CD133 β-catenin及hTERT在胃癌組織中的表達及其臨床關聯性

戚紅霞

(上海市靜安區市北醫院消化內科， 上海 靜安區 200432)

CD133 β-catenin及hTERT在胃癌組織中的表達及其臨床關聯性

戚紅霞

(上海市靜安區市北醫院消化內科， 上海 靜安區 200432)

目的：研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表達及其臨床關聯性。方法：采用免疫組織化學法分別檢測從2015年2月至2016年3月，我院病理科收集的60例胃癌(A組)、60例癌前病變(B組)以及40例慢性非萎縮性胃炎(C組)組織標本中CD133、β-catenin及hTERT表達情況，并進行相關性分析。結果：免疫組化結果顯示：CD133、β-catenin及hTERT在胃癌以及癌前病變中的陽性率均顯著高于胃炎，差異有統計學意義(P＜0.05)，而胃癌中陽性率又顯著高于癌前病變。A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達顯著高于C組，而A組又顯著高于B組，差異均有統計學意義(均P＜0. 05)；腫瘤組織中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴結轉移中表達高于無淋巴結轉移，而在浸潤深度T3+T4中表達高于T1+T2中。差異均有統計學意義(均P＜0.05)。經相關性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達水平均呈顯著正相關。結論：CD133、β-catenin及hTERT的表達有胃癌發生、發展、浸潤、轉移均存在密切相關，可作為臨床上早期診斷胃癌以及預后的參考指標。

胃 癌； 免疫組織化學； β-連環蛋白； 人端粒酶逆轉錄酶

本文通過研究CD133、β-連環蛋白(β-catenin)及人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)在胃癌表達及其臨床關聯性，目的在于為臨床早期診斷胃癌提供新的參考指標，并為胃癌早期治療提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：收集從2014年7月至2016年6月，我院手術切除并經病理診斷確診的胃癌標本60例記為A組，其中男39例，女21例，年齡45～79歲，平均年齡59.8±5.1歲；其中發生淋巴轉移26例，未發生淋巴轉移34例；浸潤深度為T1+T2的32例，T3+T4的28例，腺癌高中分化39例、低分化21例。另取同期內鏡室活檢病理明確的60例癌前病變標本(慢性萎縮性胃炎伴有大腸型化生或者輕、重度不典型增生)記為B組，其中男37例，女23例，年齡30～82歲，平均年齡57.2±5.1歲。同時再取40例慢性非萎縮性胃炎標本記為C組，年齡35～76歲，平均年齡55.7±5.1歲。其中男24例，女16例，三組標本在年齡、性別等基本資料對比無明顯差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法：采用免疫組織化學法分別檢測三組CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達情況，具體方法如下：所有標本均進行石蠟切片脫蠟，并使用PBS代替Ⅰ抗作為陰性對照，其中兔抗CD133和兔抗hTERT試劑均購于武漢博士德生物工程有限公司，兔抗βcatenin購自abcam。且按照1：100比例稀釋后進行。具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。采用DAB顯色，蘇木精復染，待其脫水至透明后，應用顯微鏡進行觀察。

1.3 評價標準[1]：①CD133結果判定：胞膜上出現CD133染色為棕黃色物質為陽性細胞，隨機選取4個不同高倍視野下200個細胞，按照陽性染色細胞百分率分為0分：無陽性細胞；1分：百分率≤5%；2分：百分率5%～10%；3分：百分率10%～15%；4分：陽性率＞15%。陽性細胞≥10%的為CD133陽性，＜10%為CD133陰性。②β-catenin結果判定：以正常黏膜的表達情況作為對照，β-catenin主要定位于細胞膜，微量定位于細胞漿。染色結果判斷標準為分別觀察細胞膜、細胞漿和細胞核的著色情況，將染色出現的范圍記為0-3分：0分為細胞膜、細胞質及細胞核均未著色，1分為細胞膜染色為主，2分為細胞質染色為主，3分為異質性染色(細胞膜、細胞質混合染色)或細胞核染色。將染色強度記為0-3分，無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，暗褐色為3分。得分=染色范圍X染色強度。免疫組化陽性表達信號為棕黃色細小顆粒狀，分別從細胞膜、細胞質、細胞核三方面判斷β-catenin在細胞內的分布特征：若＜7O%癌細胞細胞膜陽性表達或＞10%癌細胞細胞質、細胞核陽性表達則取結果為陽性(異常表達)。而≥70%的細胞膜陽性表達且≤10%的細胞質、細胞核出現陽性表達為陰性(正常表達)。③hTERT結果判定：以切片中細胞核、細胞漿出現明確的棕黃色或淡黃色顆粒為陽性細胞，隨機選取4個不同高倍視野下200個細胞，按照陽性染色細胞百分率分為0分：百分率＜10%；1分：百分率10%～25%；2分：百分率25%～50%；3分：百分率＞50%。此外，根據染色強度分為0分：無色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。得分=染色范圍×染色強度。0 ～2分為陰性，＞2分為陽性表達。

1.4 統計學方法：采用SPSS21.0統計軟件分析。計數資料比較采用χ2檢驗，計量資料以均數±標注差(±s)表示，其比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組病理學分析

免疫組化染色：CD133組：胞膜上出現CD133染色為棕黃色物質為陽性細胞。4個不同高倍(×400)光學顯微鏡下計數200個癌細胞，陽性細胞≥10%的為CD133陽性。

圖1 ?胃癌組織中CD133陽性率為81.67%(49/60)；?胃炎組織中CD133陽性率為17.5%(7/40)；?癌前病變組織中CD133陽性率為60.00%(36/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=19.000，p=0.000)

圖2 ?胃癌組織中β-catenin陽性率為73.33%(44/60)；?胃炎組織中β-catenin陽性率為15.0%(6/40)；?癌前病變組織中β-catenin陽性率為61.67%(37/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=24.242，p=0.000)

圖3 ?胃癌組織中hTERT陽性率為61.67%(37/60)；?胃炎組織中hTERT陽性率為10.0%(4/40)；?癌前病變組織中hTERT陽性率為31.67%(19/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=6.362，p=0.012)

2.2 三組CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達情況對比：A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達顯著高于C組，而A組又顯著高于B組，差異均有統計學意義(均P＜0.05)，見表2。結轉移，在浸潤深度T3+T4中表達高于T1+T2中。差 異均有統計學意義(均P＜0.05)，見表3。

表2 三組CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達對比(n，s))

表2 三組CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達對比(n，s))

組別 例數 CD133 β-catenin hTERT A組 60 1.442±1.215 3.264±1.842 3.974±1.543 B組 60 0.847±0.835 1.639±1.293 2.338±1.345 C組 40 0.327±0.141 1.442±0.957 1.184±0.922 F -7.529 11.612 14.801 P -0.000 0.000 0.000

表3 CD133蛋白在胃癌中表達(n，s))

表3 CD133蛋白在胃癌中表達(n，s))

臨床病理參數 例數 CD133表達水平 t P性別 男 39 1.472±1.422 0.181 0.857 21 1.405±1.249年齡 ≤60歲 32 1.463±1.305 0.132 0.896 ＞60歲 28 1.417±1.266淋巴結轉移 有 26 2.265±1.147 3.215 0.002 無34 1.187±1.384分化程度 高中分化 39 1.412±1.356 0.166 0.868低分化 21 1.472±1.284浸潤深度 T1+T2 32 0.000±0.000 7.699 0.000 T3+T4 28 1.559±1.274 女

2.4 β-catenin蛋白在胃癌中表達情況：結果顯示，腫瘤組織中β-catenin蛋白在淋巴結轉移中表達高于無淋巴結轉移，在浸潤深度T3+T4中表達高于T1+T2中。差異均有統計學意義(均P＜0.05)，見表4。

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表達(n，s))

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表達(n，s))

臨床病理參數 例數 β-catenin表達水平 t P性別 男 39 3.468±2.038 0.172 0.864 21 3.374±1.987年齡 ≤60歲 32 3.164±2.148 0.492 0.625 ＞60歲 28 2.894±1.781淋巴結轉移 有 26 4.332±2.013 3.899 0.000 無34 2.478±1.669分化程度 高中分化 39 3.275±2.173 0.369 0.714低分化 21 3.482±1.874浸潤深度 T1+T2 32 2.148±1.537 4.741 0.000 T3+T4 28 4.322±2.008 女

2.5 hTERT蛋白在胃癌中表達情況：結果顯示，腫瘤組織中hTERT蛋白在淋巴結轉移中表達高于無淋巴結轉移，在浸潤深度T3+T4中表達高于T1+T2中。差異均有統計學意義(均P＜0.05)，見表5。

表5 hTERT蛋白在胃癌中表達情況(n，s))

表5 hTERT蛋白在胃癌中表達情況(n，s))

臨床病理參數 例數 hTERT表達水平 t P性別 男 39 4.264±1.587 0.751 0.456 21 3.949±1.475年齡 ≤60歲 32 4.147±1.485 0.294 0.770 ＞60歲 28 4.038±1.375淋巴結轉移 有 26 4.471±1.502 2.874 0.006 無34 3.243±1.518分化程度 高中分化 39 3.842±1.342 1.314 0.194低分化 21 4.325±1.389浸潤深度 T1+T2 32 2.341±1.162 5.874 0.000 T3+T4 28 4.305±1.427 女

2.6 CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達水平的相關性分析：經相關性分析可得，CD133、β-catenin及 hTERT蛋白表達水平均呈顯著正相關，見表6。

表6 CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達水平的相關性分析

3 討 論

近年來，隨著人們生活方式以及飲食習慣的不斷改變，我國胃癌發病率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅人們的生命健康[2]。有研究報道顯示，臨床上首次就診的胃癌患者中，早期診斷率＜10%，其中85%以上患者為中晚期。導致這一結果發生的原因較多，但最主要的原因之一是臨床上缺乏特異性、敏感性較高的生物學指標。目前，人們對胃癌及其癌前病變的研究日益重視，并取得一定的進展。但胃癌的發生屬于多基因、多因素以及多階段長期作用的復雜過程，因此其具體的發病機制尚未完全明確。隨著相關研究的不斷深入，有報道顯示，胃癌發生、發展過程中均伴有不同程度的癌基因異常激活與過度表達，提示了兩者存在密切相關[3]。而本文通過研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表達及其臨床關聯性，旨在尋找一種可有效診斷癌前病變或早期胃癌的診斷指標，并為臨床治療提供新思路，進一步提高患者臨床預后以及生存率。

本文通過研究，結果發現 CD133、β-catenin及 hTERT三組在胃癌(A組)、癌前病變(B組)、慢性非萎縮性胃炎(C組)中的免疫組化陽性率存在明顯區別，A、B組陽性率顯著高于C組(P＜0.05)，且A組高于B組；同樣在A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達水平顯著高于C組，而A組又顯著高于B組。這與魏青林等的研究報道相似[4]，提示了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達參與了胃癌的發生、發展，可作為胃癌早期檢測的指標。其中CD133屬于跨膜蛋白的一種，盡管目前對于其具體的生物學功能尚未明確，但隨著研究的不斷深入，近年來陸續研究報道表明其是一個最有價值的可用于篩選腫瘤干細胞的標志物之一，其主要特征是于胃癌胃旁組織以及原發組織中均有較高的表達。而β-catenin屬于一種多功能的蛋白質，主要作用是參與了調節成骨細胞、內皮細胞以及成纖維細胞等多種細胞的增殖、分化以及凋亡等，且在其中發揮著至關重要的作用。且有研究報道顯示，β-catenin/TCF4屬于一種經典的Wne通路，主要作用于胚胎發育過程中，且還與多種組織干細胞進行自我更新與分化，與多種人類疾病的發生發展存在密切關聯[5]。hTERT與細胞端粒酶的活性息息相關，其中hTERT是構成端粒酶復合物的活性成分催化亞單位，亦是端粒酶活化過程中的一種限制酶，主要是在端粒酶的激活以及腫瘤的發生發展中起關鍵性作用。在本組研究中，CD133、β-catenin及hTERT三組在胃癌患者年齡、性別以及腺癌的分化程度之間無明顯差異，而腫瘤組織中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴結轉移中表達高于無淋巴結轉移，而在浸潤深度T3+T4中表達高于T1+T2中。這符合劉陽等的研究報道，表明了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達與胃癌的轉移及浸潤程度存在密切相關，可作為檢測胃癌的預后的指標之一。另外經相關性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達水平均呈顯著正相關。這提示了三者可能存在協同作用，一起促進胃癌的發生、發展，應受到臨床重視，對其作用機制進行更加深入的研究。

[1] Gonzalo V.Telomerase mRNA expression and immunohistochenical detection as a biomarker of malignant transfornation in patients with infalmmatory bowel disease[J].Gastroenterol Hepatol，2010，33(4)：288～296.

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[3] 潘杰，汪偉民，蔡煒龍，等.下調gankyrin通過調節β-catenin/cyclin D1信號通路抑制胃癌細胞增殖[J].胃腸病學，2016，21(5)：282～286.

[4] 魏青林，張丹，楊仕明，等.端粒酶逆轉錄酶和Gli1、Gli2在胃癌中的表達及意義[J].第三軍醫大學學報，2015，37 (9)：902～906.

[5] 王一曌，郭琳，劉乙蒙，等.Rack1與β-catenin在胃癌組織中的表達與臨床意義[J].中國生化藥物雜志，2016，36 (3)：30～33.

Expression of CD133 β-catenin and hTERT in Gastric Carcinoma and the Clinical Relevance

QI Hongxia

(Jing'an District Central Hospital，Shanghai Jing'an District200432，China)

Objective：To study the expression of CD133，β-catenin and hTERT in gastric carcinoma and the clinical relevance.Methods：CD133 β-catenin and hTERT expression in tissue samples of 60 cases of gastric cancer(group A)，60 cases of precancerous lesions(group B)and 40 cases of chronic non-atrophic gastritis(group C)admitted in our hospital from February 2015 to March 2016 were detected by immunohistochemical method and analyzed.Results：The results of immunohistochemistry showed that the positive rates of CD133，β-catenin and hTERT in gastric cancer and precancerous lesions were significantly higher than those in gastritis，the difference was statistically significant(P＜0.05)，while the positive rate of gastric cancer was significantly higher than that of cancer precancerous lesion.The expression of A，B group CD133，β-catenin beta and hTERT protein was significantly higher than that in group C，while the A group was significantly higher than that in B group，the differences were statistically significant(P＜0.05)；CD133 protein in cancer tissues，β-catenin protein and hTERT protein in higher than that without lymph node metastasis in lymph node metastasis and expression.In the depth of invasion in T3+T4 was higher than that in T1+T2.The difference was statistically significant(P＜0.05).The correlation analysis showed that the expression levels of CD133，β-catenin and hTERT were positively correlated.Conclusion：The expression of CD133，β-catenin and hTERT are closely related to the stomach cancer occurrence，development，invasion and metastasis，which can be used as a clinical reference indexes of early diagnosis and prognosis of gastric cancer.

Gastric cancer； Immunohistochemistry； β-chain protein； Human telomerase reverse transcriptase

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.008

1006-6233(2017)01-0022-06

上海市閘北區衛生科研面上一般項目，(編號：2014MS04)