混合染色法在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

張紅祥 張夏瑋

（河南省許昌市中心醫(yī)院 許昌461000）

混合染色法在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

張紅祥 張夏瑋

（河南省許昌市中心醫(yī)院 許昌461000）

目的：分析混合染色法在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。方法：選取2015年3月～2017年3月在我院門診檢驗(yàn)科進(jìn)行骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的100例患者作為研究對象，對其臨床資料進(jìn)行回顧性分析。所有標(biāo)本均為新鮮采集的骨髓液，由檢驗(yàn)科專業(yè)人員制備為涂片備用，分別采用姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法對標(biāo)本進(jìn)行處理，對三種染色法的標(biāo)本染色效果進(jìn)行觀察與分析。 結(jié)果：混合染色法 5、10、20、40 min 的染色評分分別為（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明顯高于其他兩種染色方法的染色評分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。結(jié)論：在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中采用混合染色法的染色更清晰，對比效果更為明顯，有助于形態(tài)幼稚細(xì)胞的鑒別診斷。

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)；混合染色法；姫氏染色法；瑞氏染色法；染色評分

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是臨床上用于各類血液疾病診斷的重要方法之一，可以提供骨髓細(xì)胞形態(tài)的具體特征[1]。為了提高臨床診斷的準(zhǔn)確率，檢驗(yàn)人員不但需要掌握細(xì)胞異常和正常狀態(tài)下的形態(tài)特征，還應(yīng)當(dāng)盡可能確保涂片染色效果理想，以提高骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的診斷效果[2～3]。本研究選取2015年3月～2017年3月在我院門診檢驗(yàn)科進(jìn)行骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的100例患者作為研究對象，分析了混合染色法對骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月～2017年3月在我院門診檢驗(yàn)科進(jìn)行骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的100例患者作為研究對象，對其臨床資料進(jìn)行回顧性分析。其中男性68例，女性32例；年齡15～80周歲，平均年齡（46.3±2.5）歲。

1.2 檢驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均為新鮮采集的骨髓液，由檢驗(yàn)科專業(yè)人員制備成涂片備用。分別采用姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法對標(biāo)本進(jìn)行處理。姫氏染色法和瑞氏染色法采用原液進(jìn)行檢驗(yàn)，混合染色法則將姫氏染色原液與瑞氏染色原液按照10∶1的比例進(jìn)行配制。三種染色法均需要覆蓋整個標(biāo)本，固定1 min后對標(biāo)本染色情況進(jìn)行觀察。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察分析姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法對標(biāo)本的染色效果。染色效果判定依據(jù)為：以0～10分為評分值域，根據(jù)檢驗(yàn)人員可見染色效果進(jìn)行評分；0分：染色效果差，無法準(zhǔn)確判別細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞輪廓相對模糊；10分：染色效果佳，細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯且清晰，細(xì)胞漿與細(xì)胞核對比明顯。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

混合染色法下5、10、20和40 min的染色評分分別為（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明顯高于其他兩種染色方法的評分結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。見表1。

表1 三種染色法的染色評分結(jié)果比較

染色方法 5 min 10 min 20 min 40 min姫氏染色法瑞氏染色法混合染色法1.6±0.3 1.7±0.2 3.9±0.3 3.6±0.5 3.8±0.3 6.9±0.5 6.9±0.3 7.3±0.5 9.3±0.2 3.2±0.5 3.1±0.3 8.3±0.2

3 討論

既往大量報(bào)道中顯示，骨髓液涂片染色效果會對檢驗(yàn)人員觀察骨髓細(xì)胞的形態(tài)產(chǎn)生直接影響，可能會使骨髓液細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而給檢驗(yàn)人員的臨床鑒別與診斷帶來一定的難度。已有報(bào)道中指出[4～5]，骨髓細(xì)胞染色結(jié)果會受到大量因素的影響，包括染色成熟度、染色時間長短和涂片制備操作等。特別是染色液在使用前的配制濃度和使用情況將直接影響骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的檢查結(jié)果。目前，臨床上常用的染色液包括姫氏染色液和瑞氏染色液兩種，姫氏染色液由美藍(lán)、伊紅組成，對細(xì)胞核有良好的染色效果，但細(xì)胞質(zhì)染色效果不佳，若染色過淺或過深則會導(dǎo)致細(xì)胞核辨認(rèn)不顯著；瑞氏染色液則由亞甲藍(lán)、天青、伊紅構(gòu)成，對細(xì)胞質(zhì)染色效果好，對細(xì)胞核染色效果不佳。而混合染色法將姫氏染色原液與瑞氏染色原液按照10∶1的比例進(jìn)行配制，綜合了姫氏染色液和瑞氏染色液這兩種染色液的優(yōu)勢，10倍的姫氏染色原液能夠使細(xì)胞核著色達(dá)到良好狀態(tài)，顯示胞漿嗜堿性水平，色澤純正，對嗜天青、嗜酸性和嗜堿性顆粒的著色效果理想，而配合1倍的瑞氏染色原液能夠清晰地顯示出細(xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)的識別更加明顯。只要遵循低濃度、長時間的基本原則，就能夠使染色持續(xù)時間更長，細(xì)胞染色更鮮明，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的層次劃分也會更加明顯。

本研究中比較了姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法對骨髓液標(biāo)本染色效果的差異，結(jié)果顯示混合染色法5、10、20和40 min的染色評分分別為（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明顯高于其他兩種染色方法的評分結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。這說明將姫氏染色原液與瑞氏染色原液按照10∶1的比例配制后用于骨髓液標(biāo)本的處理，使細(xì)胞形態(tài)學(xué)有良好的觀察效果，可以為骨髓系相關(guān)病變的臨床診斷提供可靠依據(jù)。同時，對混合染色法不同時間點(diǎn)的染色評分結(jié)果進(jìn)行對比可見，5 min時混合染色法的染色效果不甚理想，20 min時染色效果達(dá)到最佳狀態(tài)，40 min時則有所下降。根據(jù)這一數(shù)據(jù)，臨床檢驗(yàn)中可以將20 min作為混合染色的最佳時間。將混合染色法用于對骨髓液標(biāo)本的處理中，能夠使骨髓細(xì)胞得到良好的染色，染色對比效果強(qiáng)，細(xì)胞核多呈紫紅色狀態(tài)，細(xì)胞漿則呈藍(lán)色狀態(tài)，兩者對比明顯，并且整體染色層次突出，更便于檢驗(yàn)人員對細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入觀察，并作為檢驗(yàn)診斷依據(jù)。

綜上所述，在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中采用混合染色法的染色更清晰，對比效果更為明顯，有助于形態(tài)幼稚細(xì)胞的鑒別診斷。

[1]蔣朝暉,邱先艷,余紅嵐.骨髓細(xì)胞髓過氧化物酶染色質(zhì)控體系的建立[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(15):2155-2157

[2]高秀敏,張貴權(quán),廖奕.普魯士蘭染色在骨髓細(xì)胞內(nèi)外鐵檢查中的應(yīng)用[J].臨床合理用藥雜志,2014,7(19):14

[3]蘭淼,鞏麗,李艷紅,等.不同脫鈣液對骨髓組織切片HE染色效果的對比研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2010,39(10):1299-1300

[4]韓天雨,卜淑敏.去卵巢大鼠血清和骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶水平變化的動態(tài)觀察[J].中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào),2014,22(4):37-40

[5]張雪,李蓓,陳振萍,等.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查多中心綜合比較及評價[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,29(8):843-847

R446.8

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.09.062

2017-05-29）