原發性腎病綜合征患兒外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA表達變化及其意義

龍彪,曾冬梅,羅莉

(黔東南州人民醫院,貴州黔東南 556000)

原發性腎病綜合征患兒外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA表達變化及其意義

龍彪,曾冬梅,羅莉

(黔東南州人民醫院,貴州黔東南556000)

目的觀察原發性腎病綜合征(PNS)患兒外周血IL-18、Fas mRNA表達變化，并探討其臨床意義。方法選擇68例PNS患兒為觀察組，其中單純型PNS45例、腎炎型PNS23例，另選47例健康體檢兒童為對照組。抽取兩組患兒外周血分離單個核細胞，采用實時熒光定量PCR法檢測Fas、IL-18 mRNA。結果觀察組、對照組兒童外周血單個核細胞IL-18 mRNA表達量分別為0.13±0.02、0.02±0.01，Fas mRNA表達量分別為0.05±0.02、0.48±0.08。觀察組外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA與對照組相比P均<0.05。單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個核細胞IL-18 mRNA表達量分別為0.08±0.06、0.19±0.09，Fas mRNA表達量分別為0.51±0.13、0.32±0.11。觀察組單純型PNS患兒外周血單個核細胞IL-18 、Fas mRNA表達量與腎炎型PNS相比P均<0.05。 Pearson相關性分析結果顯示觀察組患兒、單純型PNS患兒、腎炎型PNS患兒外周血單個核細胞Fas mRNA表達量與IL-18 mRNA表達量呈負相關(r=-0.468、-0.567、-0.327，P均< 0.05)。結論PNS患兒外周血單個核細胞IL-18表達升高、FAS mRNA表達下降。檢測外周血單個核細胞IL-18 、FAS mRNA有助于鑒別判斷單純型和腎炎型PNS。

白細胞介素18;Fas蛋白;原發性腎病綜

原發性腎病綜合征(PNS)是各種原因引起腎小球的通透性增加，進而導致水腫、高血脂癥、大量蛋白尿、低蛋白血癥等特征性的臨床癥狀[1]。兒童腎病綜合征是泌尿系統常見的疾病[2]。PNS的發病機理目前不是十分明確。IL- 18是重要的炎癥因子，Fas是細胞凋亡標志物[3～5]。IL- 18、Fas是否在PNS發生過程中發揮作用尚無定論。我國臨床將PNS分為單純型和腎炎型兩種類型[6]。這兩種類型的PNS患兒IL- 18、Fas表達情況是否有差異也不明確。為解決上述問題，本研究觀察了PNS患兒外周血單個核細胞IL- 18、Fas mRNA表達變化，并比較了單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個核細胞IL- 18、Fas mRNA表達情況。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月～2017年3月收治的初治PNS患兒68例為觀察組。納入標準：①年齡14歲；②滿足PNS診斷標準[7]，即血清白蛋白(ALB)<25 g/L、24 h尿蛋白定量≥50 mg/(kg·d)、尿蛋白≥+++伴有水腫、高脂血癥等臨床癥狀。排除標準：①繼發性腎病綜合征；②心臟、肝臟功能不全者；③身體患有其他可能影響本研究結果的疾病。其中男38例、女30例，年齡3～9(6.15±3.18)歲。按照《兒童常見腎臟疾病診治循證指南》[8]將患兒分為單純型45例，腎炎型23例。另選同期體檢的健康兒童47例作為對照組，其中男27例、女20例，年齡4～10(7.85±3.71)歲。兩組兒童性別、年齡相比P均> 0.05。本研究已獲得我院醫學倫理委員會批準，患兒及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 外周血單個核細胞Fas 和IL-18 mRNA檢測方法 觀察組患兒入院第2天，對照組患兒體檢時采血5 mL，分離單個核細胞。按照RNA提取試劑盒的說明書進行操作提取RNA。然后反轉錄為cDNA。采用實時熒光定量PCR法進行擴增，以GAPDH為內參照。Fas上游引物序列為5′-ACCAACTATTGCTTCAGCTC-3′，下游引物序列為5′-CTTGCAGGAGCGCACGATCA-3′；IL-18上游引物序列為5′-GGCCTCTATTTGAAGATATGACTGATT-3′，下游引物序列為5′-CCTCTAGGCTGGCTATCTTTATACATAC-3′；GAPDH上游引物序列為5′-TGGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3′，下游引物序列為5′ - ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC-3′ 。PCR反應條件：94 ℃預變性3 min，然后進行40個循環(94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s)，最后72 ℃延伸5 min，產物在4 ℃恒溫保存。采用2-ΔΔCt表示Fas 和IL-18 mRNA表達量。

2 結果

2.1 觀察組、對照組兒童外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA比較 觀察組、對照組兒童外周血單個核細胞IL-18 mRNA表達量分別為0.13±0.02、0.02±0.01，Fas mRNA表達量分別為0.05±0.02、0.48±0.08。觀察組外周血單個核細胞IL-18 、Fas mRNA表達量與對照組相比，P均<0.05。

2.2 觀察組單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個核細胞Fas、IL-18 mRNA比較 單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個核細胞IL-18 mRNA表達量分別為0.08±0.06、0.19±0.09，Fas mRNA表達量分別為0.51±0.13、0.32±0.11。觀察組單純型PNS患兒外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA表達量與腎炎型PNS相比P均<0.05。

2.3 觀察組患兒外周血單個核細胞Fas、IL-18 mRNA表達量的相關性 Pearson相關性分析結果顯示觀察組患兒外周血單個核細胞Fas mRNA表達量與IL-18 mRNA表達量呈負相關(r=-0.468，P<0.05)，單純型PNS患兒中外周血單個核細胞Fas mRNA表達量與IL-18 mRNA表達量呈負相關(r=-0.567，P<0.05)，腎炎型PNS患兒中外周血單個核細胞Fas mRNA表達量與IL-18 mRNA表達量呈負相關(r=-0.327，P<0.05)。

3 討論

兒童PNS主要由腎小球毛細血管的通透性增加，導致血漿中的白蛋白從尿液中大量丟失。有研究表明，原發性腎病綜合征占小兒腎病的90%[7～9]，是小兒中比較常見的腎小球疾病，但其發病機制目前尚未清楚。近年來的研究發現，T淋巴細胞亞群可能參與PNS的發生發展過程，PNS患兒的T淋巴細胞分泌的細胞因子異常于正常兒童，并介導細胞的免疫應答過程，進而在兒童體內引發遲發型的超敏反應[10～12]。

IL-18是由活激活后的單核細胞分泌，是近年來新發現的炎癥因子，可以加強NK細胞的毒性作用能力，可參與新月體腎炎以及急性缺血性腎功能衰竭過程[13～15]。已有研究報道，PNS患兒在治療前后的外周血中的IL-18 mRNA差異顯著，且與24h尿蛋白定量有著呈顯著的正相關性[16]。本研究結果顯示觀察組患兒外周血單個核細胞IL-18 mRNA高于對照組，與其結果一致。Fas又稱細胞凋亡蛋白1，是細胞凋亡過程中重要的細胞信號轉導因子，Fas及其配體FasL與細胞外細胞因子，如白細胞介素、轉化生長因子等結合，將凋亡信號轉導到細胞內，啟動細胞凋亡程序。本研究結果顯示，觀察組患兒外周血單個核細胞Fas mRNA低于對照組，表明PNS患兒外周血單個核細胞的凋亡活性弱于對照組，細胞免疫功能處于亢進狀態，這符合已知的PNS的發病機理。本研究結果顯示，觀察組患兒外周血單個核細胞Fas與IL-18 mRNA表達水平呈負相關，說明在PNS發病過程中Fas與IL-18之間相互作用的方式可能是相互拮抗或者負性調節。結合文獻筆者認為IL-18可能是Fas的上游調控因子，對Fas的表達發揮負性調控作用。

腎病綜合癥的類型中，單純型主要以腎臟的微小病變為主，而腎炎型主要以非微小型病理改變為主，如系膜增生性腎炎、膜性腎炎、局灶節段性腎小球硬化等等。從病理損傷程度方面分析，腎炎型PNS的病情要比單純型PNS重，而且更容易引起激素類藥物耐藥[17]。本研究結果提示，單純型組PNS患兒外周血單個核細胞IL-18 mRNA表達低于腎炎組、Fas mRNA表達高于腎炎組，也佐證了腎炎型PNS患者的病情比單純型PNS輕，同時提示我們檢測外周血單個核細胞IL-18、Fas mRNA表達有助于鑒別單純型和腎炎型PNS。

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貴州省衛生廳重點基金資助項目(GW-2014B-101237)。