超聲在研究腎癌彩色血流平均密度與微血管密度相關性中的應用

崔濤，葛明珠，趙燕輝，張延輝，徐濤，劉春雷

1.青島市中心醫院 泌尿外科，山東 青島 266042；2.青島市腫瘤醫院 腹部超聲科，山東 青島 266042

超聲在研究腎癌彩色血流平均密度與微血管密度相關性中的應用

崔濤1，葛明珠2，趙燕輝1，張延輝1，徐濤1，劉春雷1

1.青島市中心醫院 泌尿外科，山東 青島 266042；2.青島市腫瘤醫院 腹部超聲科，山東 青島 266042

目的探討腎癌手術前超聲檢測彩色血流平均密度（Mean Color Vessel Density，MCVD）與手術后病理組織學分級及微血管密度（Micro Vessel Density，MVD）的相關性。方法對經手術病理確診的69例腎癌患者術前行超聲檢查，根據彩色血管能量成像結果，計測MCVD值，術后對腫瘤組織標本進行病理組織學分級，用免疫組化染色法檢測MVD值，并對結果進行相關性統計學分析。結果腎癌病灶中MCVD值越高，檢測的MVD值也越高，兩者呈正相關（r=0.998，P＜0.05）；術后病理組織學分級Ⅰ～Ⅲ級，各病理組織學分級的MCVD與MVD比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論超聲檢測腎癌的MCVD值與術后病理組織學分級和MVD值有較好的相關性，而且具有無創傷、可重復性等特點，可作為術前評價腎癌新生血管的可靠方法。對腎癌的早期診斷、治療及評估預后等均有重要的臨床指導意義。

超聲；彩色血流平均密度；腎腫瘤；微血管密度；病理組織學

引言

腎細胞癌（Renal Cell Carcinoma，RCC），約占成人惡性腫瘤的2%～3%[1]，是腎臟惡性腫瘤中最常見的類型，癥狀出現晚，預后不佳。絕大多數腎癌屬于多血管實體腫瘤[2]，腫瘤內的血管生成情況與其生物學行為密切相關。微血管密度（Micro Vessel Density，MVD）是目前評價腫瘤內新生血管最常用的定量指標，MVD需要在在術后取得組織標本的基礎上進行，而在超聲彩色血管能量成像（Color Power Angiography，CPA）的基礎上檢測彩色血流平均密度（Mean Color Vessel Density，MCVD），具有無創傷、可重復性、可定量等特點，可作為手術前評價腫瘤新生血管的方法。現回顧性分析研究2012年5月～2015年2月間我院收治的69例腎癌患者的手術前MCVD值與術后病理組織學分級、與MVD的相關性，討論超聲檢測MCVD在評價腎癌新生血管系統方面的意義，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年5月～2015年2月間我院收治的腎癌患者69例，均進行超聲檢查并經手術和病理證實（透明細胞癌64例，乳頭狀癌5例）。男48例，女21例，年齡29～81歲，平均58歲。其中31例因無痛性血尿就診，22例因腰部不適就診，6例在體檢中發現，5例因消瘦就診，5例因其他原因就診。全部患者手術前均未進行放療或化療。本研究中納入的病例均已獲得患者知情同意并簽署相關文書，并獲得青島市中心醫院倫理委員會審批通過。

1.2 儀器與方法

使用美國GE LOGIQ E9型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率3.5 MHz。超聲檢測MCVD：囑患者側臥位，常規二維超聲多切面掃查，明確腫瘤位置，觀察腎癌病灶的圖像特點（包括腫瘤大小、液化壞死區域的大小、邊界、內部回聲等）；測量在圖像顯示清晰的情況下進行，測量3次病灶的最大徑，取平均值；在圖像清楚時應用CPA顯示病灶內血流分布特點，取最大范圍且病灶內血流信號最豐富的區域切面圖后凍結圖，存儲；用計算機圖像分析軟件計算病灶內的彩色血流的面積和病灶面積（根據腫瘤最大徑的平均值計算出的面積減去液化壞死區域的面積），MCVD即為二者的比值。

病理組織學檢查：全部標本均經10%甲醛固定，常規脫水后，石蠟包埋，所有蠟塊連續切片4張，一張作HE染色，一張做免疫組化，其余備用。病理組織學分級：按照腎癌的組織學結構將其分化水平分為3級[3]，I級為高分化型，包括腺管型、乳頭型、腺泡型；Ⅱ級為中分化實性片型；Ⅲ級為低分化（未分化）型。

應用免疫組化法檢測微血管密度：采用即用型鼠抗人CD34單克隆抗體，以腫瘤血管內皮細胞呈棕色或棕黃色染色為陽性判斷標準。根據Weider血管計數法[4]，計數微血管管密度，首先在100倍鏡下選取切片中內皮細胞染色最密集的5個區域，再在400倍鏡下計數每個視野下染成棕色的血管數目。被染成棕黃色的單個內皮細胞或內皮細胞簇計為1個血管，只要結構不相連，與周圍相近組織有明顯界線，其分支結構也計作1個微血管計數。取其平均值即作為該例的MVD值。

1.4 統計學分析

所有患者數據采用SPSS 17.0進行統計學分析。所有檢測數據以均數±標準差（±s）表示。采用Pearson法分析MCVD值和MCD值的相關性，采用單因素方差分析比較腎癌不同病理組織學分級之間的MCVD值和MCD值，P＜0.05為差異有顯著統計學意義。

2 結果

69例腎癌患者術前經超聲CPA后，計測的MCVD值均數為（0.31±0.11），術后病理組織標本經免疫組化法檢測的MVD值均數為（51.21±10.62）/400倍視野，采用Pearson法分析兩者的關系，呈正相關（r=0.998，P=0.037）。

比較69例腎癌患者不同病理組織學分級的MCVD值和MVD值，見表1。采用單因素方差分析各病理組織學分級之間的MCVD值、MCD值，比較差異均具有統計學意義（P＜0.05），而且病理組織學分級越高，MCVD值和MCD值也隨之增高。Ⅰ級和Ⅱ級患者彩色血管能量成像圖和免疫組織學染色圖，見圖1。

表1 69例不同病理分級腎癌患者病灶的MCVD、MVD值關系（±s）

表1 69例不同病理分級腎癌患者病灶的MCVD、MVD值關系（±s）

病理組織學分級 例數 MCVD MVD (400×)Ⅰ 級 21 0.15±0.11 36.5±11.2Ⅱ級 38 0.26±0.08 49.3±15.3Ⅲ 級 10 0.35±0.09 57.8±16.9 P值 ＜0.05 ＜0.05

3 討論

研究證實，實體腫瘤在其發生、發展的過程中，需要形成新生血管系統來供應腫瘤細胞所需要的養分和氧氣；同時，也需要新生血管為癌細胞的擴散、轉移提供條件[5]。腎細胞癌絕大多數屬于多血管實體腫瘤，研究評價腎細胞癌新生血管系統，有助于了解腎癌的轉移、浸潤等生物學特性，對腎癌的早期診斷、鑒別診斷、治療、轉移及預后評估等均有重要意義[6]。

以血管內皮細胞為標記物用免疫組織化學法來檢測實體腫瘤組織的MVD是目前評價腫瘤內新生血管的常用指標[7]，MVD是評價腫瘤血管生成的金標準[8]。很多文獻[9]報道了對肺癌、胃癌、乳腺癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌等多種腫瘤微血管密度的研究，證實MVD是一個重要而獨立的影響預后的指標。劉本春等[10]在檢測不同臨床分期RCC的微血管密度中發現，腫瘤的惡性程度與微血管密度呈正相關，而且MVD可用來判斷腎細胞癌的轉移。病理組織學分級也是判斷腫瘤預后的常用重要指標[11]，本次研究69例不同病理組織學分級腎癌患者病灶的MVD值，發現腫瘤細胞的分化程度越低，誘導血管生成的能力越強，即MVD值越高，這與臨床發現的分化程度越低的腫瘤發生局部浸潤和轉移的機率越高越一致，病理組織學分級決定腫瘤生物學特性的內在本質可能是腫瘤病灶內的微血管密度[12]。但MVD和病理組織學分級均需要在手術后或穿刺后取組織學標本才能獲得，而且MVD僅能反映腫瘤極小區域血管生成的情況，不適合手術前觀察。

圖1 Ⅰ級和Ⅱ級病理組織學分級腎癌患者的彩色血管能量成像和免疫組織化學染色圖

隨著現代醫學超聲技術的不斷出現，不僅可以宏觀顯示腫瘤內血管走行、分布，測量相應參數，還可對腫瘤內血管進行定量計數分析[13]，使得超聲在研究腫瘤新生血管方面的應用更加廣泛。與其他術前的影像學檢查技術比較，CPA利用血流中紅細胞密度、散射能量成像，因CPA對聲速和血流的夾角沒有依賴，不出現混疊現象，能顯示低速、低流量的血流。聯合應用彩色多普勒血流顯像（Color Doppler Flow Imaging，CDFI）和CPA診斷小腎癌，使其診斷準確率大大提高，是早期診斷的有效手段[14]。使用CPA評價腎細胞癌的血供特征還有助于腫瘤的鑒別診斷[15]。目前，CPA技術觀察腫瘤內血管后，使用Auto CAD軟件還可計算出MCVD，MCVD是能夠反映腫瘤新生血管豐富程度的定量指標[16]。本次回顧性研究結果表明MCVD與術后病理組織學分級和MVD均具有較好的相關性，腎癌病灶中血流信號越豐富，MCVD值越高，病理組織學分級和檢測MVD值也越高，各病理組織學分級的MCVD及MVD比較差異均有顯著性意義（P＜0.05）。說明MCVD能夠較好的反映腎癌的整體血供，并與術后腫瘤血管病理情況一致，可作為一個術前評價腎癌新生血管的可靠定量參考指標，對腎癌的早期診斷、治療及評估預后等均有重要的臨床指導意義。

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本文編輯 聶孝楠

Application of Color Doppler Ultrasound in Analyzing Correlation Between Mean Color Vessel Density and Micro Vessel Density in Renal Cell Carcinoma

CUI Tao1, GE Ming-zhu2, ZHAO Yan-hui1, ZHANG Yan-hui1, XU Tao1,LIU Chun-lei1
1. Department of Urology Surgery, Qingdao Central Hospital, Qingdao Shandong 266042, China; 2. Department of Abdominal Ultrasonography, Qingdao Tumor Hospital, Qingdao Shandong 266042, China

ObjectiveTo explore the correlation between preoperative mean color vessel density (MCVD) tested by ultrasound and postoperative histopathological grade in pathology, micro vessel density (MVD) in renal cell carcinoma.Methods69 cases of renal cell carcinoma patients confirmed via surgical pathology were examined with ultrasound preoperatively, and their MCVD were calculated according to the results of color power angiography. After operation all the slices of tumor tissue specimens were stained with routine hematoxylin-eosin (HE) staining method and immunohistochemistry staining method respectively. The tumor tissue specimens stained by HE were graded in histopothology. Immunohlstochemistry staining was done with instant-type mouse anti-human CD34 monoclonal antibody and used to calculate MVDs. Then MCVD, MVD and histopathological grades were analyzed statistically.ResultsAs MCVD value was higher in kidney lesion, the detected MVD value increased more , both showing positive correlation (r=0.998, P＜0.05) in this study. Histopathology was gradedⅠ-Ⅲ after operation. MVD and MCVD in different histopathological grades were different statistically (P＜0.05).ConclusionThe preoperative MCVD value generated by ultrasound showed good correlation with the postoperative histopathological grade as well as MVD, and ultrasonic detection had the characteristics of no wound, repeatability, which could be used as a reliable method of preoperatively evaluating angiogenesis in renal cell carcinoma. MCVD had important instructive clinical signi fi cance to renal cell carcinoma for early diagnosis, treatment and evaluating prognosis, etc.

ultrasonography; mean color vessel density; kidney neoplasms; micro vessel density; histopathology

R737.11；R445.1

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2017.02.018

1674-1633(2017)02-0068-03

2016-04-26

2016-09-29

作者郵箱：1138097751@qq.com