三葉因子家族1和細胞周期蛋白 D1在胃癌組織中的表達及意義

王慧慧 金仁順

(延邊腫瘤醫院病理科，吉林 延吉 133000)

三葉因子家族1和細胞周期蛋白 D1在胃癌組織中的表達及意義

王慧慧 金仁順1

(延邊腫瘤醫院病理科，吉林 延吉 133000)

目的 探討三葉因子家族(TFF)1和細胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌組織中的表達及意義。方法 收集胃癌標本72例，采用免疫組化SABC染色方法，觀察癌旁胃黏膜及胃癌組織中的TFF1和CyclinD1的表達，分析兩者與臨床病理參數之間的關系及兩者的相關性。結果 TFF1在癌旁黏膜及胃癌組織中陽性表達率分別為100.0%和63.3%，CyclinD1分別為69.8%和41.7%，兩者差異顯著(P<0.01，P<0.05)；TFF1和CyclinD1在有淋巴結轉移組分別為76.3%及55.6%，無轉移組分別為40.9%和18.5%，兩者差異顯著(P<0.01)；TFF1的表達與胃癌的分化程度無關，而CyclinD1在低分化和高中分化腺癌中的表達分別為53.5%和24.1%，兩者有統計學差異(P<0.05)；TFF1在細胞質中表達陽性的同時在細胞核中也有表達，其陽性率與腫瘤細胞的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移有關。TFF1和CyclinD1 在胃癌中表達呈正相關。結論 TFF1和CyclinD1表達下調可能在胃癌發生過程中起作用，TFF1在胃癌的不同時期、不同階段可能起不同作用，TFF1和CyclinD1的低表達可作為胃癌的預后指標。

胃癌；三葉因子家族；細胞周期蛋白D1

三葉因子家族(TFF)是近年研究較多的一種小分子多肽，在正常生理條件下主要表達于胃腸道黏膜，研究認為TFF1不僅對胃腸黏膜起保護修復作用，而在腫瘤的發生、發展過程中起重要作用，而TFF1在不同腫瘤中其表達意義可能不同〔1,2〕。本研究采用免疫組化方法檢測TFF1和細胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌組織中的表達，分析其與胃癌的臨床病理參數間的關系以及兩者之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 胃癌標本72例，男62例，女10例；年齡34～81(中位年齡63.2)歲,高中分化腺癌29例，低分化腺癌43例；浸潤至漿膜層51例，浸潤至肌層21例；無淋巴結轉移27例，有淋巴結轉移45例；賁門癌22例，胃竇癌50例。TFF1檢測有效病例癌旁49例，胃癌60例；Cyclin D1檢測有效病例癌旁63例，胃癌72例。

1.2 方法 所有標本經10%甲醛溶液固定24～48 h，常規石蠟包埋，進行連續切片，厚度為4 μm，癌旁黏膜作為內對照，分別進行蘇木素-伊紅(HE)染色和免疫組化染色，光鏡下觀察染色結果，免疫組化采用SABC法(TFF1和 CyclinD1及試劑盒購自中彬金橋生物技術有限公司)，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，陰性對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。

1.3 結果判斷 TFF1在細胞質和(或)核內有棕黃色顆粒為陽性，CyclinD1在細胞核著色為陽性。判斷標準：根據陽性細胞數占同類細胞總數的百分比及染色強度進行分級：①無著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分；②計數500個細胞，按顯色細胞占觀察細胞的比例：<5%為0分；6%～50%為1分；>50%為2分。兩項結果相加<2分為陰性(-)；2～3分為弱陽性(+)；4～5分為強陽性()。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0統計學軟件進行χ2檢驗，Spearman等級相關分析。

2 結 果

2.1 TFF1和CyclinD1在癌旁組織及胃癌組織中的表達 在49例癌旁黏膜及60例胃癌組織中，TFF1陽性率分別為100%(49/49)和63.3%(38/60)，兩者間有統計學差異(χ2=22.51，P<0.01)；CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌組織中陽性率分別為69.8%(44/63)和41.7%(30/72)，兩者間有統計學差異(χ2=10.769%，P<0.01)。見圖1,圖2。

2.2 TFF1表達部位與胃癌的生物學行為關系 38例細胞質表達陽性的胃癌組織中，有14例核同時表達陽性，其中低分化腺癌12例，浸潤至漿膜層11例，有淋巴結轉移10例。

圖1 TFF1在癌旁黏膜及胃癌組織中的表達(DAB,×200)

2.3 TFF1和CyclinD1蛋白表達與臨床病理特征的關系 TFF1在胃癌中的表達與有無淋巴結轉移有關(P<0.01)，但與

患者的性別、年齡、分化程度和浸潤深度均無相關。另外，TFF1在賁門癌中的表達率高于胃竇癌(P<0.01)。CyclinD1在胃癌中的表達與組織類型和淋巴結轉移有關(P<0.05，P<0.01)，但與患者的性別、年齡、浸潤深度及胃癌的發生部位均無相關(P>0.05)。見表1。

2.4 TFF1和CyclinD1在胃癌組織中表達的相關性 TFF1與CyclinD1表達呈正相關性(r=0.272，P=0.035)。

圖2 CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌組織中的表達(DAB,×200)表1 TFF1、CychinD1表達與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

病理因素TFF1(n=60)nn(%)χ2值P值CyclinD1(n=72)nn(%)χ2值P值性別男5132(62.7)0.0510.8226227(43.5)0.6500.420女96(66.7)103(30.0)年齡(歲)<603020(66.7)0.2870.5923212(37.5)0.4110.521≥603018(60.0)4018(45.0)分化程度高中分化1910(52.6)1.3710.242297(24.1)6.1380.013低分化4128(68.3)4323(53.5)淋巴結轉移有3829(76.3)7.5220.0064525(55.6)9.5240.002無229(40.9)275(18.5)浸潤深度至漿膜4729(61.7)0.2490.6185125(49.0)3.8900.049至肌層139(69.2)215(23.8)部位賁門癌2017(85.0)6.9100.0092210(45.5)0.1870.665胃竇癌4020(50.0)5020(40.0)

3 討 論

眾多惡性腫瘤過表達TFF，但其表達是腫瘤形成后的下游因素還是促進腫瘤形成的上游因素尚不明確。胃腸道是TFFs的主要合成部位，其中TFF1主要表達在胃黏膜表面上皮，目前認為TFF1具有抗增殖抗凋亡雙重作用，其作用可能與靶細胞、細胞內外環境不同及其受體變化有關〔3〕。

在正常生理條件下，TFF1對正常胃黏膜具有保護作用，但胃黏膜發生病變后其表達下降可能失去正常保護作用，而TFF1蛋白表達缺失又可能導致胃黏膜過度增生和缺乏分化，從而造成異型增生，導致腫瘤的發生，認為TFF1對胃腫瘤的發生可能起抑制作用〔4,5〕。研究發現在彌漫型進展期胃癌中TFF1蛋白的表達水平高于腸型胃癌，浸潤胃壁全層者高于僅侵及肌層者〔6〕，認為TFF1蛋白可能通過旁分泌或自分泌對靶細胞起到刺激作用從而促進腫瘤生長作用，還可能作用于腫瘤細胞本身，使腫瘤細胞增殖、黏附力下降或產生分解酶作用于基質，或通過其生長因子作用使腫瘤細胞運動能力增強〔7〕，從而影響腫瘤細胞的侵襲能力和轉移，這一觀點說明了TFF1與胃癌轉移之間存在著一定的關系，證明了TFF1有促進腫瘤細胞浸潤作用。本實驗結果提示TFF1蛋白不僅與腫瘤的浸潤有關，還與腫瘤的轉移有關，可作為胃癌預后不良的指標。在本實驗中，我們還發現TFF1在賁門癌中的表達率高于胃竇癌，在不同部位胃癌中其表達率不同，其原因尚不清楚，有待于進一步研究。

在本研究結果中，有14例胃癌細胞質和核同時表達TFF1，這種現象與腫瘤的生物學行為有關，即胃癌的惡性度越高、浸潤深度越深及有淋巴結轉移者其核表達率越高，因此，認為TFF1在胃癌的后期可能促進腫瘤細胞的增殖，起促癌作用，TFF1核表達可作為胃癌的預后不良的重要指標。目前，TFF1在核內表達機制尚不很清楚，有文獻報道TFF1表達部位從細胞質逐漸向核周聚集時，喪失對胃黏膜上皮細胞的保護功能，從而造成胃黏膜的異型增生，最終導致胃癌的發生〔8〕。

CyclinD1是細胞周期調控中的重要分子，在腫瘤的發生、發展過程中起著正性調控作用，影響著腫瘤的生物學行為〔9,10〕。本結果說明CyclinD1的表達與胃癌形成有關，提示在正常胃黏膜中CyclinD1表達水平較高，但達到一定水平后，在CyclinD1的刺激下，黏膜上皮細胞過度生長、分裂及增殖，最終向惡性轉化，如一旦發生惡變其表達水平隨之下降，因此認為CyclinD1不僅參與胃癌的發生，而且在胃癌發生的早期階段起作用。另外，在本實驗中CyclinD1與腫瘤的分化程度及淋巴結轉移有關，即在低分化腺癌和有淋巴結轉移的癌組織中陽性表達率高于高中分化腺癌和無淋巴結轉移，可見CyclinD1在腫瘤形成之前其表達量增加，但胃黏膜發生惡變后隨之下降，之后隨著腫瘤細胞的惡性度增高及腫瘤的轉移其表達量又開始上升，即非腫瘤↑→惡變↓→高分化↓→低分化及轉移↑，說明CyclinD1的表達與胃癌的不同時期、不同發展階段及預后有密切相關,認為檢測CyclinD1蛋白的表達，對判斷胃癌的惡性程度、轉移以及評估預后也具有重要意義。

目前的研究認為，在細胞周期過程中，TFF1介導細胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑p16及p21的水平增加，抑制CyclinD1和細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶(CDK)4復合體的活性發揮作用〔3〕。本研究中TFF1和CyclinD1在癌旁黏膜中的表達均高于胃癌組織，兩者的表達與淋巴結轉移有關，并在分化差的腺癌中有較高的表達水平，另外，CyclinD1強表達組織中TFF1也呈強表達，提示了在胃癌發生和進展過程中兩者有一定的相關性，兩者可能協同促進胃癌的發生、發展。

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〔2015-04-18修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

吉林省教育廳項目〔吉教科合字2012第6號〕

金仁順(1964-)，女，主任醫師，博士，碩士生導師，主要從事腫瘤病理學研究。

王慧慧(1981-)，女，碩士，主治醫師，主要從事腫瘤病理學研究。

R735.2

A

1005-9202(2017)03-0660-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.061

1 延邊大學附屬醫院病理科