Survivin、p53在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達及意義

李桂湖

宮頸癌是一種發(fā)生率較高的婦科惡性腫瘤疾病，其發(fā)生、發(fā)展與癌基因激活、抑癌基因失活之間存在密切的相關性關系[1]。Survivin是目前已知生理功能最為強大的凋亡抑制因子，可有效抑制Caspase-3、Caspase-7的活性功能，最終抑制細胞凋亡現(xiàn)象[2]。野生型p53基因在細胞凋亡、細胞分化、血管組織形成和DNA生理代謝等多個過程中均發(fā)揮著重要的作用，但其出現(xiàn)異常突變可使得正常生理功能喪失，具有癌基因的生理學活性作用，最終促進腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展[3,4]。目前關于Survivin、p53與宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的臨床研究相對較少，因此本研究擬觀察兩者的表達情況，并判斷其是否可作為早期診斷宮頸癌前病變的生物標志，進而評估疾病預后情況。

對象與方法

1.對象：2013年5月—2015年12月本院收治女性宮頸疾病患者195例，其中慢性宮頸炎40例，宮頸上皮內瘤變83例(CINⅠ期26例，CINⅡ期27例，CINⅢ期30例)，宮頸癌72例，均經(jīng)病理組織檢查均已確診。本研究方案已通過院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

2.實驗儀器及試劑：兔抗人多克隆Survivin及抗體(工作液濃度1:100)、鼠抗人單克隆p53抗體(工作液濃度1:200)購自美國Santa Cruz公司；Elivision免疫組化試劑盒購自北京金橋生物技術有限公司，羊抗兔、羊抗鼠二抗及DAB顯色試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司。

3.實驗方法：采用免疫組織化學(Elivision二步法)法檢測Survivin、p53在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達情況。采用10%甲醛溶液固定處理所有組織標本，石蠟包埋后連續(xù)切片，切片厚度為5 μm，梯度乙醇溶液水化處理，隨后高溫高壓環(huán)境下修復作用3 min，采用3%雙氧水溶液孵育作用10 min，PBS緩沖液洗滌組織切片3次，加入適量Survivin或p53一抗，室溫環(huán)境條件下孵育作用2 h，隨后加入適量二抗工作液，室溫環(huán)境條件下孵育作用1 h，PBS緩沖液洗滌組織切片3次，DAB顯色劑顯色處理，最后使用蘇木精溶液復染，封片后鏡下觀察，整個實驗步驟嚴格遵守說明書進行操作。

4.染色結果判斷方法：普通顯微鏡下觀察組織切片的顯色反應，Survivin陽性表現(xiàn)為細胞漿中出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒，p53陽性表現(xiàn)為細胞核中出現(xiàn)淺黃色或棕黃褐色顆粒，高倍鏡下隨機選擇5個視野，根據(jù)陽性細胞數(shù)占整個細胞的百分比予以記分。0分：陽性細胞數(shù)百分比<5%；1分：5%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：陽性細胞數(shù)百分比>75%。根據(jù)著色強度予以記分，1分：淡黃色，2分：黃色，3分：棕黃色。兩者得分乘積即為陽性表達強度：0分：(-)，1～4分：(+)，5～8分：(++)，9～12分：(+++)。

5.統(tǒng)計學處理：均采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，率比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，采用Spearman法分析兩者之間的相關性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

1.Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達：Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ期和宮頸癌組織中的陽性表達率分別為7.5%，30.8%，44.4%，60.0%，77.8%，呈依次升高趨勢，差異有統(tǒng)計學意義，見表1及圖1。

圖1 Survivin在不同宮頸病變的表達 A.宮頸癌組織；B.宮頸上皮內瘤變；C.慢性宮頸炎

2.p53在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達：p53在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ期和宮頸癌組織中的陽性表達率分別為5.0%，23.1%，37.0%，53.3%，72.2%，呈依次升高趨勢，差異有統(tǒng)計學意義，見表2及圖2。

圖2 p53在不同宮頸病變的表達 A.宮頸癌組織；B.宮頸上皮內瘤變；C.慢性宮頸炎

3.Survivin、p53與宮頸癌的臨床病理關系：宮頸癌Survivin表達陽性率在FIGO分期、間質浸潤深度、淋巴結是否轉移方面與差異；宮頸癌p53表達陽性率則在淋巴結是否轉移、組織學類型及分級方面有差；宮頸癌鱗癌與腺癌Survivin表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義，宮頸癌鱗癌與腺癌p53表達陽性率差異有統(tǒng)計學意義，見表3。

表1 Survivin在3種組織中的表達[例(%)]

注：與慢性宮頸炎比較，*P<0.05；與CINⅠ期比較，#P<0.05；與CINⅡ期比較，▲P<0.05；與CINⅢ期比較，○P<0.05

表2 p53在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達

注：與慢性宮頸炎比較，*P<0.05；與CINⅠ期比較，#P<0.05；與CINⅡ期比較，▲P<0.05；與CINⅢ期比較，○P<0.05

表3 Survivin、p53與宮頸癌的臨床病理關系[例(%)]

注：與鱗癌、Ⅰ期、≤淺肌層、無淋巴結轉移比較，*P<0.05；與Ⅱ期比較，#P<0.05

討論

Survivin在調節(jié)和控制細胞周期、抑制細胞凋亡現(xiàn)象等方面起到相當重要的作用，可直接阻斷Caspase-3、Caspase-7的生物學效應作用，同時還可有效抑制多聚ADP核糖聚合酶的生物學活性功能，進而抑制細胞出現(xiàn)凋亡，最終導致細胞發(fā)生異常增殖和惡性轉化，與多數(shù)腫瘤疾病的產生和預后有著密切的相關性[5]。細胞研究結果顯示[6]，Survivin表達水平過高可使得cyclin D1、C-myc表達水平顯著性增高，進而導致細胞異常增殖和惡性轉化。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中Survivin陽性表達率(80.6%)明顯高于慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變組織，此結果提示Survivin在宮頸癌組織中的基因表達明顯上調，使得細胞生長出現(xiàn)異常紊亂，有利于腫瘤細胞增殖和侵襲周圍正常組織，因此，可知Survivin可作為早期診斷宮頸癌的實驗室標志物[7]。此外本研究還發(fā)現(xiàn)，Survivin陽性表達率在FIGO分期、間質浸潤

深度、淋巴結是否轉移方面有差異，提示Survivin表達水平越高，則臨床分期及病灶浸潤深度越嚴重，更易侵襲周圍正常組織并發(fā)生遠處轉移，導致術后生存期明顯縮短，即Survivin表達水平過高預示宮頸癌患者預后情況較差。

p53與細胞周期蛋白(cyclins)相互結合可形成特異性的復合體，進而有效抑制依賴cyclins的相關激酶的生物學活性功能，導致細胞在G1期出現(xiàn)停滯或誘導細胞程序性死亡，最終清除可能發(fā)生癌變的異常細胞[8-9]。當p53基因出現(xiàn)異常突變時，可使得穩(wěn)定蛋白質難以抑制細胞異常增殖過程，從而促進細胞呈惡性轉化，使得p53基因由抑癌基因轉為原癌基因[10]。但目前p53在宮頸癌患者預后情況方面的預測價值尚缺少相關報道，本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織p53陽性表達率明顯高于其他組織，提示p53基因突變與宮頸癌疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切的相關性。此外研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌p53表達陽性率在淋巴結是否轉移、組織學類型及分級方面有差異，提示p53表達與宮頸癌的組織學類型、分級有一定相關性，且在淋巴結是否轉移及病情預后方面具有一定預測價值。

綜上所述，Survivin、p53與宮頸癌疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切關系，尤其與淋巴結轉移的關系更為密切，此外前者還與臨床分期和病灶侵襲周圍正常組織有關，后者則與腫瘤惡性程度有關，均可作為檢測宮頸癌前病變的生物標志，并用于判斷宮頸癌患者的預后情況。

(圖1、圖2見封底)

1 惠燕,黃利鳴,葉紅.survivin在人宮頸癌前病變和宮頸浸潤癌組織中的定量分析及其臨床價值的評估.腫瘤防治研究,2008,35:39-42.

2 盧洪勝,甘梅富,張艷,等.宮頸癌前病變及宮頸癌組織Survivin和p16INK4A及p53表達的研究.中華腫瘤防治雜志,2009,16:810-813.

3 王曉英,黃永宏,張宏偉,等.Ki67、p53、Survivin在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變及宮頸炎中的表達及意義.山東醫(yī)藥,2010,50:88-89.

4 雷蕾,葉斌,王西川.p16、p53和Ki67在宮頸癌中的表達及其臨床意義.實用醫(yī)院臨床雜志,2014,11:123-125.

5 朱燕,楊其昌,劉宏斌,等.Survivin、bcl-2及p53蛋白在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中的表達及意義.實用癌癥雜志,2008,23:138-140.

6 馬寧,李小姝,張嬋麗,等.Survivin與MIF在宮頸癌組織中的表達及意義.腫瘤基礎與臨床,2008,21:388-390.

7 張晶,王宇娟,霍俊玲,等.宮頸癌組織中Survivin的表達及臨床意義的系統(tǒng)評價.中國循證醫(yī)學雜志,2014,14:216-224.

8 郭建華,伍亞云,劉俊宏.p53、p16和C-myc基因表達在宮頸癌早期診斷中的價值.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志,2013,22:2518-2523.

9 王喜梅,羅光霞,張雪梅,等.宮頸腺癌HPVl8/18感染與ki67、p53蛋白表達的關系.實用癌癥雜志,2009,24:22-25.

10 于永亮,尚亞非.p53蛋白表達對結腸癌術后腫瘤復發(fā)轉移預后的關系.實用醫(yī)技雜志,2007,14:5014-5015.