病毒滅活技術在血站工作中的運用分析

查干娜，鄔果枝

（內蒙古包頭市中心血站，內蒙古 包頭 014010）

眾所周知，血液質量會直接對臨床用血的效果及安全性造成影響，患者在輸血后發生感染或者在經輸血過程中被傳染了其他疾病，都會對其生命安全造成威脅。雖然血站已經實施了各類血液安全策略，但也很難確保采集到的血液及其相關制品絕對的安全，依舊面臨不良輸血事件的發生[1]。有資料提示，全球每年依舊有很多艾滋病感染是由于輸血不安全所致。因此，在輸血或者制備血液制品中應當積極實施病毒的滅活處理，保障輸血安全。

1 分析影響輸血病毒滅活效果的原因

在臨床用血前需要對病毒進行滅活處理后方能投入使用，臨床中影響滅活效果的因素有很多，最常見的有血液檢測的敏感度、血液制備過程以及滅活的方法、指示病毒要求等等，均會對滅活效果造成影響。在我國，相關部門已經明確規定了輸血病毒滅活的一些操作及原則，同時頒布了相關的滅活原則，明確指出了指示病毒的要求應當選取一些可以經過血液傳播的病毒，比如最常見的HIV病毒；若不能采取相關病毒則需要盡可能選擇與之理化性質相同的指示病毒，這類指示病毒的滴度一般不低于106 TU/mL。

2 血液病毒滅活標準

臨床實踐證實，采取一些可重復性以及靈敏度適宜的方法對血液進行檢測后，若檢出不出活性的病毒，才能將其視為成功滅活。在我國相關部門所頒布的標準原則中已經明確指出了，具體滅活病毒的降低量應當不低410 gs，按照這個規范進行滅活，也屬于有效滅活。如果由于檢測方法的原因導致病毒的降低量導致病毒滅活時出現量變，此時需要對滅活動力學展開研究；因為一般來說滅活并非簡單的一級反應，常常出現起始反應快，然后逐步變慢的情況。在實際操作中假如病毒的殘留量在短時間內會降到最低值，則由此說明該種滅活方法效果顯著；反之則提示滅活方法及其效果不佳，甚至出現指示病毒殘留，則提示該種滅活方法無效，需要更換另一種滅活技術。

3 分析血站輸血前病毒滅活效果評價方法

以往血站展開病毒滅活處理操作的時候，常常選擇的滅活評價方法有很多，如終點滴定、細胞感染、動物接種、蝕斑形成以及蛋白質組學等方法，經過不斷研究后，PCR作為一種新型的輸血檢測技術被運用，對于病毒的滅活處理效果也非常好，具體操作情況如下。

PCR技術主要是指體外核酸擴增，具備較高的靈敏度，但同時也均在一定的局限性，即難以將已經滅活的病毒與未滅活的病毒區分開，在滅活病毒量驗證過程中并不建議運用該技術，用于生產中的病毒去除量驗證則效果顯著，所以在血站及血液制品制備中較為適用[2]。隨著技術的不斷發展，在原有的PCR技術基礎上重新發展了一種10 ng PCR技術，屬于分子生物技術，其同時涉及了延伸能力極強但缺乏3’-5’外切酶活性耐熱的DNA聚合酶、具有3’-5’外切酶活性、Pfu、Vent等校讀功能酶等，可以優化擴增核酸的長片段。這種長鏈PCR新技術擴增產物較傳統PCR的長，所以在檢測、評估血液病毒滅活效果有顯著優勢。

首先，10 ng PCR技術可以將病毒核酸被破壞的程度反映出來，研究人員指出，使用該技術擴增產物越長則病毒核酸破壞程度越低，擴增產物超過或等于2.0 kb時滅活病毒依舊存在感染性，因此該技術顯著反映滅活效果。其次，該技術的靈敏度高，具有極強的特異性；臨床研究人員通過該技術滅活HBV之后發現，乙肝病毒擴增產物長1.1 kb時，能夠滅活后感染性評價的最低極限，即1.1 kb反映DNA的損傷程度，若≥1.1 kb則提示有感染性。此外，病毒核酸多出斷裂的時候采取10 ng PCR技術檢測的產物較長，這樣就能對病毒是否具備感染性進行了良好的判斷，同時也能反映出滅活效果。最后，將長鏈PCR技術作為評價病毒滅活感染性的指標，也與具體病毒滅活機制及方法有關，資料提示該技術可以作為評價紫外線滅活病毒后感染性的方法，但是卻不能作為評價熱力滅活后感染性的方法，因為熱力滅活方法幾乎不會影響病毒核酸[3]。

總而言之，長鏈PCR技術不會受動物模型、細胞模型、產生CPE等因素所影響，可以對靶病毒進行直接檢測，同時也能詳細反映出病毒核酸受破壞的情況，更能對已病毒滅活后的感染性情況進行評估，可以說其在血站中的運用價值非常高。

[1] 陳 榮,孫艷杰.輸血風險因素及護理措施的研究進展[J].中國醫藥導報,2015,11(24):70-73.

[2] 苑玉鳳,王志鵬,王 強,等.不同滅菌方式對病毒滅活血漿制品質量的影響研究[J].黑龍江科技信息,2017,10(01):153.

[3] 楊春暉,陳利民.輸血傳播病毒篩查技術應用研究進展[J].中國輸血雜志,2016,24(07):669-672.