川崎病患兒血漿吲哚胺2，3雙加氧酶含量的研究〔1〕

沈杰，章毅英，解春紅，龔方戚

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院，浙江 杭州 310051)

川崎病患兒血漿吲哚胺2，3雙加氧酶含量的研究〔1〕

沈杰，章毅英，解春紅，龔方戚

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院，浙江 杭州 310051)

目的：探究川崎病(KD)患兒血漿吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)含量變化與其發(fā)病的相關(guān)性。方法：選取2015年1月—2015年3月心血管內(nèi)科住院的KD患兒20 例作為觀察組，另選擇20 例健康體檢兒童作為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別檢測(cè)觀察組急性期及恢復(fù)期血漿IDO含量以及對(duì)照組血漿IDO含量，并進(jìn)行比較。結(jié)果：觀察組KD患兒急性期IDO含量明顯增高，與對(duì)照組及恢復(fù)期IDO含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。觀察組恢復(fù)期IDO含量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組內(nèi)男女不同性別之間血漿IDO含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：血漿IDO在川崎病患兒急性期含量增高，可能參與了KD患兒急性期免疫性炎癥反應(yīng)。IDO的表達(dá)水平與性別無(wú)關(guān)。

川崎病；吲哚胺2，3雙加氧酶；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

川崎病(KD)，又稱黏膜皮膚淋巴結(jié)綜合征(MCLS)，其病因及發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明。大量臨床及流行病學(xué)資料提示KD可能是一種或多種廣泛分布的感染原在某些遺傳易感的個(gè)體中引起異常的急性自身免疫性血管炎綜合征，但導(dǎo)致免疫異常的調(diào)控因素仍不清楚[1]。吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)參與色氨酸(Trp)沿犬尿氨酸途徑的分解代謝，是這條代謝途徑中的限速酶。有研究發(fā)現(xiàn)，IDO參與多種疾病的免疫調(diào)節(jié)，如抗病毒免疫、自身免疫性疾病、腫瘤的免疫逃避以及移植免疫等[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)KD患兒急性期及恢復(fù)期血漿IDO的含量與正常對(duì)照組比較，探討其臨床意義，為探索IDO是否參與KD的免疫性發(fā)病提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2015年3月心血管內(nèi)科住院KD患兒20 例作為觀察組，其中男女各10 例，年齡7個(gè)月～5 歲。入選患者均符合美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)定義的KD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。急性期定義為發(fā)病10 d內(nèi)。恢復(fù)期定義為急性期癥狀已消失、C反應(yīng)蛋白(CRP)及血沉已降至正常范圍。選取同一時(shí)期來(lái)我院體檢的健康兒童20 例作為對(duì)照組，其中男女各10 例，年齡6個(gè)月～5 歲。兩組病例一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有入選者對(duì)本研究均知情同意。

1.2 檢測(cè)方法

空腹采靜脈血3 mL，以EDTA抗凝，混合10～20 min后，2 000～3 000 r/min離心20 min，收集上清，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩⒄杖薎DO酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒操作步驟進(jìn)行操作，在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量吸光度(OD值)。以標(biāo)準(zhǔn)物制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 觀察組KD患兒急性期IDO含量與其恢復(fù)期及對(duì)照組的比較

觀察組KD患兒急性期血漿IDO含量為(776.73±298.32) pg/mL，恢復(fù)期血漿IDO含量為(254.39±72.36) pg/mL，對(duì)照組兒童血漿IDO含量為(232.09±113.17) pg/mL，結(jié)果提示KD患兒急性期血漿IDO含量明顯增高，與對(duì)照組及恢復(fù)期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。KD患兒恢復(fù)期IDO含量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 不同性別之間的血漿IDO含量比較

急性期男患兒IDO含量為(809.31±346.28) pg/mL，急性期女患兒IDO含量(744.15±256.15) pg/mL；恢復(fù)期男患兒IDO含量(269.05±88.77) pg/mL，恢復(fù)期女患兒IDO含量為(239.74±51.92) pg/mL；對(duì)照組男孩IDO含量為(235.88±110.62) pg/mL，對(duì)照組女孩IDO含量為(228.30±121.52) pg/mL，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析各組內(nèi)男女不同性別之間IDO含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

KD是一種病因不明的急性全身性自身免疫性血管炎，好發(fā)于5 歲以下嬰幼兒，亞裔發(fā)病率最高，病變主要累及中小動(dòng)脈，尤其是冠狀動(dòng)脈，可形成冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張或冠狀動(dòng)脈瘤，是成年后缺血性心臟病的危險(xiǎn)因素之一。目前該病已取代風(fēng)濕熱，成為發(fā)達(dá)國(guó)家或地區(qū)小兒后天性心臟病的首要原因。雖然該病自1967年首次報(bào)道以來(lái)各國(guó)已開展40多年的研究，但其病因及發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。近幾年的臨床和實(shí)驗(yàn)研究一致認(rèn)為KD是由一種或多種廣泛分布的外源性抗原觸發(fā)在某些遺傳易感的個(gè)體中引起異常的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致KD一系列特征性的臨床表現(xiàn)；免疫系統(tǒng)的異常活化及免疫損傷性血管炎是KD的基本病理特征。在KD急性期，各種免疫細(xì)胞包括T細(xì)胞、B細(xì)胞及單核/巨噬細(xì)胞等被激活，促發(fā)眾多炎癥因子基因的表達(dá)，T細(xì)胞介導(dǎo)的異常免疫應(yīng)答及細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙是KD血管炎性損傷的基礎(chǔ)。研究表明，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6、內(nèi)皮素、P選擇素等的顯著升高在KD進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。臨床上KD急性期經(jīng)大劑量靜脈用免疫球蛋白(IVIG)和口服阿司匹林治療，KD患兒中仍有5%并發(fā)冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張或冠狀動(dòng)脈瘤[1，4]。因此，探索與KD發(fā)病相關(guān)的免疫性血管炎癥反應(yīng)機(jī)制將有助于尋找新的治療對(duì)策，改進(jìn)治療方案，提高治愈率，減少并發(fā)癥，改善預(yù)后。

IDO是細(xì)胞內(nèi)一種含亞鐵血紅素的酶，廣泛分布于人和其他哺乳類動(dòng)物除肝臟以外的組織中，在小腸、肺、腎、腦、胎盤等多種組織中表達(dá)，而且特異性地表達(dá)在單核巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞上。在這些細(xì)胞上IDO能夠被脂多糖(LPS)、細(xì)胞因子(如IFN-α、IFN-γ及TNF-α等)誘導(dǎo)表達(dá)。IDO是肝臟以外催化色氨酸分子中的吲哚環(huán)氧化裂解，從而沿色氨酸-犬尿氨酸分解代謝的最主要的限速酶，人體內(nèi)約95%的色氨酸是通過(guò)此途徑代謝的。IDO通過(guò)降解色氨酸，使局部組織中的色氨酸耗竭，色氨酸的代謝產(chǎn)物犬尿氨酸的濃度增加，從而抑制T淋巴細(xì)胞的增殖[5-8]。多項(xiàng)研究證實(shí)，在炎性反應(yīng)相關(guān)疾病中，IDO的活化可導(dǎo)致血清色氨酸水平降低和犬尿氨酸的水平升高[2，9]。自身免疫性疾病是指機(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)而導(dǎo)致自身組織損害所引起的疾病。目前，有關(guān)學(xué)者認(rèn)為自身免疫性疾病的發(fā)生與自身免疫的失耐受相關(guān)，即機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)自身抗原的抗體并使自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的異常活化而致發(fā)病。IDO作為免疫平衡的一個(gè)重要調(diào)節(jié)器，通過(guò)自身免疫反應(yīng)，能誘導(dǎo)外周免疫耐受和調(diào)控自體免疫反應(yīng)。IDO誘導(dǎo)的免疫耐受和在自身免疫性疾病中的作用越來(lái)越受到重視。最近研究表明，IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝異常存在于多種自身免疫性疾病中，如免疫性血小板減少癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Graves病等[5，10]。 KD為自身免疫性疾病，急性期存在炎癥反應(yīng)及免疫激活。我們推測(cè)隨著KD急性期細(xì)胞因子的釋放，可能會(huì)激活異常的IDO表達(dá)增加，色氨酸犬尿氨酸代謝途徑被上調(diào)，繼而引起一系列代謝產(chǎn)物的改變，在KD自身免疫性血管炎性反應(yīng)中起一定的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)KD患兒急性期血漿IDO含量明顯增高，與恢復(fù)期及對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明KD患兒急性期可能存在IDO的異常表達(dá)，從而參與異常的免疫性炎癥反應(yīng)。觀察組及對(duì)照組中不同性別之間IDO含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明IDO表達(dá)水平與性別差異可能無(wú)關(guān)。因本研究樣本數(shù)量有限，尚有待今后擴(kuò)大樣本量，并進(jìn)一步檢測(cè)IDO的生物活性及分子表達(dá)水平，以便更確切地闡明IDO活性及表達(dá)與KD急性期發(fā)病的相關(guān)性，為今后探索通過(guò)調(diào)控IDO的活性及表達(dá)來(lái)防治KD的新途徑提供研究基礎(chǔ)。

[1]NEWBURGER J W，TAKAHASHI M，BURNS J C.Ka-wasaki disease[J].J Am Coll Cardiol，2016，67(14)：1 738-1 749.

[2]REFAAT M M，ABDEL REHIM A S，EI-SYED H M，et al.Serum indolamine 2，3 dioxygenase as a marker in the evaluation of allergic rhinitis[J].Am J Rhinol Allergy，2015，29(5)：329-333.

[3]NEWBURGER J W，TAKAHASHI M，GERBER M A，et al.Diagnosis，treatment，and long-term management of kawasaki disease：a statement for health professionals from the committee on rheumatic fever，endocarditis，and kawasaki disease，council on cardiovascular disease in the young，American heart association[J].Pediatrics，2004，114(6)：1 708-1 733.

[5]曾玉，吳新忠.吲哚胺2，3-雙加氧酶與自身免疫性疾病[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29(19)：3 257-3 259.

[6]卞秀梅，吳正祥.IDO在炎癥性腸病中的研究進(jìn)展[J].國(guó)際消化病雜志，2014，34(2)：106-109.

[7]ALDAJANI W A，SALAZAR F，SEWELL H F，et al.Expression and regulation of immune-modulatory enzyme indoleamine 2，3-dioxygenase (IDO) by human airway epithelial cells and its effect on T cell activation[J].Oncotarget，2016，7(36)：57 606-57 617.

[8]SELVAN S R，DOWLING J P，KELLY W K，et al.Indoleamine 2，3-dioxygenase (IDO)：biology and target in cancer immunotherapies[J].Curr Cancer Drug Targets，2016，16(9)：755-764.

[9]YILMAZ N，USTUNDAG Y，KIVRAK S，et al.Serum indoleamine 2，3 dioxygenase and tryptophan and kynurenine ratio using the UPLC-MS/MS method，in patients undergoing peritoneal dialysis，hemodialysis，and kidney transplantation[J].Ren Fail，2016，38(8)：1 300-1 309.

[10]PéREZ-DE LA CRUZ V，K?NIGSBERG M，SANTAMARíA A.Kynurenine pathway and disease：an overview[J].CNS Neurol Disord Drug Targets，2007，6(6)：398-410.

Serum indoleamine 2，3 dioxygenase in children with Kawasaki disease

SHEN Jie，ZHANG Yiying，JIE Chunhong，GONG Fangqi

(The Children′s Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310051，China)

Objective：To detect the level of IDO in patients with Kawasaki disease and analyze correlation between IDO and Kawasaki disease.Methods：Selected 20 cases of KD hospitalized in January 2015 to March 2015 and 20 cases of healthy volunteers.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was adopted to detect the serum levels of IDO.The detection results of all those cases were compared and analyzed.Results：The serum IDO level of the acute phase KD group was significantly higher than that of both the normal control group and the recovery phase KD group(P<0.01).There is no significant difference of IDO level between the recovery phase KD group and the normal control group(P>0.05).There is also no significant gender difference of IDO level among all those groups(P>0.05).Conclusion：The serum IDO level increased in the acute phase KD patients.It might was involved in the acute immune reaction of KD.The IDO level might was not affected by gender.

kawasaki disease；indoleamine 2，3 dioxygenase；enzyme linked immunosorbent assay

1671-8631(2017)04-0253-03

〔1〕本課題為浙江省中醫(yī)藥普通項(xiàng)目研究資助項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2009CB048)；浙江省教育廳科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：Y201017610)

R730.5

A

2016-10-14

(本文編輯：王作利 )

沈杰(1973— )，女，浙江省杭州市人，博士學(xué)位，主治醫(yī)師。研究方向：小兒心血管疾病。