山椒子中化學成分的研究

杜鵬　胡楊枝榮　張萬暢

[摘要] 目的 研究山椒子葉子中的化學成分。 方法 采用95%乙醇對山椒子葉子進行提取，乙醇浸膏以水稀釋后分別用石油醚和乙酸乙酯進行萃取，得到石油醚和乙酸乙酯萃取部位。各萃取部位采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠過濾等多種色譜方法進行化學成分的分離、純化，化合物結構鑒定采用核磁數據分析及與文獻數據對比。 結果 從山椒子的葉子中共分離得到8個化合物，經鑒定為：β-谷甾醇（Ⅰ）、glut-5-en-3-ol（Ⅱ）、蒲公英賽醇（Ⅲ）、spathulenol（Ⅳ）、人參炔醇（Ⅴ）、苯甲酸（Ⅵ）、山柰酚（Ⅶ）和（-）-clovane-2，9-diol（Ⅷ）。 結論 化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。

[關鍵詞] 山椒子；番荔枝科；化學成分；倍半萜

[中圖分類號] R931.71 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）01（c）-0020-03

[Abstract] Objective To investigate the chemical constituents of Uvaria grandiflora. Methods The leaves of Uvaria grandiflora was extracted with 95% EtOH to give ethanol extracts， which was further diluted by H2O and extracted with petroleum ether and EtOAc， respectively. The petroleum ether and EtOAc extracts afforded by extraction were isolated and purified by different chromatography， such as silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. The structures of isolated compounds were identified by NMR data analysis and comparison. Results Eight known compounds were obtained and identified as β-sitosterol （Ⅰ）， glut-5-en-3-ol （Ⅱ）， taraxerol （Ⅲ）， spathulenol （Ⅳ）， panaxynol （Ⅴ）， benzoic acid （Ⅵ）， kaempferol （Ⅶ） and （-）-clovane-2，9-diol （Ⅷ）. Conclusion CompoundsⅡ， Ⅳ， Ⅴ， Ⅶ， Ⅷ are isolated from this plant for the first time.

[Key words] Uvaria grandiflora； Annonaceae； Chemical composition； Sesquiterpenoids

山椒子（Uvaria grandiflora Roxb.），別名川血烏、大花紫玉盤、葡萄木等，為番荔枝科紫玉盤屬植物攀援灌木，主要分布于我國廣東南部和海南等地[1]，廣西亦有分布[2]。番荔枝科植物因含有一類結構新穎的抗腫瘤化學成分番荔枝內酯（annonaceous acetogenins）而受到廣泛關注，已有多種該科植物進行了化學成分及生物活性的研究[3-5]。山椒子的根在民間常被用于咽喉腫痛的治療，之前的藥理活性篩選則發現該植物具有較好的抗腫瘤活性，在隨后對該植物的化學成分研究中分離得到番荔枝內酯類、多氧取代環己烯類、芳香類和酰胺類等多種類型化合物[6-16]。本課題組進一步對其化學成分進行研究，從山椒子葉中分離得到8個化合物（圖1），分別鑒定為β-谷甾醇（Ⅰ）、glut-5-en-3-ol（Ⅱ）、蒲公英賽醇（Ⅲ）、spathulenol（Ⅳ）、人參炔醇（Ⅴ）、苯甲酸（Ⅵ）、山柰酚（Ⅶ）和（-）-clovane-2，9-diol（Ⅷ），其中，化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

核磁共振儀（美國Varian公司，Unity INOVA 400/54）。色譜用硅膠G和H（青島海洋化工廠），Sephadex LH-20（美國GE）。

山椒子葉于2013年6月采自廣西，由貴州醫科大學藥學院生藥學教研室韋欣副教授鑒定為紫玉盤屬山椒子（U.grandiflora）。

2 方法與結果

2.1 提取與分離

山椒子樹葉8.8 kg，用95%乙醇回流提取3次，每次30 L，減壓濃縮得到乙醇浸膏。將浸膏懸浮于水中得混懸液13 L，依次用等體積石油醚（13 L）﹑乙酸乙酯（13 L）分別萃取3次，減壓濃縮得到石油醚浸膏A（108 g）和乙酸乙酯浸膏B（150 g）。

A部分經硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯（50∶1～1∶1）梯度洗脫得到10個組分（A1～A10）。A5經硅膠柱層析得到組分A5-1和A5-2。A5-1經乙酸乙酯重結晶得到化合物Ⅱ（38 mg），A5-2經硅膠柱層析和制備薄層層析得到化合物Ⅴ（50 mg）。A6經硅膠柱層析（石油醚∶丙酮為20∶1）得到組分A6-1和A6-2。A6-1經制備薄層層析（氯仿∶丙酮為60∶1）和Sephadex LH-20葡聚糖層析（氯仿∶甲醇為2∶1）得到化合物Ⅳ（17 mg）。A7直接析出化合物Ⅲ（18 mg）。A8經反復硅膠柱層析及Sephadex LH-20葡聚糖層析得到化合物Ⅵ（9 mg）。A10直接析出化合物Ⅰ（40 mg）。

B部分經硅膠柱層析，氯仿∶甲醇（90∶1～2∶1）梯度洗脫得到13個組分（B1～B13）。B5經過反復硅膠柱層析，Sephadex LH-20葡聚糖層析及環己烷重結晶得到化合物Ⅷ（3 mg）；B6再經過反復硅膠柱層析（環己烷∶乙酸乙酯為4∶1），Sephadex LH-20葡聚糖層析（氯仿∶甲醇為2∶1）得到化合物Ⅶ（12 mg）。

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物Ⅰ 白色針狀結晶（石油醚-乙酸乙酯）。mp 141～143℃。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.67（3H，s，H-18），0.79（3H，d，J = 6.6 Hz，H-27），0.81（3H，d，J = 7.9 Hz，H-26），0.84（3H，t，J = 7.8 Hz，H-29），0.92（3H，d，J = 6.1 Hz，H-21），1.00（3H，s，H-19），3.51（1H，m，H-3），5.33（1H，br s，H-6），數據與文獻[17]一致。化合物Ⅰ與β-谷甾醇標準品共薄層，Rf值相同，與β-谷甾醇標準品混合后熔點未發生變化，故鑒定化合物Ⅰ為β-谷甾醇。

2.2.2 化合物Ⅱ 白色針狀晶體（乙酸乙酯）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.84，0.95，0.98，1.00，1.04，1.09， 1.14，1.16（each 3H，s，Me×8），3.46（1H，br s，H-3），5.62（1H，d，J = 5.8 Hz，H-6）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：23.6（C-1），18.2（C-2），76.3（C-3），39.3（C-4），141.6（C-5），122.0（C-6），27.8（C-7），43.0（C-8），34.8（C-9），49.7（C-10），34.6（C-11），30.3（C-12），37.8（C-13），40.8（C-14），32.0（C-15），36.0（C-16），30.0（C-17），47.4（C-18），35.0（C-19），28.2（C-20），33.1（C-21），38.9（C-22），28.9（C-23），25.4（C-24），16.2（C-25），18.4（C-26），19.6（C-27），32.4（C-28），34.5（C-29），32.0（C-30）。以上數據與文獻[18]對照一致，故鑒定化合物Ⅱ為glut-5-en-3-ol。

2.2.3 化合物Ⅲ 白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.80，0.82，0.90，0.90，0.92，0.95，0.97，1.08（each 3H，s，Me×8），1.89-2.04（2H，m，H-2），3.19（1H，dd，J = 4.4，10.8 Hz，H-3），5.53（1H，dd，J = 3.0，8.0 Hz，H-15）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：37.7（C-1），27.1（C-2），79.0（C-3），38.9（C-4），55.5（C-5），18.8（C-6），35.1（C-7），38.7（C-8），49.2（C-9），37.5（C-10），17.5（C-11），36.6（C-12），38.0（C-13），158.0（C-14），116.8（C-15），37.7（C-16），38.9（C-17），48.7（C-18），41.3（C-19），28.0（C-20），33.7（C-21），33.1（C-22），28.8（C-23），15.4（C-24），15.4（C-25），29.9（C-26），25.9（C-27），29.8（C-28），33.3（C-29），21.3（C-30）。以上數據與文獻[19]對照一致，故鑒定化合物Ⅲ為蒲公英賽醇（taraxerol）。

2.2.4 化合物Ⅳ 無色油狀物。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.46（1H，dd，J = 9.5，11.2 Hz，H-1），0.71（1H，m，H-2），1.04（3H，s，H-13），1.05（3H，s，H-12），1.28（3H，s，H-15），4.66（1H，br s，H-14a），4.69（1H，br s，H-14b）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：29.9（C-1），27.4（C-2），24.7（C-3），38.8（C-4），153.4（C-5），53.4（C-6），26.7（C-7），41.7（C-8），80.9（C-9），54.3（C-10），20.2（C-11），28.6（C-12），16.3（C-13），106.2（C-14），26.0（C-15）。數據與文獻[20]一致，故鑒定化合物Ⅳ為spathulenol。

2.2.5 化合物Ⅴ 無色油狀物。1H NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.88（1H，t，J = 6.5 Hz，H-17），2.02（2H，q，J = 7.1 Hz，H-11），3.03（2H，d，J = 6.8 Hz，H-8），4.91（1H，d，J = 5.2 Hz，H-3），5.23（1H，d，J = 10.1 Hz，H-1），5.34-5.40（1H，m，H-9），5.46（1H，d，J = 17.0 Hz，H-1），5.49-5.54（1H，m，H-10），5.93（1H，ddd，J = 5.3，10.1，16.8 Hz，H-2）。13C NMR（100 MHz，CDCl3） δ：117.0（C-1），136.1（C-2），63.5（C-3），74.2（C-4），71.2（C-5），64.0（C-6），80.2（C-7），17.6（C-8），121.9（C-9），133.0（C-10），27.1（C-11），29.2（C-12），29.1（C-13），29.1（C-14），31.8（C-15），22.6（C-16），14.0（C-17）。數據與文獻[21]一致，故鑒定化合物Ⅴ為人參炔醇（panaxynol）。

2.2.6 化合物Ⅵ 白色粉末。mp 122～124℃。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：7.47（2H，t，J = 7.3 Hz，H-2和H-6），7.61（1H，t，J = 7.3 Hz，H-4），8.12（2H，d，J = 7.3 Hz，H-3和H-5），數據與文獻[22]一致。與苯甲酸對照品共薄層Rf值相同，與苯甲酸標準品混合后熔點未發生變化，故鑒定化合物Ⅵ為苯甲酸。

2.2.7 化合物Ⅶ 黃色粉末。1H NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.16（1H，s，H-6），6.38（1H，s，H-8），6.89（1H，d，J = 8.2 Hz，H-3'，5'），8.07（2H，d，J = 8.1 Hz，H-2'，6'）。13C NMR（100 MHz，CD3OD） δ：148.0（C-2），137.1（C-3），177.3（C-4），162.5（C-5），99.2（C-6），165.5（H-7），94.4（C-8），160.5（C-9），104.5（C-10），123.7（C-1'），130.6（C-2'），116.3（C-3'），158.2（C-4'），116.3（C-5'），130.6（C-6'）。數據與文獻[23]一致，故鑒定化合物Ⅶ為山柰酚（kaempferol）。

2.2.8 化合物Ⅷ 白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.86（3H，s，H-13），0.96（3H，s，H-15），1.04（3H，s，H-14），1.05（3H，s，H-12），1.28（3H，s，H-15），3.33（1H，br s，H-9），3.79（1H，dd，J = 5.7，10.0 Hz，H-2）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ： 44.2（C-1），80.9（C-2），47.6（C-3），37.2（C-4），50.4（C-5），20.6（C-6），33.1（C-7），34.7（C-8），75.0（C-9），26.0（C-10），26.3（C-11），35.5（C-12），25.4（C-13），31.4（C-14），28.3（C-15）。數據與文獻[24]一致，故鑒定化合物Ⅷ為（-）-clovane-2，9-diol。

3 討論

本研究從山椒子葉子的乙醇提取液中分離得到了8個化合物，涉及三萜、倍半萜、黃酮及聚炔醇類，結構類型多樣，其中化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。人參炔醇是聚炔醇類化合物的一種，具有抗癌、抗菌和神經保護等作用，廣泛分布于五加科、傘形科、菊科、桔梗科、木犀科等植物中[25]，此次是首次從番荔枝科植物中分離得到該化合物。此外，倍半萜類化合物也是首次從山椒子中分離得到。此次實驗結果豐富了山椒子所含化學成分的類型，有利于對山椒子的深入了解。

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（收稿日期：2016-10-11 本文編輯：程 銘）