奶牛口蹄疫疫苗免疫程序合理性試驗報告

洪旭

摘要：為了了解不同免疫劑量和免疫方式的奶?？谔阋咭呙缑庖咝Ч茖W指導奶?？谔阋呙庖吖ぷ?，自2014年10月至2015年1月，在湖北現代乳業有限公司奶牛場聯合開展了奶?？谔阋逜型和O型-亞I型兩種滅活疫苗的免疫試驗。結果表明，45日齡左右的犢牛因有較高的母源抗體，不適宜初次免疫，初免時間應往后延遲，具體延遲多久適宜，應根據各奶牛場的母源抗體衰減曲線確定。初次接種劑量 2 mL比1 mL效果好。二免后抗體產生較慢；口蹄疫疫苗免疫后抗體水平變化大，抽檢結果不能完全證明是否免疫。

關鍵詞：奶牛；口蹄疫疫苗；免疫程序

中圖分類號：S858.23 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2016）10-0008-02

重大動物疫病的控制主要在于預防，預防的關鍵是進行疫苗免疫接種。為了了解不同免疫劑量和免疫方式的奶牛口蹄疫疫苗免疫效果，科學指導奶?？谔阋呙庖吖ぷ?，根據“鄂牧醫辦發[2014]40號文件要求，自2014年10月至2015年1月，我們在湖北現代乳業有限公司奶牛場聯合開展了奶牛口蹄疫A型和O型-亞I型兩種滅活疫苗的免疫試驗，現將試驗情況報告如下。

1 試驗場基本情況

湖北現代乳業有限公司奶牛場位于黃梅縣大河鎮，是一個全封閉管理的大型奶牛場。基本情況如下：

養殖規模：現存欄奶牛3 250頭。

養殖的基本情況：奶牛場總面積約66.7 hm2，已建成開放式牛舍4萬余平方米，封閉式牛舍10余萬平方米，可養殖1萬頭奶牛。飼料以青貯料為主，輔以少量配合料。建有2 500 m3的沼氣池處理糞污。

防疫情況：母牛群按常規免疫0型-亞I型滅活疫苗，一年兩次。最近一次在2014年9月份。近期無大的疫病發生。

犢?；厩闆r：犢牛出生后由母牛喂養2～3 d即隔離開，由人工喂哺擠出來的混合母乳，后逐漸添喂顆粒配合料。一月齡內的牛犢有零星死亡，主要原因是初乳供應不足及牛舍環境不適應。

2 試驗方法

2.1 犢牛選擇

2014年10月20日，選擇未免疫A型及0型-亞I型口蹄疫疫苗的健康犢牛50頭，從中隨機抽10頭采血，分離血清進行口蹄疫抗體監測，并填寫相關信息。將50頭犢牛隨機分為四組，A.B組各12頭，C.D組各13頭，分欄飼養，逐一登記好耳號及相關信息。由于該牛場70日齡以上的犢牛均已免口蹄疫疫苗，所以選擇的這50頭犢牛年齡偏小，都在40～50日齡。

2.2 試驗疫苗

試驗疫苗由黃梅縣動物疫病預防控制中心從其冷藏庫中現用現取。奶?？谔阋逜型滅活苗由國內A公司生產，批號C140506J，規格100 mL/瓶?？谔阋?型-亞I型滅活苗由國內B公司生產，批號4216019；規格50 mL/瓶。

2.3 疫苗注射

疫苗注射由黃梅縣動物疫病預防控制中心派人與奶牛場獸醫共同完成。

A組：2014年10月20日，每頭肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

B組：2014年10月20日，每頭肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

C組：2014年10月20日，每頭肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗；30 d后（2014年11月19日），每頭再肌肉注射1.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射1.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

D組：2014年10月20日，每頭肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗；30 d后（2014年11月19日），每頭再肌肉注射2.0 mL奶牛A型口蹄疫滅活苗，同時肌肉注射2.0 mL奶牛0型-亞I型口蹄疫滅活苗。

2.4 采血

采取尾根靜脈血，每頭牛不少于3 mL，自然分離血清備檢。

（1）10月19日，隨機抽10頭犢牛血清，檢測未免疫時抗體。

（2）A、B組分別于一免后28 d（2014年11月17日）、58 d（2014年12月17日）各采血一次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測。C、D組分別于一免后 28 d（2014年11月17日）、二免后28 d（2014年12月17日）、58 d（2015年1月16日）各采血一次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測試驗。

2.5 監測方法及試劑

A型、0型和亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體均采用液相阻斷ELISA進行檢測?？谔阋呖贵w液相阻斷ELISA檢測試劑盒為中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產?？谔阋逜型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014101303，有效期：2015.04.13；抗原批號：2014081803，使用濃度1∶3?？谔阋逴型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014092301，有效期：2015.03.23；抗原批號：2014091601，使用濃度 1∶14?？谔阋邅喼轎型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號：2014100902，有效期：2015.04.09；抗原批號：2014021802，使用濃度1∶6。

2.6 結果判定

A型、0型、亞洲I型口蹄疫：液相阻斷ELISA的抗體效價≥26判定為合格。

所有檢測均由2人以上共同完成。其中11月17日樣品分成兩份，一份自檢，另一份送華中農業大學獸醫實驗室檢測，兩個結果的符合率在95%以上。12月17日采集的C、D組樣品各選10份備份樣品送湖北省動物疫病預防控制中心復檢，符合率也在95%以上。說明檢測結果真實有效。

3 結果與分析

3.1 免疫前抗體

未免疫口蹄疫疫苗前隨機采取10份犢牛血樣，結果A型口蹄疫抗體陽性率為0；0型口蹄疫抗體陽性率為100%（母源抗體）；亞洲I型口蹄疫抗體陽性率為60%（母源抗體）。

3.2 口蹄疫免疫抗體免疫結果

口蹄疫A型、O型、亞洲I型抗體檢測結果見表1～3。由表1～3可見，犢牛第一次接種口蹄疫A型或0型-亞Ⅰ型疫苗，1 mL和2 mL劑量組在接種后28 d免疫抗體合格率都很高。但高滴度抗體持續時間短，在接種后的第58天，免疫抗體水平都有所下降，其中A型和O型下降較多，亞I型略微下降。整體來看，劑量2 mL組的抗體水平下降要少些。實行二免程序的，間隔30 d接種兩次口蹄疫A型和0型-亞Ⅰ型疫苗，二免后的28 d抗體合格率與未二免的犢牛相比差異不明顯，A型和O型抗體水平均較低，只有亞I型抗體合格率能達標。要到第二次接種后的58 d抗體水平才升至較高水平，說明二免的效果表現較遲緩。實行二次免疫的，接種1 mL和2 mL，抗體合格率沒有明顯的差別，其中接種1 mL組的A型、O型抗體水平在二免58 d 后還高于2 mL組。

4 小結與討論

（1）40～50日齡犢牛母源抗體水平較高。抽檢 10頭未曾免疫過的犢牛，其O型抗體水平全部在26以上，亞I抗體達標率也達到60%，但A型抗體合格率為0。經回訪調查，產這批犢牛的母牛是2014年7月從上海調入本場的，之前沒有打過A型疫苗。母牛每年持續多次免疫，小牛在幼齡階段必然會有較高的母源抗體。檢測結果表明，45日齡左右的犢牛因有較高的母源抗體，不適宜初次免疫，初免時間應往后延遲，具體延遲多久適宜應根據各奶牛場的母源抗體衰減曲線確定。

（2）接種劑量2 mL比1 mL效果好。犢牛第一次接種口蹄疫A型或0型-亞Ⅰ型疫苗，不管是1 mL還是2 mL劑量，在接種后28 d其免疫抗體合格率都很高。但高滴度抗體持續時間短，在接種后的第58天，各組免疫抗體水平均有所下降，其中A型和O型下降較多，亞I型略微下降。整體來看，劑量2 mL組的抗體水平下降要少些。

近幾年各地開展防疫抽檢，很多抽檢的是1個半月到2個月左右的家畜，口蹄疫抗體合格率有的很低，一些基層防疫員對檢測結果不服，他們堅持認為打了疫苗。這個可以解釋為什么有些打過疫苗的牛查不出抗體或抗體水平低。

（3）二免抗體產生較慢。實行二免程序的，間隔30 d接種兩次口蹄疫A型和0型-亞Ⅰ型疫苗，二免后的28 d抗體合格率與未二免的犢牛相比差異不明顯，A型和O型抗體水平均較低，只有亞I型抗體合格率能達標。要到第二次接種后的58 d其抗體水平才升至較高水平。說明二免的效果表現較遲緩，由于抽檢時點少，無法描繪出其變化曲線。

實行二次免疫的，接種1 mL和2 mL，抗體合格率均沒有明顯差別，其中接種1 mL組的A型、O型抗體水平在二免58 d 后還高于2 mL組。

（4）口蹄疫苗免疫抗體水平變化大，抽檢結果不能完全證明是否免疫。即使按標準注射了疫苗，如果采樣時間不對也有可能測不出抗體?？谔阋呙庖吆笥行Э贵w到底能維持多長時間有待進一步研究。

本試驗原計劃每組30頭牛，由于奶牛場實際存欄小牛較少，樣本數略少。同時，因為該場70日齡以上小牛均已注射了疫苗，試驗牛日齡偏小，有母源抗體干擾等因素影響，所以試驗結果與常規免疫的結果可能有一定出入。