口蹄疫免疫技術

李克斌 田波/中農威特生物科技股份有限公司

口蹄疫免疫技術

李克斌 田波/中農威特生物科技股份有限公司

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸傳染性的動物疫病，可快速遠距離傳播。侵染對象是豬、牛、羊等主要畜種及其它家養和野生偶蹄動物，易感動物多達70余種。發病動物的主要癥狀是精神沉郁、流涎、跛行、臥地，近查可見口、鼻、蹄和母畜乳頭等無毛部位發生水皰，水皰破損后形成潰瘍或斑痂?？谔阋叩陌l病率高，可造成巨大的經濟損失和社會影響。該病是世界動物衛生組織（OIE)法定報告的動物傳染病，我國將其列為一類動物疫病。

目前，口蹄疫仍然在世界許多地區流行，實踐證明有效的疫苗免疫能夠控制口蹄疫大范圍的暴發和流行。世界動物衛生組織和泛美口蹄疫中心肯定滅活疫苗是防控口蹄疫的最有效手段。20世紀50年代，歐洲大部分國家開始實施計劃免疫接種，達到了消除口蹄疫的目的。一些國家也利用這種政策，成為了OIE“免疫無口蹄疫國家”成員。

我國政府對口蹄疫的防控工作從未間斷，非常重視，有比較健全的組織機構與防控體系。堅持實施 “預防為主、免疫和撲殺相結合”的綜合防控措施，并取得了舉世公認的成效。

一、口蹄疫疫苗及選用

1.口蹄疫疫苗的選用。免疫預防，疫苗是關鍵。人類自從發現了口蹄疫病毒，就開始了口蹄疫疫苗的研究?，F在所用的滅活疫苗是高滴度的強毒生產之后經滅活處理獲得，這種生產方式不僅存在散毒和污染環境的風險，還需要高效的生物安全設施和嚴格的操作規程。為此，我國政府對口蹄疫的研發和生產有嚴格的要求，由指定機構進行。中國農業部指定中農威特生物科技股份有限公司為唯一生產全系列口蹄疫疫苗的廠家。公司歷史悠久，其前身是蘭州獸醫研究所的生物制品車間，從20世紀50年代開始，就開始了口蹄疫疫苗的研發和生產，為口蹄疫的防控發揮了舉足輕重的作用。

防治口蹄疫等于防治七種病或多種病，免疫用疫苗毒株必須與流行毒株匹配，免疫才有效。因為，口蹄疫病毒在不斷地發生著變異，有7個血清型，各血清型間無交叉免疫性，型內各毒株間的免疫原性差異很大，有的能夠交叉保護，有的不能交叉保護。在病毒發生變異之后，原有的口蹄疫疫苗對新的流行毒株就有可能沒有保護或保護力下降，所以在選用口蹄疫疫苗時，必須需要考慮血清型的一致性、毒株的匹配性，同時，還需要考慮疫病的流行強度，流行強度越大，需要的疫苗效力越高。

2.口蹄疫疫苗簡介。口蹄疫疫苗的不斷改進和使用，為口蹄疫的有效防控發揮了決定性的作用。隨著口蹄疫疫情的變化，現已研制出了多種相關的疫苗，并有多種新型疫苗在研制的進程中。

（1）牛口蹄疫O型、A型雙價滅活疫苗。2013年，口蹄疫的流行形勢又發生了變化。以2010年出現的緬甸98毒株O型為主的口蹄疫威脅還沒有減弱，又出現了茂名毒株的A型口蹄疫的流行。為此，中農威特公司立即啟用了口蹄疫O型、A型雙價滅活疫苗的戰略應急儲備技術。對工藝和設備等進行了升級改造，采用了最先進的和擁有自主知識產權的抗原濃縮和純化等技術，全面提升了抗原的免疫原性和疫苗的效力。目前正在被大型養殖場所普遍使用，表現出了很好的防控效果。

（2）口蹄疫O型、亞洲I型、A型三價滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+Asial/JSL/ZK/06株+Re-A/WH/09株）。本疫苗的優點是抗原譜廣、保護性強，選用的制苗毒株既能預防現行優勢流行毒株，又能覆蓋、控制既往流行毒株。O型毒株選用2010年在廣東白云區采集分離到的與目前流行毒株最為匹 配 的O/MYA98/BY/2010株，是當前O型口蹄疫防控的最佳制苗毒株。A型毒株為Re-A/WH/09株，通過人工改造基因，既能預防A/WH/09株，也能預防A/MM/2013株。Asial毒株選用的是Asial/JSL/ZK/06毒株，該制苗毒株所制造的疫苗為我國亞洲Ⅰ型口蹄疫的防控發揮了關鍵作用，有力地阻止了亞洲Ⅰ型口蹄疫在我國的蔓延。

（3）口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）?？谔阋逴型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）是國家/OIE口蹄疫參考實驗室和中農威特公司，為應對2010年突發的緬甸98（MYA/98）毒株口蹄疫疫情而研制的疫苗，可以預防豬、牛、羊等多種偶蹄動物的O型口蹄疫，廣泛使用于全國口蹄疫的強制免疫接種和規?；B殖場口蹄疫的防控?？谔阋逴型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）對當前流行于我國的3個遺傳譜系的5個典型O型口蹄疫代表毒株都具有很好的免疫效力，是抗原性和免疫效果優良的制苗毒株，可以滿足我國當前和今后一段時期內預防O型口蹄疫的需要。

（4）口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09株）?？谔阋逴型、A型二價滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09株）的最大特點是突破了傳統制苗毒株的篩選技術，對制苗毒株的基因進行了人工改造，突破了常規疫苗種毒自然屬性缺陷的限制，提升了疫苗種毒制備技術水平。大大地提高了制苗毒株的免疫原性和廣譜性，使其在細胞中的增殖能力更強，抗原的敏感性、靶向性更好。該苗以口蹄疫病毒的復制、抗原性和致病性等前沿技術理論為指導，利用自主發明的單質?？谔阋卟《菊燃夹g系統（反向遺傳操作系統，專利號：ZL201310175324.4），定向設計和優化改造疫苗種毒，構建出病毒產量、抗原匹配性、抗原穩定性等種用性能和安全性明顯優于田間分離毒的疫苗種毒。結合中農威特公司的懸浮培養、抗原濃縮純化等技術工藝，再次提升公司內控質量標準，生產出世界上第一個經過反向遺傳學技術改造的口蹄疫高效滅活疫苗，具有很高的理論和技術創新。

（5）其他口蹄疫疫苗。目前，中農威特公司是經農業部批準生產全系列口蹄疫疫苗的唯一企業，公司產品成為國家口蹄疫疫病強制免疫和規模化養殖場自主免疫的主導疫苗，而且隨著疫情形勢的變化能夠及時推出新的疫苗。除以上具有完全自主知識產權的口蹄疫疫苗之外，還出品口蹄疫A型滅活疫苗（獨家生產），口蹄疫O型、亞洲1型二價滅活疫苗，口蹄疫O型合成肽疫苗等。

二、口蹄疫疫苗的儲運

口蹄疫疫苗對酸、堿、熱、紫外線敏感，偏酸、偏堿、過熱、凍融和陽光曝曬均可使疫苗的有效成分降解，從而使疫苗的免疫效果降低甚至喪失。因此，疫苗必須在在2℃～8℃的溫度下全程冷鏈運輸和保存才能保證其效力。

疫苗運輸時，要妥善包裝，防止運輸過程中發生損壞，使其盡快入庫和/或到達目的地。

疫苗保存時要有相應的冷藏設施和溫度檢測設備，還要避光防潮、分類存放。

疫苗出、入庫應有記錄，使用時采取“先入先用”的原則，即先入庫先出庫，先用失效期近的，后用失效期遠的。

三、口蹄疫免疫操作技術

免疫接種口蹄疫疫苗涉及一系列操作，每步操作都存在著很多技術問題，只有掌握技術，科學操作，才能確保免疫成功。否則，不僅直接影響免疫效果，產生接種應激等，而且還有可能延誤疫情的防控，給養殖場帶來毀滅性的打擊。

1.免疫前的準備

（1）接種器具的準備與消毒滅菌。應按動物的種類和大小選用適合的接種器具，確保將疫苗打入肌肉層。要做好注射器具的清洗、消毒滅菌工作，避免污染。在消毒針頭前，應仔細檢查，若針尖處有鉤絲、堵塞則不能使用，以減少對被免疫動物的的應激和感染。免疫時要及時更換針頭，做到一畜一針頭。

注射器具可用濕熱方法或高壓滅菌，條件不具備時用干凈水加熱煮沸滅菌。經滅菌的注射器和針頭要置于無菌盒內，防止污染。

煮沸滅菌時，加水淹沒器械2cm以上，煮沸30min，待冷卻后放入滅菌器皿中備用。滅菌后的器械應當日使用，當日不用打開后，需重新滅菌，方能使用。

不建議對注射器具用化學方法消毒，因為大部分化學藥物容易殘留，影響疫苗免疫效果。

使用一次性無菌塑料注射器時，要檢查其包裝是否完好和是否在有效期內。一次性物品用過后，應注意銷毀，防止污染環境。

（2）疫苗的檢查與回溫處理。使用前應對疫苗進行眼觀質量檢查，主要檢查包裝、瓶體是否完好無破損，標簽是否與實物一致。運輸、保存不符合2℃～8℃、二維碼信息不準確、瓶體破損、瓶體內顏色異常、有異物、分層的不能使用。

使用時，將疫苗回溫到20℃～25℃進行免疫接種，可有效減少冷應激。

（3）接種前動物檢查。免疫前要充分了解接種動物的品種、健康狀況、飼養情況、免疫及發病史。有病、瘦弱、剛配種10～15 d內的母畜、臨產母畜（30 d內）最好不要接種，等到病畜康復和母畜產后再進行補免。

（4）免疫前小范圍試驗。初次使用疫苗的地區或養殖場，應先進行小范圍試驗（約30頭），無不良反應后，方可擴大接種范圍。

2.免疫注意事項

科學免疫，減少應激反應，倡導“四打”“四不打”。

“四打”：(1)免疫接種僅對健康牲畜進行；（2）在動物處于休閑、非應激狀態下進行免疫接種；（3）將免疫接種安排在氣候適宜的時間段，如在炎熱季節，應選在清晨或者傍晚進行；（4）經過長途運輸后的動物，充分休息24 h以上再進行免疫接種。

“四不打”：（1）動物在宰殺前20 d之內不要對其進行免疫接種；（2）天氣突變、轉群、斷奶、換料、吃料、飽腹期間暫不要進行免疫接種；（3）對患病、瘦弱牲畜，及斷奶前幼畜暫不接種，待牲畜康復、恢復正常后方可免疫接種；（4）配種10～15 d內的母畜、臨產母畜（30 d內）最好不要接種，等到母畜產后再進行補免。

人員要求：（1）接種工作要求由經過培訓的專業人員嚴格遵守操作規程，在更換衣服、鞋、帽和消毒之后進行。

（2）接觸過病畜人員，不應再參加安全畜群的免疫接種，以防疫病的傳播。若必須參加，則一定要通過淋浴、洗頭、換衣、咳痰和隔離一整夜后，方可進行免疫操作。

緊急免疫接種：（1）緊急情況下，如疫病暴發時，對疫區和受威脅區尚未感染的動物應該緊急免疫接種，以形成免疫隔離帶。（2）疫苗對安全區、受威脅區及疫區牲畜均可使用。必須依序免疫接種，先接種安全區的牲畜，然后再接種受威脅區的牲畜，最后接種疫區內的牲畜。

剛經過長途運輸的新引進動物，必須充分休息后方可接種疫苗，一般以休息24 h以上較為合適。緊急情況下，如疫病暴發時，對沒有感染的動物應該迅速接種，特殊情況下應靈活決定。

疫苗注射時，針頭應與與體表呈90°垂直注入，確保將疫苗注入肌肉內，不可注入脂肪層或者皮下。接種部位應選擇在頸部和臀部肌肉比較厚的部位，接種時應對動物的注射部位進行剪毛消毒。免疫接種口蹄疫疫苗時，不要同時接種其它疫苗。

使用前和使用過程中，應將疫苗充分搖勻，但切不可劇烈振蕩，以防氣泡產生。已經吸出的疫苗不可再回注于疫苗瓶內。如果注射劑量大，可分點注射。禁止以“飛針”方式注射，以避免造成疫苗注射劑量不夠和注射部位不準確。疫苗瓶開啟后，疫苗應當天用完且做好免疫記錄。注射時不能用一個注射器吸取兩種疫苗混用。

免疫是預防疫病的重要手段之一，同時，還需加強飼養管理、消毒和對其他疾病的防治。

3.疫苗免疫接種

疫苗接種要嚴格按照說明書規定的接種途徑、劑量、注意事項，以及科學的免疫程序進行。

免疫程序是通過大量科學試驗制定的。免疫程序的制定必須要考慮到當地疫情狀況、動物的飼養管理（如斷奶時間、營養、轉群、飼養期等）、動物的母源抗體水平、疫苗抗原的免疫性、疫苗抗原含量、免疫次數、接種動物的反應性等。因此，根據免疫效果，需要在實踐中不斷總結和完善。

尤其是基礎免疫，首先應該考慮當地的疫情狀況，其次要考慮機體母源抗體水平或原有的抗體水平、首免時間、基礎免疫次數及劑量。首次免疫后，必須在一個月內加強免疫一次，然后間隔3～4月加強免疫一次。

程序（僅供參考）：首次使用O、A雙價疫苗必須要在30 d以內加強一次；母畜劑量2 ml為佳，一年3～4次；所產仔畜50日齡左右接種2 ml，30 d后再打一針，然后間隔3～4個月加免一次，每次每頭2 ml；未免疫或免疫間隔長的母畜所產仔畜，則提前到28～35日齡或更早開始。

四、免疫不良反應的觀察與預防

接種疫苗后個別動物可能會產生不良反應。一般的不良反應表現為，個別動物注射部位輕微腫脹，體溫升高0.5℃～1℃，減食或停食1～2日，奶牛可出現一過性泌乳量減少，隨著時間延長，癥狀逐漸減輕消失。因品種、個體的差異，個別動物接種后可能會出現由過敏原引起的嚴重不良反應，如焦躁不安、呼吸加快、肌肉震顫、可視黏膜充血、瘤胃鼓氣、鼻腔出血等，甚至因搶救不及時而死亡；少數懷孕母畜可能出現流產。出現嚴重過敏反應時，應及時使用腎上腺素、地塞米松等藥物進行搶救，同 時采用適當的輔助治療措施。

五、免疫效果檢測

免疫動物的血清抗體水平與抗強毒侵襲的免疫保護有一定的正相關。因此，抗體監測能夠間接反映免疫接種效果和水平，為制定合理免疫程序提供依據。對于已經實施了免疫接種的動物，必需監測免疫動物的群體抗體水平，以評估動物群體的免疫水平和抗感染能力。

接種口蹄疫疫苗時要求應免動物100%免疫率，免疫抗體效價合格率達到70%以上。若免疫合格率較低，免疫效果不理想，未達到國家規定的抗體效價合格率水平，應當分析原因、采取措施、及時補免，提高免疫效果。同時，也要結合流行病學、臨床癥狀、血清學指標、預防效果等對免疫效果做出綜合性判斷。

監測程序（僅供參考）：

采血時間：豬免疫28d后，其他畜21 d后，進行免疫效果監測。

監測方法與抗體合格率判定標準：

亞洲I型口蹄疫：液相阻斷ELISA；抗體效價≥26判定為合格。

O型口蹄疫：滅活類疫苗采用正向間接血凝試驗、液相阻斷ELISA，合成肽疫苗采用VP1結構蛋白ELISA；滅活類疫苗抗體正向間接血凝試驗的抗體效價≥25判定為合格，液相阻斷ELISA的抗體效價≥26判定為合格；合成肽疫苗VP1結構蛋白抗體ELISA的抗體效價≥25判定為合格。

A型口蹄疫：液相阻斷ELISA；抗體效價≥26判定為合格。

口蹄疫疫苗的應用，已使口蹄疫的疫情得到了有效的防控，大幅度地減輕了疫情的危害。中農威特公司開展的《針對新傳入我國口蹄疫流行毒株的高效疫苗的研制及應用》榮獲了國家科學技術進步二等獎，國家現已啟動了亞洲I型口蹄疫免疫全面退出、開展非免疫無疫建設工作，我國口蹄疫控制策略獲得世界動物衛生組織（OIE）頒證認可等等事實顯示，有步驟、有計劃地實施免疫接種口蹄疫疫苗，可以增強動物抵抗口蹄疫病毒的能力，有效預防和控制口蹄疫的暴發和流行，有效地保證了畜牧業的發展，使人類朝著最終消滅口蹄疫的方向前進。