病毒滅活技術(shù)在血站工作中的運(yùn)用分析

查干娜，鄔果枝

（內(nèi)蒙古包頭市中心血站，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

眾所周知，血液質(zhì)量會(huì)直接對(duì)臨床用血的效果及安全性造成影響，患者在輸血后發(fā)生感染或者在經(jīng)輸血過(guò)程中被傳染了其他疾病，都會(huì)對(duì)其生命安全造成威脅。雖然血站已經(jīng)實(shí)施了各類血液安全策略，但也很難確保采集到的血液及其相關(guān)制品絕對(duì)的安全，依舊面臨不良輸血事件的發(fā)生[1]。有資料提示，全球每年依舊有很多艾滋病感染是由于輸血不安全所致。因此，在輸血或者制備血液制品中應(yīng)當(dāng)積極實(shí)施病毒的滅活處理，保障輸血安全。

1 分析影響輸血病毒滅活效果的原因

在臨床用血前需要對(duì)病毒進(jìn)行滅活處理后方能投入使用，臨床中影響滅活效果的因素有很多，最常見(jiàn)的有血液檢測(cè)的敏感度、血液制備過(guò)程以及滅活的方法、指示病毒要求等等，均會(huì)對(duì)滅活效果造成影響。在我國(guó)，相關(guān)部門已經(jīng)明確規(guī)定了輸血病毒滅活的一些操作及原則，同時(shí)頒布了相關(guān)的滅活原則，明確指出了指示病毒的要求應(yīng)當(dāng)選取一些可以經(jīng)過(guò)血液傳播的病毒，比如最常見(jiàn)的HIV病毒；若不能采取相關(guān)病毒則需要盡可能選擇與之理化性質(zhì)相同的指示病毒，這類指示病毒的滴度一般不低于106 TU/mL。

2 血液病毒滅活標(biāo)準(zhǔn)

臨床實(shí)踐證實(shí)，采取一些可重復(fù)性以及靈敏度適宜的方法對(duì)血液進(jìn)行檢測(cè)后，若檢出不出活性的病毒，才能將其視為成功滅活。在我國(guó)相關(guān)部門所頒布的標(biāo)準(zhǔn)原則中已經(jīng)明確指出了，具體滅活病毒的降低量應(yīng)當(dāng)不低410 gs，按照這個(gè)規(guī)范進(jìn)行滅活，也屬于有效滅活。如果由于檢測(cè)方法的原因?qū)е虏《镜慕档土繉?dǎo)致病毒滅活時(shí)出現(xiàn)量變，此時(shí)需要對(duì)滅活動(dòng)力學(xué)展開(kāi)研究；因?yàn)橐话銇?lái)說(shuō)滅活并非簡(jiǎn)單的一級(jí)反應(yīng)，常常出現(xiàn)起始反應(yīng)快，然后逐步變慢的情況。在實(shí)際操作中假如病毒的殘留量在短時(shí)間內(nèi)會(huì)降到最低值，則由此說(shuō)明該種滅活方法效果顯著；反之則提示滅活方法及其效果不佳，甚至出現(xiàn)指示病毒殘留，則提示該種滅活方法無(wú)效，需要更換另一種滅活技術(shù)。

3 分析血站輸血前病毒滅活效果評(píng)價(jià)方法

以往血站展開(kāi)病毒滅活處理操作的時(shí)候，常常選擇的滅活評(píng)價(jià)方法有很多，如終點(diǎn)滴定、細(xì)胞感染、動(dòng)物接種、蝕斑形成以及蛋白質(zhì)組學(xué)等方法，經(jīng)過(guò)不斷研究后，PCR作為一種新型的輸血檢測(cè)技術(shù)被運(yùn)用，對(duì)于病毒的滅活處理效果也非常好，具體操作情況如下。

PCR技術(shù)主要是指體外核酸擴(kuò)增，具備較高的靈敏度，但同時(shí)也均在一定的局限性，即難以將已經(jīng)滅活的病毒與未滅活的病毒區(qū)分開(kāi)，在滅活病毒量驗(yàn)證過(guò)程中并不建議運(yùn)用該技術(shù)，用于生產(chǎn)中的病毒去除量驗(yàn)證則效果顯著，所以在血站及血液制品制備中較為適用[2]。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，在原有的PCR技術(shù)基礎(chǔ)上重新發(fā)展了一種10 ng PCR技術(shù)，屬于分子生物技術(shù)，其同時(shí)涉及了延伸能力極強(qiáng)但缺乏3’-5’外切酶活性耐熱的DNA聚合酶、具有3’-5’外切酶活性、Pfu、Vent等校讀功能酶等，可以優(yōu)化擴(kuò)增核酸的長(zhǎng)片段。這種長(zhǎng)鏈PCR新技術(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物較傳統(tǒng)PCR的長(zhǎng)，所以在檢測(cè)、評(píng)估血液病毒滅活效果有顯著優(yōu)勢(shì)。

首先，10 ng PCR技術(shù)可以將病毒核酸被破壞的程度反映出來(lái)，研究人員指出，使用該技術(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物越長(zhǎng)則病毒核酸破壞程度越低，擴(kuò)增產(chǎn)物超過(guò)或等于2.0 kb時(shí)滅活病毒依舊存在感染性，因此該技術(shù)顯著反映滅活效果。其次，該技術(shù)的靈敏度高，具有極強(qiáng)的特異性；臨床研究人員通過(guò)該技術(shù)滅活HBV之后發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)1.1 kb時(shí)，能夠滅活后感染性評(píng)價(jià)的最低極限，即1.1 kb反映DNA的損傷程度，若≥1.1 kb則提示有感染性。此外，病毒核酸多出斷裂的時(shí)候采取10 ng PCR技術(shù)檢測(cè)的產(chǎn)物較長(zhǎng)，這樣就能對(duì)病毒是否具備感染性進(jìn)行了良好的判斷，同時(shí)也能反映出滅活效果。最后，將長(zhǎng)鏈PCR技術(shù)作為評(píng)價(jià)病毒滅活感染性的指標(biāo)，也與具體病毒滅活機(jī)制及方法有關(guān)，資料提示該技術(shù)可以作為評(píng)價(jià)紫外線滅活病毒后感染性的方法，但是卻不能作為評(píng)價(jià)熱力滅活后感染性的方法，因?yàn)闊崃缁罘椒◣缀醪粫?huì)影響病毒核酸[3]。

總而言之，長(zhǎng)鏈PCR技術(shù)不會(huì)受動(dòng)物模型、細(xì)胞模型、產(chǎn)生CPE等因素所影響，可以對(duì)靶病毒進(jìn)行直接檢測(cè)，同時(shí)也能詳細(xì)反映出病毒核酸受破壞的情況，更能對(duì)已病毒滅活后的感染性情況進(jìn)行評(píng)估，可以說(shuō)其在血站中的運(yùn)用價(jià)值非常高。

[1] 陳 榮,孫艷杰.輸血風(fēng)險(xiǎn)因素及護(hù)理措施的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2015,11(24):70-73.

[2] 苑玉鳳,王志鵬,王 強(qiáng),等.不同滅菌方式對(duì)病毒滅活血漿制品質(zhì)量的影響研究[J].黑龍江科技信息,2017,10(01):153.

[3] 楊春暉,陳利民.輸血傳播病毒篩查技術(shù)應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)輸血雜志,2016,24(07):669-672.