蝴蝶蘭類原球莖分化的開放組培試驗研究

劉福平　蔡曉東

摘要 以自行研制的抗菌劑進(jìn)行蝴蝶蘭原球莖分化成苗開放組培試驗。培養(yǎng)基1/2MS+3 g/L 6-BA+100 g/L香蕉泥+20 g/L蔗糖+1.0 g/L活性炭+6.3 g/L瓊脂條，處理組附加適當(dāng)濃度的抗菌劑。培養(yǎng)45 d觀察發(fā)現(xiàn)抗菌劑能有效抑制培養(yǎng)基污染，類原球莖能全部分化成苗，平均苗高（2.6±0.4）cm，與對照（高壓滅菌）差異不顯著，葉片數(shù)1～2片、>0.5 cm根1～3條，與對照一致。由此表明，蝴蝶蘭類原球莖分化成苗的開放組培確實可行。

關(guān)鍵詞 蝴蝶蘭；開放組培；類原球莖；分化成苗

中圖分類號 S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）21-0115-01

植物開放組培[1]指在培養(yǎng)基中添加抗菌劑，免去高壓滅菌，接種免超凈工作臺可在相對開放的環(huán)境進(jìn)行，具有培養(yǎng)基成分免遭破壞、減少瓊脂用量等特點，在幾種植物組培[1-8]中已有試驗。開放組培在蝴蝶蘭組培苗生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用，將在降低能源消耗、提高工作效率、降低苗木成本、提高市場競爭力等方面有較大意義。筆者利用自主研發(fā)的抗菌組培復(fù)配抗菌劑，成功應(yīng)用于多種植物種子的萌發(fā)試驗[9]，本文報道蝴蝶蘭類原球莖分化成苗（長芽生根）的開放組培試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

蝴蝶蘭（Phalaenopsis ssp.）組培類原球莖（PLB）由福建省亞熱帶植物研究所組培實驗室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基配制方法。650 mL玻璃蘭花瓶預(yù)先84消毒水浸泡30 min，晾干。培養(yǎng)基1/2MS+3 mg/L 6-BA+100 g/L香蕉泥+20 g/L蔗糖+1.0 g/L活性炭+6.3 g/L瓊脂條（常規(guī)用量70%）。培養(yǎng)基各組分常規(guī)方法加熱完全熔化，斷開熱源，定容，處理組每升培養(yǎng)基加入抗菌劑A（主要成分為乙蒜素）0.3 mL和抗菌劑 B（主要成分為苦參堿）0.8 mL，調(diào)pH值至5.6，不經(jīng)高壓滅菌，直接分裝到培養(yǎng)瓶。15 min內(nèi)加蓋靜置存放。對照培養(yǎng)基不添加抗菌劑，瓊脂條0.9%，pH值5.8，常規(guī)高壓滅菌。

1.2.2 接種方法。接種免超凈臺，普通接種室用75%酒精噴霧降塵、開紫外燈照射20 min，用75%酒精將接種臺面和手擦干凈，在臺面接種操作，對照在超凈工作臺常規(guī)方法接種。每瓶接種類原球莖12粒。

2 結(jié)果與分析

類原球莖培養(yǎng)45 d后觀察長葉生根情況見表1。可以看出，對照（高壓消毒）與開放組培培養(yǎng)基都只有1瓶污染，污染率相同，說明該抗菌劑濃度能有效抑制培養(yǎng)基微生物污染。未污染培養(yǎng)基的類原球莖可全部成活并分化成苗，培養(yǎng)45 d后平均苗高t檢驗差異顯著性，t統(tǒng)計量-0.92，絕對值小于t（0.05）臨界值2.05，即差異不顯著，葉數(shù)、>0.5 cm根數(shù)一致，表明該抗菌劑對蝴蝶蘭類原球莖長葉生根沒有明顯抑制作用。

3 討論

開放式組培的技術(shù)關(guān)鍵是在培養(yǎng)基中添加一定濃度的抗菌劑，既能有效抑制培養(yǎng)基微生物污染，又對所培養(yǎng)植物沒有明顯的毒副作用。目前，熱門的蘭科植物（鐵皮石斛、金線蓮、蝴蝶蘭、大花蕙蘭）的組織培養(yǎng)均采用大培養(yǎng)瓶（約650 mL）分裝培養(yǎng)基，培養(yǎng)基還添加富含營養(yǎng)的果蔬汁液，這2個因素將導(dǎo)致培養(yǎng)基污染概率明顯提高，所以必須添加較高的抗菌劑劑量以控制污染，同時又要對所培養(yǎng)植物沒有明顯的毒副作用，這在實際操作中存在一定難度，制約了開放式組培技術(shù)的廣泛應(yīng)用。本試驗利用自主研發(fā)的開放組培抗菌劑，證明添加香蕉汁且用大培養(yǎng)瓶分裝，開放組培蝴蝶蘭類原球莖分化（長芽生根）是可行的，該結(jié)果為培養(yǎng)基添加果蔬汁液且用大培養(yǎng)瓶分裝的開放組培提供借鑒。

4 參考文獻(xiàn)

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