行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象設(shè)有6個(gè)生物重復(fù)。分別提取總RNA，按上述反應(yīng)條件進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。采用比較CT值法對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行相對(duì)定量分析，采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 MDCII基因序列分析

MDCII基因序列包含一個(gè)1 374 bp的完整開(kāi)放閱讀框（ORF），編碼一個(gè)由457氨基酸組成的蛋白，理論分子量約為51.6 kD，等電點(diǎn)約為9.13，含有6個(gè)半胱氨酸，在溶液中性質(zhì)穩(wěn)定。MDCII同舌蠅的幾丁質(zhì)酶成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子（Idgf4）具有53%的相似性，與果蠅的CG520蛋白的相似度為61%。BLAST對(duì)其保守結(jié)構(gòu)域分析顯示，MDCII包含幾丁質(zhì)酶的保守結(jié)構(gòu)域，屬于糖苷水解酶18家族（圖1）。

圖1 BLAST中MDCII保守結(jié)構(gòu)域分析

二級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示，MDCII蛋白有N-糖基化位點(diǎn)1個(gè)，N-肉豆蔻酰化位點(diǎn)7個(gè)，有6個(gè)潛在的蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，1個(gè)甲殼酶18家族的活性位點(diǎn)。MDCII功能結(jié)構(gòu)域?yàn)榈?1位氨基酸到第434位氨基酸間的序列，無(wú)幾丁質(zhì)酶結(jié)合域，含有12個(gè)α螺旋和β折疊。

MDCII的進(jìn)化分析中，所選序列分別來(lái)自果蠅、埃及伊蚊、按蚊和致倦庫(kù)蚊等，結(jié)果（圖2）顯示家蠅MDCII與果蠅成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子的遺傳距離較近。

2.2 MDCII基因cDNA克隆

以MDCII基因的cDNA文庫(kù)質(zhì)粒為模板，用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得與預(yù)期目的基因大小一致的條帶（圖3）。經(jīng)測(cè)序比對(duì)，結(jié)果顯示與目的基因cDNA序列一致。

圖2 MDCII進(jìn)化樹(shù)分析

圖3 MDCII基因重組質(zhì)粒的PCR鑒定圖

2.3 MDCII基因表達(dá)模式

2.3.1 不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式分析 在家蠅的各個(gè)發(fā)育時(shí)期，MDCII基因均有不同程度的表達(dá)。以卵期作為參照，MDCII基因在2齡幼蟲(chóng)中的表達(dá)量最高，其表達(dá)量由高到低依次為：2齡＞3齡幼蟲(chóng)＞1齡幼蟲(chóng)＞雄蟲(chóng)＞蛹＞雌蟲(chóng)＞卵（圖4）。

圖4 MDCII基因在家蠅生活史不同發(fā)育階段的表達(dá)差異

2.3.2 不同組織部位的表達(dá)模式分析 在家蠅3齡幼蟲(chóng)的各主要組織中，以體壁作為參照，MDCII基因在唾液腺和脂肪體中的表達(dá)量較高，其表達(dá)量由高到低依次為：唾液腺＞脂肪體＞馬氏管＞中腸＞氣管＞體壁（圖5）。

2.4 MDCII基因在不同微生物誘導(dǎo)后3齡幼蟲(chóng)體內(nèi)

的表達(dá)差異

3齡幼蟲(chóng)經(jīng)白色念珠菌誘導(dǎo)后，MDCII基因在誘導(dǎo)3 h后出現(xiàn)了明顯的表達(dá)上調(diào)，6 h出現(xiàn)下調(diào)，但與基礎(chǔ)免疫狀態(tài)相比仍處于較穩(wěn)定的高水平狀態(tài)，到達(dá)24 h后，表達(dá)開(kāi)始下調(diào)，直至36 h以后，接近基礎(chǔ)免疫狀態(tài)（圖6）。經(jīng)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌誘導(dǎo)后，MDCII基因在誘導(dǎo)后的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)亦出現(xiàn)明顯的上調(diào)，其在誘導(dǎo)后3 h上調(diào)最為明顯（圖7、圖8）。

圖5 MDCII基因在家蠅3齡幼蟲(chóng)各組織部位的表達(dá)差異

圖6 MDCII經(jīng)白色念珠菌誘導(dǎo)后家蠅3齡幼蟲(chóng)中的表達(dá)差異

圖7 MDCII經(jīng)金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)后家蠅3齡幼蟲(chóng)中的表達(dá)差異

圖8 MDCII經(jīng)大腸埃希菌誘導(dǎo)后家蠅3齡幼蟲(chóng)中的表達(dá)

3 討論

幾丁質(zhì)酶是幾丁質(zhì)降解酶家族的關(guān)鍵酶。Arakane等［18］根據(jù)各種昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)酶的氨基酸序列的同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析，將幾丁質(zhì)酶和幾丁質(zhì)酶類似蛋白分為Ⅰ-Ⅷ型，隨后通過(guò)RNAi技術(shù)和RT-PCR對(duì)這些基因的功能和表達(dá)特異性進(jìn)行了研究［19］，證明了不同類型的幾丁質(zhì)酶及其類似蛋白在昆蟲(chóng)的不同生長(zhǎng)發(fā)育階段和不同組織中的作用具有很大的差異性。昆蟲(chóng)體內(nèi)通常有多種幾丁質(zhì)酶共同存在，發(fā)揮不同的功能［20］。

本研究從家蠅3齡幼蟲(chóng)cDNA文庫(kù)中篩選出MDCII基因，構(gòu)建了原核重組質(zhì)粒，并初步探討了該基因在家蠅發(fā)育和免疫防御過(guò)程中的可能作用。在克隆過(guò)程中所選用的是pESAY-E1表達(dá)載體，帶有T7啟動(dòng)子和Lac，組氨酸標(biāo)簽，因其在與目的片段相連處有突出的胸腺嘧啶（T）與PCR產(chǎn)物中自帶的腺嘌呤（A）相連，故可省略傳統(tǒng)表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中載體及PCR純化產(chǎn)物雙酶切的步驟。但采用的連接方式可能會(huì)導(dǎo)致目的片段與載體啟動(dòng)子閱讀方向反向連接情況出現(xiàn)，因此，在進(jìn)行PCR鑒定時(shí)需要用目的片段前的T7啟動(dòng)子上游引物和目的基因的下游引物、目的基因的上游引物和目的基因后的T7啟動(dòng)子下游引物，以及T7啟動(dòng)子的上下游引物同時(shí)進(jìn)行PCR鑒定。

通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)目的基因時(shí)空表達(dá)模式進(jìn)行研究，探尋該基因在家蠅發(fā)育及免疫防御過(guò)程中的潛在功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MDCII基因在家蠅各發(fā)育時(shí)期都有不同程度的表達(dá)，其中在家蠅幼蟲(chóng)2齡期和3齡期中的表達(dá)量最高，而到達(dá)蛹期表達(dá)量下降，提示MDCII參與了家蠅的生長(zhǎng)發(fā)育。MDCII在3齡幼蟲(chóng)組織中都有較為穩(wěn)定的表達(dá)，其中在唾液腺和脂肪體的表達(dá)量較高。

進(jìn)化分析顯示，MDCII與果蠅成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子（IDGFs）的同源性較高。IDGFs歸屬于幾丁質(zhì)酶V型，現(xiàn)有的研究表明其在昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起到不可或缺的作用。果蠅IDGFs在脂肪體中高表達(dá)，本研究結(jié)果亦顯示MDCII在脂肪體中表達(dá)量較高，提示家蠅和果蠅的IDGFs在組織表達(dá)特性上有相似之處。有研究顯示，除了參與細(xì)胞的增值和分化外，IDGFs還具有免疫功能，有學(xué)者在對(duì)岡比亞按蚊IDGFs進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，這類蛋白在金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌誘導(dǎo)后出現(xiàn)明顯上調(diào)，其原因主要因?yàn)檫@類蛋白可能作用于細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，激活相應(yīng)的免疫應(yīng)答，抵制細(xì)菌［21］。舌蠅的成蟲(chóng)盤生長(zhǎng)因子可以抵制含幾丁質(zhì)的微生物（如真菌）的侵染，但具體作用機(jī)制尚未研究清楚［22］。家蠅MDCII基因在白色念珠菌、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌誘導(dǎo)后均出現(xiàn)明顯的表達(dá)上調(diào)，推測(cè)家蠅MDCII基因也參與了家蠅對(duì)病原微生物的免疫防御過(guò)程，在機(jī)體的抗菌過(guò)程中亦發(fā)揮一定的作用。

4 結(jié)論

本研究成功構(gòu)建pEASY-E1-MDCII重組表達(dá)質(zhì)粒，通過(guò)生物信息學(xué)分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)MDCII基因?qū)儆诔上x(chóng)盤生長(zhǎng)因子，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，初步研究了MDCII基因參與了家蠅的生長(zhǎng)發(fā)育，在免疫防御過(guò)程中也發(fā)揮了一定作用。

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（責(zé)任編輯 狄艷紅）

Construction of the Recombinant Expression Plasmid and Expression Pattern of Chitinase Gene MDCII from Musca domestica

YANG Yu-jin1GUO Guo1WU Qin-yi2LI Yan1FU Ping1ZHANG Yong1
（1. Guizhou Medical University，Guiyang 550004；2. Cancer Molecular Diagnostics & Immunotherapy Center，the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550004）

The aims of this study are to isolate the chitinase gene MDCII from Musca domestica EST sequencing database，to clone the gene and analyze its molecular characteristic，and to explore the temporal-spatial expression patterns of the gene in different tissues and different developmental stages as well as after induced by different microorganism. Firstly，EST sequencing technology was employed to screen the chitinase gene MDCII from the constructed cDNA plasmid library of M. domestica larvae，the bioinformatics method to analyze the gene sequence and physicochemical properties of the encoded protein，and the neighbor joining to build phylogenetic tree. Then，the target gene amplified by PCR then was constructed into the recombinant plasmid pEASY-E1-MDCII，the recombinant plasmid was transformed in clonal cell Trans1-T1，and the real-time PCR technology was to detect the expression difference of the MDCII gene in different developmental stages and different tissues. Finally，injection method was used to induce different microorganisms into the 3 instar larvae of M. domestica，and realtime PCR to detect the changes of expression level in different time points after inducing. The results indicated that the ORF length of the MDCII gene was 1 374 bp，encoding 457 amino acids，and the molecular weight 51.6 kD. The alignment analysis of the phylogenetic tree revealed that the genetic distance of MDCII was close to the adult growth factor of Drosophila. The recombinant plasmid pEASY-E1-MDCII with correctgene sequence was successfully constructed. The MDCII gene expressed in different developmental stages of M. domestica at different expression levels，and the highest in salivary glands and fat body of 3 instar larva. The MDCII gene presented up-regulated expression at 3 h after induction of Candida albicans，Staphylococcus aureus，and Escherichia coli. In conclusion，the MDCII gene is the adult growth factor in chitinase，participating in growth and development of M. domestica，and also playing a certain role in immune defense process.

Musca domestica；chitinase；clone；expression pattern

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.02.015

2016-11-07

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81560337，81160204）

楊尉錦，女，碩士研究生，研究方向：昆蟲(chóng)分子免疫；E-mail：879123782@qq.com

國(guó)果，女，博士，研究方向：昆蟲(chóng)分子免疫；E-mail：guoguojsc@163.com